西替伪麻碱缓释片中西替利嗪在Beagle犬体内生物利用度研究.doc

1、西替伪麻碱缓释片中西替利嗪在 Beagle 犬体内生物利用度研究作者：谢清春，陈燕忠，吕竹芬，申楼 【关键词】 西替伪麻缓释片 摘要:目的 建立高效液相色谱法测定西替伪麻缓释片中西替利嗪在Beagle犬体内血药浓度并进行生物利用度评估。方法 以二氯甲烷提取溶剂，异丙嗪为内标；采用 C18柱，以乙腈 0.02 mol/L的醋酸钠水溶液高氯酸三乙胺(体积比 50500.50.1)，用 5 mol/L的氢氧化钠调节 pH 5.2为流动相，检测波长 230 nm。结果与结论 本文方法提取率高，回收率好，自制片的相对生物利用度 93.0%。 关键词:西替伪麻缓释片；高效液相色谱法；药代动力学；生物利用度

2、 Abstract: Objective To establish an HPLC assay for the determination of blood plasma concentration of cetirizine in cetirizinepseudoephedrine sustainedrelease tablets in beagle dogs.Method Cetirizine was extracted by methylene chloride. Promethazine was used as an internal standard and the separati

3、on was performed on a reversed phase Diamonsil C18 (5 m，250 mm4.6 mm) employing a UVdetection set at 230 nm at ambient temperature. The mobile phase consists of acetonitrile0.02 mol/L acetate water solutionperchloric acidtriethylamine (50500.50.1) adjusted to pH 5.2 with 5 mol/L NaOH. Result and Con

4、clusion The assay is linear from 50 to 3200 ng/ml with a detection limit of 15 ng/ml. The relative bioavailability of cetirizine in the tablets was 93.0%. Key words:cetirizinepseudoephedrine sustainedrelease tablets; HPLC; pharmacokinetics; bioavailability 盐酸西替利嗪（cetirizine，CTZ）是第二代抗组胺药，盐酸伪麻黄碱为减鼻充血剂

5、，两者合用药可以用于治疗季节性，过敏性鼻炎。西替伪麻缓释片通过含 5mg盐酸西替利嗪的速释层及含 120mg盐酸伪麻黄碱的缓释层，在保持盐酸西替利嗪起效迅速的同时减少了盐酸伪麻黄碱的给药次数（1 天 2次） 。西替伪麻缓释片中盐酸伪麻黄碱的药动学研究已有报道1 ，为了评价自制西替伪缓释中盐酸西替利嗪的药动学和相对生物利用度，本文在 Beagle犬体内进行了生物利用度试验。文献报道盐酸西替利嗪血药浓度测定方法有高效薄层色谱法2 ，高效液相梯度洗脱法3 ，本文结合实际条件建立了恒流条件下反高效液相色谱法测法测定盐酸西替利嗪在 Beagle犬体内血浆药物浓度。 1 仪器与试剂 Dionex P680

6、 HPLC Pump（Dionex Corp.） ，Dionex UVD170U（Dionex Corp.） ，WH3 微型涡漩混合仪(上海沪西分析仪器厂)，BA110S电子天平(德国，Sartorius)，821 型袖珍离子式 pH计(中山大学电子厂)，TDL-60B 台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。盐酸西替利嗪（丽珠制药厂） ，盐酸异丙嗪针剂(上海禾丰制药有限公司)，肝素(常州市新华活性材料研究所)，ZyrtecD（辉瑞公司，每片含盐酸西替利嗪 5mg,盐酸伪麻黄碱 120 mg） ，西替伪麻缓释片（自制） ，二氯甲烷(色谱纯，依能色谱有限公司)，三乙胺(分析纯，汕头市光华化学厂)，乙腈

