气相色谱法测定羟乙基淀粉注射液摩尔取代级.doc

1、气相色谱法测定羟乙基淀粉注射液摩尔取代级【摘要】 目的 建立了气相色谱法测定羟乙基淀粉注射液摩尔取代级。方法 气相色谱法测定，FID 检测器，以氢碘酸水解羟乙基淀粉中的羟乙基成碘乙烷，在 6%氰丙基苯基94% 二甲基硅氧烷毛细管色谱柱 (30 m0.25 mm,1.4 m)上，应用程序升温（85 ，保持 3 min，以 45 /min 升至 230 ，保持 4 min） ，进样口温度为 250 ，检测器温度为280 ，载气为 N2，以邻二甲苯溶剂配制对照品溶液及样品溶液，内标：甲苯，对照品：碘乙烷。结果 碘乙烷回归方程为：A=0.032-0.02，r=0.999 8 (n=6)，线性范围为 8

2、28 mg/mL，平均加样回收率为103.9%（RSD=2.3%, n=5） 。结论 该法简便快捷，专属性好，可作为该制剂摩尔取代级的测定方法。 【关键词】 气相色谱法 羟乙基淀粉注射液 摩尔取代级 Abstract:Objective To developed a method for determining the molar substitution of hydroxyethyl starch injection.Methods Hydroxyethyl starch was hydrolyzed to ethyl iodide by hydriodic acid at high te

3、mperature, and ethyl iodide was analysed on a gas chromatography column (30 m0.25 mm, 1.4m). The injector temperature was 250 and the detector temperature was 250 . The carrier gas was nitrogen and the solvent was oxylene. Toluene was used as internal standard. Ethyl iodide was used as reference sta

4、ndard. Results The standard curve of ethyl iodide was linear in the range of 8-28 mg/ml. The average recovery was 103.9%（RSD 2.3%, n=5）for ethyl iodide. Conclusion This method is convenient and rapid for the quantitative determination of molar substitution of hydroxyethyl starch injection. Key words

5、:gas chromatography; hydroxyethyl starch injection; molar substitution 羟乙基淀粉注射液(HES 注射液)是羟乙基淀粉与氯化钠的灭菌水溶液，是一种优良的血浆代用品，临床主要用于抗失血性休克，扩充血容量1 。羟乙基淀粉摩尔取代级的高低与其血浆渗透压的维持时间及体内蓄积时间有直接关系2 。 1 仪器和试药 1.1 仪器 GC17A 岛津气相色谱仪，FID 检测器，Labsolutions Gcsolution色谱工作站，LD42A 高速离心机，ED53 恒温干燥箱。 1.2 试药 6%羟乙基淀粉注射液 HES 130/0.42（

6、批号 5153H51，5143H53，由德国 B.Braun Melsungen AG 提供） ，HES 130/0.42 表示羟乙基淀粉的平均分子量为 13 万，羟乙基淀粉摩尔取代级为 0.42；邻二甲苯（上海化学试剂采购供销站经销） ；碘乙烷(UNICHEM) ；甲苯(AR，广州化学试剂厂)；57%（质量浓度）氢碘酸（E.Merck） ；己二酸(UNICHEM) 。 2 实验原理 从制剂中提取羟乙基淀粉，并在己二酸作催化剂、高温密闭条件下以氢碘酸水解，将羟乙基转化成碘乙烷，生成的碘乙烷用邻二甲苯作吸收剂，以促使水解反应完全，再选择甲苯作内标，以内标法定量计算出碘乙烷，折算出羟乙基含量，从而

7、得到其摩尔取代级3 。 3 方法与结果 3.1 GC 色谱条件及系统适应性试验 色谱柱：6%氰丙基苯基94% 二甲基硅氧烷毛细管柱 (30 m0.25 mm,1.4 m)；载气:N2；柱流速：2 mL/min；分流比：120；程序升温：起始温度 85 ，保持 3 min，以 45 /min 升至 230 ，保持 4 min；进样口温度：250 ；检测器温度：FID ，280 。 在该条件下，供试品色谱中碘乙烷与内标峰形对称，无拖尾；理论塔板数以碘乙烷计，约为 54 000；碘乙烷峰与内标峰分离度大于1.5。空白样品、对照品溶液和样品溶液色谱图见图 1。 A.空白样品 B.对照品 C.样品 1.

8、碘乙烷 2.甲苯 3.2 内标溶液的制备 精密称取内标物（甲苯）适量，用邻二甲苯溶解并制成每 1 mL 中含5 mg 的溶液，作为内标溶液（1） （供制备供试品溶液用） ；同法制成每1 mL 中含 10 mg 的溶液，作为内标溶液（2） （供制备对照品溶液用） 。 3.3 对照品溶液的制备 避光操作。取碘乙烷适量,精密称定，用邻二甲苯溶解并稀释成每1 mL 中含 80 mg 的溶液作为对照品储备液。 3.4 供试品溶液的制备 避光操作。精密量取本品适量（约相当于羟乙基淀粉 50 mg）置反应瓶中，水浴蒸干，在 105 干燥 5 h，干燥器中放冷至室温，加入己二酸 0.1 g，内标溶液（1）1.

