基质金属蛋白酶2及CD147在卵巢上皮性肿瘤中的表达.doc

1、基质金属蛋白酶 2 及 CD147 在卵巢上皮性肿瘤中的表达【关键词】 基质金属蛋白酶-2 关键词: 基质金属蛋白酶-2;CD147;免疫组化;卵巢肿瘤 摘 要:目的 了解基质金属蛋白酶（ MMP-2）及 CD147 在卵巢良、恶性上皮性肿瘤中的表达，探讨其与卵巢癌转移发生的关系. 方法 用免疫组化 SP 法对 47 例卵巢癌组织、19 例交界性上皮性卵巢肿瘤、17 例良性上皮性卵巢肿瘤组织中 MMP-2 及 CD147 的表达情况进行了检测. 结果 MMP-2 在恶性及交界性上皮性卵巢肿瘤中的强阳性表达率分别为 59%，42%，明显高于良性组强阳性表达率 30%（P0.05） ，在卵巢癌中

2、MMP-2 的表达与卵巢癌的临床分期有关，期卵巢癌强阳性表达率 71%，明显高于期卵巢癌强阳性表达率 37%（P0.05） ，与分化程度无明显关联，但有淋巴结转移的病例强阳性表达率 87%，明显高于无淋巴结转移组.CD147 在恶性及交界卵巢上皮性肿瘤中的强阳性表达率分别为64%，57%，而良性组则未见 CD147 的表达.在卵巢癌中，CD147 的强阳性表达率与临床分期有关，期的癌组织强阳性表达率 74%，明显高于期强阳性表达率 45%，在不同分化程度卵巢癌组织中 CD147 的强阳性率无明显差异，有无淋巴结转移的卵巢癌组织中 CD147 强阳性表达率差异显著. 结论 MMP-2 及 CD1

3、47 均与卵巢癌的分期及淋巴结转移有关，CD147 与 MMP-2 的产生关系密切. Keywords:matrix metalloproteinase-2;CD147;immunohis-tochemistry;ovarian epithelial tumor Abstract:AIM To investigate the expression of matrix met-alloproteinase-2（MMP-2）and CD147in ovarian epithelial tumor.METHODS The expression of MMP-2and CD147was detecte

4、d in malignant，borderline and benign ovarian tis-sues by immunohistochemical SP method.Monoclonal anti-bodies against MMP-2and CD147were used.RESULTS In-tense expression rates of MMP-2in the malignant，border-line，benign epithelial tumor tissues of ovary was59%，42%，30%respectively ，There were a signi

5、ficant difference between malignant，borderline and benign tumors（P0.05）.In ovarian cancer， the expression of MMP-2had a significant relevance to clinical phases and lymph node metas-tasis.The intense expression rate（71%）in phasesof ovarian cancer was much higher than that in phases（37%）;no relevance

6、 was observed with pathological grades.The intense expression rates of CD147in the malignant，bor-derline，benign ovarian epithelial tumor were64%，57%，0respectively.Significant difference was observed between ma-lignant，borderline and benign ovarian epithelial tumor.In o-varian cancer，the expression o

7、f CD147was associated with clinical phases;the intense expression rate（74%）in phasesof ovarian cancers was much higher than that in phas-es（45%）.18of23cases with lymph node metastasis had intense expression of CD147，while only12of24cases without lymph node metastasis had intense staining of CD147.No

8、 association was observed with pathological grades.CONCLUSION Both MMP-2and CD147have rele-vance to clinical phases and lymph node metastasis of ovarian cancer，but CD147isnt the unique factor in increasing the expression of MMP-2to contribute to the metastasis of ovari-an cancer. 0 引言 卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，由

9、于 70%患者就诊时已属晚期，常形成难治的复发及转移，故也是妇科恶性肿瘤的首要死因.肿瘤细胞从原发瘤脱离形成转移灶的过程中，需要反复降解细胞外基质及基底膜构成的自然屏障，因此能降解细胞外基质及基底膜的酶的产生与卵巢癌的转移密切相关.基质金属蛋白酶（MMP-2）由于能降解细胞外基质的主要成分型胶原，被认为在肿瘤的转移中发挥重要作用1 .CD147 则由于能刺激基质金属蛋白酶的产生亦有利于肿瘤细胞的转移.我们利用免疫组化法检测 MMP-2 及 CD147 在卵巢上皮性肿瘤中的表达以探索 MMP-2 及 CD147与卵巢癌转移发生的相关性. 1 材料和方法 1.1 材料 收集西京医院妇科 1993-

10、01/1999-03 住院患者 83 例，均为初诊，术前未经化疗及放疗.其中良性上皮性卵巢肿瘤 17（浆液性10，粘液性 7）例，交界性上皮性卵巢肿瘤 19（浆液性 11，粘液性 8）例，卵巢癌 47（浆液性癌 33，粘液性癌 11，子宫内膜样癌 2，透明细胞癌 1）例.83 例标本均经手术切除.卵巢癌按细胞分化程度采用三级分类法，级 12 例，级 16 例，级 19 例.临床分期按 1985 年 FIGO 分期标准分期，期 16 例，期 31 例.淋巴结转移 23 例. 1.2 主要试剂 MMP-2 单克隆抗体，SP 超敏试剂盒购自福州迈新公司，CD147 单克隆抗体购自深圳晶美公司. 1.