7、(色谱纯，依能色谱有限公司)。 2 实验方法 1.1 CTZ 的体内分析方法 1.1.1 色谱条件 色谱柱：DiamonsilTM C18柱(5 m，250 mm4.6 mm)，流动相：乙腈 0.02 mol/L的醋酸钠水溶液高氯酸三乙胺(体积比50500.50.1)以 5 mol/L NaOH调节 pH 5.2，检测波长 230 nm，灵敏度 0005AUFS，进样体积 50 L。 1.2 样品处理方法 吸取 0.5 mL血浆于 5 mL具塞离心管中，加入 50 L 的内标标准液，涡漩振荡 30 s，加入 5 mL的二氯甲烷3,4 ，涡漩振荡 1 min，于 5 000 r/min离心 10

8、 min。弃去上层水相和蛋白，将下层有机相转移至另一 5 mL离心管中，于 40 水浴，氮气流下挥干。残留物加入 100 L流动相，涡漩振荡 30 s，5 000 r/min离心 3 min，精密量取 50 L 进样。 1.3 系统适用性和专属性试验 将空白血浆和加入药物及内标的血浆按“样品处理方法”处理进样，结果见图 1，2。在本实验条件下血浆内源性物质对测定无干扰，CTZ 的保留时间为 4.9 min，内标的保留时间为 12 min，分离度好，理论塔板数均大于 3 000，柱效高。 1.4 标准曲线的制定 精密称取真空干燥至恒重的 CTZ 20.0 mg于 200 mL容量瓶中，并加水至刻

9、度得浓度为 100 g/mL 的 CTZ储备液。依次吸取储备液0.125、0.25、0.5、1、2、4、8 mL 至 25 mL容量瓶中，加水至刻度，得CTZ的系列标准液。另将异丙嗪注射剂一支 2 mL(含异丙嗪 50 mg)转移至500 mL容量瓶中5 ，加水至刻度，将此溶液稀释 10倍得到 10 g/mL的内标标准液。所有储备液和标准液均存储于 4 备用。 取 0.5 mL空白血浆于 5 mL具塞离心管中，加入 50 L 的 CTZ上述系列标准液和 50 L 的内标标准液，得到含 CTZ 50、100、200、400、800、1 600、3 200 ng/mL的血浆样品，以下操作同“样品处

10、理方法” ，以 CTZ面积(Ai)比内标峰面积(As)的比值对质量浓度（）回归得回归方程：Ai/As=0.0011+0.0367，r=0.9997，表明线性关系良好。 1.5 回收率试验 1.5.1 相对回收率 取 5 mL具塞离心管，加入空白血浆 0.5 mL，精密加入 CTZ不同浓度标准液和内标标准液各 50 L，使血浆中 CTZ低、中、高 3个浓度分别为 100 ng/mL，1 600 ng/mL，3 200 ng/mL，按“样品处理方法”项下操作，由标准曲线计算测得量，计算回收率，结果见表 1。表 1 CTZ相对回收率试验结果（略） 1.5.2 绝对回收率 按“样品处理方法”项下理论值

11、 100%提取计算 50 L 中含 CTZ的绝对量，取含相同量的 CTZ溶液直接进样，其峰面积作为对照峰面积，计算经提取处理和未经处理的峰面积比值得绝对回收率，结果见表 2。本法相对回收率略偏高，但精密度好，绝对回收率高，能够用于血药浓度测定。表 2 CTZ绝对回收率试验结果（略） 1.6 精密度试验 取空白血浆加入标准液使成 100、1 600、3 200 ng/mL，按“样品处理方法”每样 3份于一日进样，计算日内差，3 个浓度的日内差 RSD分别为 2.06%，2.09%和 2.38%。连续 3天，上述 3种浓度每天进样 1次，计算日间差，3 个浓度的日间差 RSD分别为 3.35%，3

