藏药川西獐牙菜挥发性化学成分及抑菌活性研究.doc

1、藏药川西獐牙菜挥发性化学成分及抑菌活性研究作者：张应鹏 杨云裳 刘宇 马兴铭【摘要】 目的研究川西獐牙菜挥发油的化学组成及其抑菌活性。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油，用 GC-MS 进行成分分析；选择金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、伤寒沙门氏菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌为代表菌种，对挥发油的抗菌活性进行了初步研究。结果分离出 88 种成分，鉴定出 61 种化合物，其峰面积相对含量约占挥发油总量的 91.32%。川西獐牙菜挥发油的主要组分为二十六烷(12.88)，二十八烷(17.83)，1-碘-十六烷(7.27)，11十烷基二十一烷(5.47)，2十二烷氧基-乙醇(3.04)，2-环己基-十一烷(

2、 2.19)，1碘-十八烷(3.21)，四十四烷( 5.47)，二十九烷(4.29)，11十烷基-二十一烷(5.47)，三十烷( 3.17) 等。结论川西獐芽菜挥发油对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和伤寒沙门氏菌有抑菌活性。【关键词】 川西獐牙菜 挥发油 气相色谱-质谱 抑菌活性川西獐牙菜 Swertia mussotii Franch，龙胆科獐牙菜属,一年生草本,高 1560 cm，主根黄色，生于海拔 3 6003 800 m 的山坡、灌丛草地、林缘、河滩等1 ，在我国四川的西部,西藏及甘肃的海西、海北、黄南、玉树、果洛等地区均有分布。川西獐芽菜也称为藏茵陈, 是特种藏药, 用于治疗消化不良、胆

3、囊炎、各型肝炎、急性骨髓炎、急性结膜炎、急性咽喉炎及烫伤, 也用于风火牙痛、热淋等症2，3 。目前对獐牙菜属的药理和化学性质的研究已有诸多报道4 。但是，川西獐牙菜挥发性化学成分尚未见文献报道，笔者在研究印度獐牙菜挥发性化学成分的基础上5 ，继续对川西獐牙菜的挥发性化学成分和抑菌活性加以研究。1 器材1.1 药材 川西獐芽菜，200311 购买自青海湟中藏医院，植物标本由兰州大学生命科学院张国梁教授鉴定，植物标本现存放于兰州理工大学石油化工学院有机与药物化学研究室。1.2 试剂与菌株 MH 琼脂、MH 肉汤、平板菌落计数琼脂 : 杭州微生物试剂厂；细菌菌株：金黄色葡萄球菌 CMCC(B) AT

4、CC25923，大肠埃希菌 CMCC(B) ATCC25922：枯草芽孢杆菌 O901，铜绿假单胞菌 ATCC27853，伤寒沙门氏菌 ATCC6539，兰州大学基础医学院免疫学教研室提供。所用试剂均为分析纯。1.3 仪器 HP6890-5973GC/MS 联用仪(美国惠普公司); 气相色谱条件：色谱柱为 SE-54（30 m0.25 mm,33.0 m） ；柱温为 40，以5min-1 的速率升至 260，保持 40 min;进样口温度为 260；载气为 He 气，流速为 0.3 mlmin-1；进样量为 0.2 l，分流比为 501。质谱条件：离子源为 EI，电子能量为 70 eV,接口温

5、度为 280，质量范围为 1550 amu，溶剂延迟 0 min。2 方法与结果2.1 挥发油的提取取川西獐牙菜干燥全草 50 g 粉碎，加入 200 ml 蒸馏水进行水蒸气蒸馏 8 h，收集馏出液 700 ml。 萃取时，加入 50 g 氯化钠，以减少挥发性成分在水中的溶解度，用乙醚萃取馏出液 6 次，合并乙醚萃取液，用无水硫酸钠干燥萃取液 1 h，在 30条件下回收乙醚，得到浅黄色油状物, 提取液具有特殊芳香气味，密封保存，供分析用。2.2 成分鉴定在上述色谱条件下进样，得到黄花补血草挥发油的总离子流图(见图 1)。启动 HP689OMS 化学工作站，检索 NIST 98 谱图库，结合有关