11、3 方法 标本均经 40g L-1 多聚甲醛固定，常规石蜡包埋，作5m 连续切片，分别进行 HE 染色及免疫组化染色.切片常规脱蜡至水，H2 O2 灭活内源性过氧化物酶，微波修复抗原，正常山羊血清封闭，分别滴加 MMP-2 单抗及 CD147 单抗，4过夜，滴加生物素化二抗及过氧化物酶标记的抗体，DAB 显色，苏木精复染，脱水透明封片.将 MMP-2 及CD147 染色阳性的卵巢癌组织作为阳性对照，阴性对照选择 PBS 代替一抗. 1.4 判断标准 MMP-2 以细胞质呈清晰棕黄色为阳性，CD147 以胞膜及胞质呈棕黄色为阳性.根据显色强度及范围分为:阴性（-）:无阳性细胞染色;弱阳性（+）:

12、阳性细胞小于 50%或显色浅;强阳性（）:切片中阳性细胞大于 50%或显色深. 统计学处理:采用 2 检验. 2 结果 2.1 MMP2 及 CD147 在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达 MMP-2 表达在卵巢上皮性肿瘤细胞的胞质（Fig1） ，在良性、交界性卵巢上皮性肿瘤及卵巢癌组织中的强阳性表达率分别为 30%，42%和 59%，阳性表达率分别为 59%，90%和 95.8%，均呈梯度增高，交界性及卵巢癌组织中的强阳性表达率及阳性表达率与良性组相比差异均有显著性（P0.05） ，恶性与交界性组强阳性表达率及阳性表达率相比差异不明显.CD147 的表达为浆膜型（Fig2） ，在恶性、交界性及良性

13、卵巢上皮性肿瘤组织中的强阳性表达率分别为 64%，57%和 0，阳性表达率分别为 79%，74%及 0.交界性及卵巢癌组织中的强阳性表达率及阳性表达率与良性组相比差异显著（P0.05） ，恶性与交界性组强阳性表达率及阳性表达率无明显差异（Tab1）. 图 1 图 2 略 表 1 各类卵巢上皮性肿瘤组织中 MMP-2 及 CD147 的表达 略 2.2 卵巢癌不同临床期别的 MMP2 及 CD147 的表达 47 例卵巢癌中，MMP-2 及 CD147 的表达情况与临床分期的关系（Tab2）.其中 MMP-2 在期与期的强阳性表达率差异明显（P0.05） ，但阳性表达率与临床期别无关.CD147

14、 在卵巢癌组织中的强阳性表达率及阳性表达率均与卵巢癌的临床分期有关（P0.05）. 表 2 不同临床期别卵巢癌组织中 MMP-2 和 CD147 的表达 略 2.3 MMP2 及 CD147 表达与组织学分级及淋巴结转移的关系 47 例卵巢癌中，MMP-2 及 CD147 与卵巢癌病理分级及淋巴结转移的关系（Tab3）.MMP-2 在癌组织中强阳性表达率及阳性表达率与卵巢癌的病理分级均无关，但有淋巴结转移的癌组织 MMP-2 强阳性表达率明显高于无淋巴结转移组（P0.05） ，而 MMP-2 的阳性表达率高低与有无淋巴结转移关系不明显.CD147 在卵巢癌组织中的强阳性及阳性表达情况与卵巢癌的

15、病理分级均无关.23 例有淋巴结转移的病例 CD147 的强阳性表达率及阳性表达率均高于无淋巴结转移的癌组织（P0.05）. 2.4 MMP2 及 CD147 在卵巢癌中表达的相关性 MMP-2 及 CD147 的联合表达率为 66%，多同时表达，强阳性表达率二者相比差异不明显，但MMP-2 阳性表达率 95.8%明显高于 CD147 的阳性表达率 72%（P0.05）. 3 讨论 基质金属蛋白酶（MMPs）是一组结构和功能相关的锌离子依赖性内肽酶，至少由 20 种能降解细胞外基质的酶类组成2-4 .MMP-2 是其中一种，它以无活性的前体形式产生，激活后可以分解基底膜的主要成分 型胶原5，6

16、 .因此除在正常的胚胎发育、器官发生、血管形成及子宫复旧等生理过程中参与细胞外基质调节7，8 外，在肿瘤的转移发生中也具有重要意义.当 MMP-2 表达升高时，肿瘤的转移能力增强9，10 .我们的实验证明，随着卵巢癌分期的升高、肿瘤细胞的播散，MMP-2 的强阳性表达亦升高.但未发现 MMP-2 表达过量与肿瘤的组织学分级之间的明显相关性.另外，交界性卵巢上皮性肿瘤与卵巢 癌中 MMP-2的表达亦无明显差异，这也从一个侧面解释了分化较好的癌组织在临床上却常发生腹腔播散及淋巴结转移11 . 表 3 MMP-2 和 CD147 在卵巢癌中的表达及其与组织学分级和淋巴结转移的关系 略 CD147 是