12、.32%和 2.26%。 1.7 最低检出浓度 配制 5、10、15、20 ng/mL的标准血浆样品，按“样品处理方法”进行处理后进样分析，按 CTZ的峰高与噪音(S/N)比为 3，得本法的最低检出浓度为 15 ng/mL。 2 Beagle 犬体内药物代动学和生物利用度实验 2.1 给药方案 采用双周期交叉试验，Beagle 犬 6只（广东省医药工业研究所） ，平均体质量 12.9 kg，随机分成 A、B 两组。给药前夜禁食，犬 A1、A2和 A3给予对照片两片(ZyrtecD,CTZ 10mg)，另一组犬 B1、B2 和 B3给予自制缓释片两片(CTZ 10 mg)。服药后于第0.25、0

13、.5、1.5、1、2、3、4、9、14、24、32、48 h静脉采血 4 mL左右于 10 mL已涂有肝素离心管中，离心后分离出的血浆于-20 低温保存至测定。1 周后两组进行交叉试验，A1、A2 和 A3给予自制缓释片两片，B1、B2 和 B3给予对照片两片，采血及血浆分离方法相同。 2.2 血药经时曲线图 血药经时曲线见图 3，自制片和对照片达峰时间相同，峰浓度相近，自制片 CTZ初期的血药浓度略高于对照片，但最终趋于一致。 2.3 药动学参数 使用 3p97进行数据处理，根据拟合度最优和 AIC最小原则，当取权重1/C/C 之一时，拟合度最优和 AIC值最小，CTZ 在 Beagle犬体

14、内呈二室模型。在此模型下，由平均血药浓度计算得到药动学参数见表 3。自制片 CTZ滞后时间短，前期血药浓度高，清除率和药-时曲线下面积也较接近，提示两者在体内吸收，代谢过程相似。 2.4 统计矩结果 统计矩不依赖于房室模型，估算药动学参数是建立在药-时曲线下面积基础上的，可适用于任何线性动力学特性的房室模型，可用于估算药物制剂的生物利用度等药动学参数。由表 4可见自制片和对照片中 CTZ的 AUC，MRT 相近，也提示 CTZ的吸收和代谢过程相似。表 3 CTZ的药动学参数（略）表 4 CTZ的统计矩估算结果（略） 2.5 相对生物利用度和生物等效性 按 FRel=AUCtest(0)AUCr

15、ef(0)100%计算自制片相对于对照片的生物利用度(表 5)，结果 CTZ相对生物利用度为 93.0%，两组之间进行 T检验的 P=0.064005，无显著性差异。表 5 CTZ的相对生物利用度计算结果（略） 3 小 结 从血浆中提取药物过程中因混合和转移等因素的影响，会使提取不能完全一致，采用内标法可避免这些因素引起的误差。本文建立的方法能够适用于测定 CTZ在 Beagle犬血浆药物浓度，快速重现性好。设计双交叉实验，测定了自制缓释片中 CTZ相对于对照片相对生物利用度，并进行房室模型嵌合和药物动力学参数的估算，结果 CTZ呈二室模型，CTZ的相对生物利用度为 93.0，自制片与对照片生

16、物利用度差异无显著性。 参考文献: 1吕雄文，李俊，金涌，等.家犬口服西替伪麻缓释片的药物动力学研究J.安徽医科大学学报，2004，39(4)：264. 2PANDYA K K，BANGARU R A，GANDHI T P，et al. Highperformance thinlayer chromatography for the determination of cetirizine in human plasma and its use in pharmacokinetic studiesJ. Journal of Pharmacy and Pharmacology，1996，48（5）

17、：510. 3MACEK J, PTACEK P,KLIMA J. Determination of cetirizine in human plasma by highperformance liquid chromatography J. Journal of Chromatography B,1999,736:231. 4ZAATER M F,TAHBOUB Y R,NAJIB N M.RPLC method for the determination of cetirizine in serum J. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis,2000,22:739. 5姜云平，曾仁杰，吴苏澄，等.国产盐酸西替利嗪片和胶囊的人体药动学及相对生物利用度J.中国医院药学杂志，2002，22（5）：267.