6、文献人工检索确定其化学组成6 （见表 1） 。另外，通过与正烷烃化合物的保留时间比较，采用线性插入的方法计算各化合物在挥发油中的百分含量。各成分的保留指数，与文献7，8化合物的保留指数进行比较，进一步确证各化合物。按峰面积归一化法计算各化合物在挥发油中的百分含量，具体分析结果见表 1。2.3 抗菌活性分析92.3.1 菌液制备取实验菌株接种于 MH 琼脂平板培养基中，35培养 14 h，用 MH 液体培养基制备菌悬液，菌液浓度 1.5108CFUml-1备用。2.3.2 含药物纸片制备将药物溶解后，灭菌备用。每张纸片（直径 6 mm）加药物样品 10 l，阴性对照是助溶剂，空白对照生理盐水；阳

7、性对照是庆大霉素溶液。2.3.3 KB 法取菌液浓度为 1.5108 CFUml-1 的菌株 0.2 ml，均匀涂布整块 MH 琼脂培养基表面，室温 25 min 后，贴加含药纸片，置入 35恒温培养箱培养 1618 h，精确测定其纸片周围抑菌环直径的大小，结果以毫米（mm）表示。见表 2。2.3.4 挥发油浓度助溶剂为 DMSO，浓度：10 mg/ml； 浓度：22 mg/ml； 浓度：46 mg/ml。3 讨论通过 GC/MS 分析,从川西獐牙菜挥发油中共分离出 88 个化合物,鉴定了其中 61 个，占化合物总数的 51.1%，所鉴定的化合物含量占全挥发油的 82.12%。分析鉴定结果表明

8、，川西獐牙菜挥发油的主要组分为烷烃，分别为二十六烷(12.88)，二十八烷(17.83)，1-碘-十六烷(7.27)，11-十烷基-二十一烷(5.47)，2-十二烷氧基-乙醇(3.04)，2-环己基-十一烷( 2.19)，1-碘-十八烷(3.21)，四十四烷( 5.47)，二十九烷(4.29)，11-十烷基-二十一烷(5.47)，三十烷(3.17) 等。挥发油浓度为 46 mgml-1 时，对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和伤寒沙门氏菌有抑菌活性。表 1 川西獐牙菜挥发油气相色谱-质谱法分析结果（略）图 1 川西獐牙菜挥发油 GC/MS 分析总离子流图（略）表 2 川西獐牙菜挥发油抑菌实验结果（略

9、）【参考文献】1 江苏新医学院.中药大辞典M.上海：上海科学技术出版社，1995：1589.2 邹寒雁，周翰信.青海中药资源开发及利用研究M.北京：东方出版社，1990：40.3 中国医学科学院药物研究所.中药志，第 4 册M.北京：人民卫生出版社，1993：342.4 魏卫东.资源植物藏茵陈的研究进展J.四川草原,2005,10：33.5 史高峰，鲁润华，杨云裳，等.印度獐牙菜挥发油化学成分的研究J.西北植物学报，2004,24(2): 296.6 Adams RP.Identficaion of essential oil components by gas chromatography

10、mass spectroscopyM.vol 1. ed 3. Ilinois: Alured Publishing Corporation, 2001：165.7 丛浦珠，苏克曼.分析化学手册, 第 9 分册：质谱分册M.北京:化学工业出版社, 2000:136.8 Jennings W, Shiamoto T .Qualitative analysis of flavor and fragrance volatiles by glass capillary gas chromato graphyM.vol 1. ed 1 .New York: Academic Press, 1980：31.9 倪语星，王金良，徐英春.抗微生物药物敏感性实验规范S.上海：上海科学技术出版社，2002：35