17、分子量为 5060ku 的跨膜糖蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，主要功能为参与细胞-细胞或细胞-基质的粘附12 .CD147 作为细胞外基质金属蛋白酶刺激物（EMMPRIN） ，具有刺激肿瘤细胞周围间质成纤维细胞分泌型胶原酶的能力，促进肿瘤细胞的转移13，14 .我们的实验显示，随着肿瘤临床分期的增高、淋巴结的转移，CD147 的表达亦增强，这说明 CD147 的表达的确与肿瘤的转移有一定关联.且 CD147 与MMP-2 多同时表达，联合表达率为 66%，强阳性表达率之间无明显差异，说明 CD147 确能促进 MMP-2 的产生.但 MMP-2 表达阳性率较高却与临床分期无关，而 CD147

18、的阳性表达率较 MMP-2 低且与临床分期有关，同时良性上皮性卵巢肿瘤无 CD147 表达却有 MMP-2 表达均说明 CD147 主要与病理状态下 MMP-2 的产生有关.至于 MMP-2 的表达阳性率高于 CD147 可能与生理状态下 MMP-2 的产生有关，也可能与除受细胞-细胞间相互接触的影响外的其他因素有关15 . 参考文献: 1Westerlund A，Hujanen E，Puistola U，Turpeenniemi-Hujanen.Fibroblasts stimulate human ovarian cancer cell invasion and ex-pression o

19、f72-kDa gelatinase A（MMP-2） J.Gynecol Oncol，1997;67:76-82. 2Ota K，Stetler-Stevenson WG，Yang Q，Kumar A，Wada J，Kashihara N，Wallner EI，Kanwar YS.Cloning of murine mem-brane-type-1-matrix metalloproteinase（MT-1-MMP）and its metanephric developmental regulation with respect to MMP-2and its inhibitor J.Kid

20、ney International，1998;54:131-142. 3Chamers AF，Matrisian LM.Changing views of the role of ma-trix metalloproteinases in metastasis J.J Natl Cancer Inst，1997;89（17）:1260-1270. 4Llano E，Pendas AM，Knauper V， Sorsa T，Salo T，Salido E，Murphy G，Simmer JP，Bartlett JD，Lopez-Otin C.Identifica-tion and structu

21、ral and functional characterization of human enamelysin（MMP-20） J.Biochemistry，1997;36（49）:15101-15108. 5Naylor MS，Stamp GW，Davies BD，Balkwill FR.Expression and activity of MMPs and their regulators in ovarian cancer J.Int J Cancer，1994;58（1）:50-56. 6Goetzl EJ，Banda MJ，Leppert D.Matrix metalloprotei

22、nases in immunity J.J Immunol，1996;156（1）:1-4. 7Janowska WA，Marquez LA，Matsuzaki A，Hashmi HR，Lar-ratt LM，Boshkov LM，Tuner AR，Zhang MC，Edwards DR，Kossakowska AE.Expression of matrix metalloproteinases（MMP-2and-9）and tissue inhibitors of metalloproteinases（TIMP-1and-2）in acute myelogenous leukaemia bl

23、asts:com-parison with nomal bone marrow cells J.Br J Haematol，1999;5;105（2）:402-411. 8Sato T，Iwai M，Sakai T，Sato H，Seiki M，Mori Y，Ito A.En-hancement of membrane type1matrix metalloproteinases（MT1-MMP）production and sequential activation of progelati-nase A on human squamous carcinoma cells coculture

24、ed with hu-man dermal fibroblasts J.Br J Cancer，1999;80（8）:1137-1143. 9Gao Q，Wu BQ，Zhong GG，You JF，Fang WG.A study on the correlation between the activity of72000type IV collagenase and the metastatic potential of cancer cells J.Chin J Oncol，1998;20（4）:267-269. 10Li HM，Fang WG，Zheng J，Zheng J，You JF

25、，Wu BQ.Zymo-graphic analysis of MMPs in human carcinoma cell lines with different metastasis potential J.Chin J Pathol，1998;27（5）:341-343. 11Leake JF，Currie JL，Rosenshein NB，Woodnoff JD.Long-term follow-up of serious ovarian tumors of low malignant potenial J.Gynecol Oncol，1992;47（2）:150-158. 12Kana

26、me-T，Miyauchi T，Kuwano A，Matsuda Y，Muramatsu T，Kajii T.Mappimg basign（BSG） ，a member of immunoglob-ulin superfamily to19p13.3J.Cytogenet Cell Genet，1993;64（34）:195-197. 13Kataoka H，DeCastro R，Zucker S，Biswas C.Tumor cell-de-rived collagenase-stimulatory factor increases expression of in-terstitial collagenase，stromelysin，and72-kD gelatinase J.Cancer Res，1993;53（13）:3154-3158. 14Guo H，Zucker S，Gordon MK，Toole BP，Biswas