9、0 mL 和 57%（质量浓度）氢碘酸 2.0 mL，加盖密封，于 130 加热 16 h，取出，放冷至室温，振摇 2 min，以 3 000 r/min 转速离心 10 min，取上清液作为供试品溶液。 3.5 标准曲线 精密量取对照品储备液 0.10 mL，0.15 mL,0.20 mL,0.25 mL,0.30 mL 和 0.35 mL 分别置于反应瓶中，用微量移液管补加邻二甲苯至 0.5 mL,分别加入 57%（质量浓度）氢碘酸 2.0 mL 和内标溶液（2）0.5 mL，加盖密封，于 130 加热 16 h，取出，放冷至室温，振摇 2 min，以 3 000 r/min 转速离心 1

10、0 min，进样 1L 依法测定。记录色谱图及峰面积。以碘乙烷的质量浓度()对碘乙烷与内标峰面积比值（A）线性回归，得线性回归方程为 A=0.032-0.02,r=0.999 8（n=6） ，说明碘乙烷在 828 mg/mL 范围内呈良好的线性关系。 3.6 重复性试验 以回收率试验 5 份测定结果主峰峰面积与内标峰峰面积的比值计算RSD=1.4%（n=5） ，表明本法重复性较好。 3.7 精密度试验 取同一份对照品溶液，连续进样 5 次，记录测定结果主峰峰面积与内标峰峰面积的比值,计算 RSD=1.0%（n=5） ，表明本法精密度较好。 3.8 回收率试验 采用加样回收法，精密量取经测定摩尔

11、取代级的同一批样品（批号 5153H51）适量（约相当于羟乙基淀粉 25 mg）置反应瓶中，蒸干，在105 干燥 5 h，干燥器中放冷至室温，加入己二酸 0.1 g，精密量取对照储备溶液 0.15 mL 置反应瓶中，用微量移液管补加邻二甲苯至 0.5 mL,加入内标溶液（2）0.5 mL（浓度约为 12 mg/ mL） ，57%（质量浓度）氢碘酸 2.0 mL，加盖密封，于 130 加热 16 h，取出，放冷至室温，振摇2 min，以 3 000 r/min 转速离心 10 min，取上清液 1 L 依法测定。计算试样中碘乙烷的含量。得到碘乙烷的加样回收率平均值为103.9%，RSD=2.3%

12、（n=5） 。 3.9 样品测定 取 2 批样品，按“3.4”项下方法制备溶液，在“3.1”项色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 1 L 进行测定，按标准曲线法计算碘乙烷的含量，结果批号为 5153H51 和 5143H53 两批样品羟乙基的摩尔取代级均为 0.42。 4 讨 论 4.1 顶空进样瓶加盖密封后在高温条件下气密性好，故试验中所用反应瓶均为顶空进样瓶。 4.2 对于供试品溶液的制备，曾采用取样品溶液于水浴蒸干后，精密称取固体残渣适量（约相当于羟乙基淀粉 50 mg）置反应瓶中试验，尽管测定结果与本文所选方法一致，但此法操作过程烦琐，计算复杂，故未采用。 4.3 氢碘酸质

13、量浓度必须不低于 57%，否则水解不完全或无法进行。在试验过程中，曾经采用质量浓度低于 57%的氢碘酸进行试验，发现未生成碘乙烷。 4.4 对于水解温度，文献5选择 150160 ，本试验作了反应温度的考察，结果 130150 条件下反应结果影响不大,考虑到水解温度高对反应瓶密封性要求高，故本文采用 130 。 4.5 本实验中的样品为羟乙基淀粉注射液(HES 注射液)，因制剂中有辅料，在气相色谱图中可能带入杂质峰，所以对照色谱图和样品色谱图有区别。 【参考文献】 1周德尚，陈晓英.新编进口药品手册M.南昌：江西科学出版社，1994:276. 2张立木，王周泉，董常军. 果糖二磷酸钠的临床应用J.中国药业，2000，9（10）：62. 3YING C,DAVID M B,JAMES E C. Determination of the molar substitution ratio of hydroxyethyl starches by Gas ChromatographyJ.Anal Chem, 1983,55:334-338. 4国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部S.北京：化学工业出版社，2005：附录 54. 5陈蔚江，范慧红，徐康森. 气相色谱法测定羟乙基淀粉摩尔取代级J.药物分析杂志，2003，23（2）：97.