不同提取方法对测定蜂胶产品总黄酮含量的影响.doc

1、不同提取方法对测定蜂胶产品总黄酮含量的影响作者：王小平 林励 肖凤霞 潘建国 【摘要】 【目的】探讨不同提取方法对测定蜂胶产品中总黄酮含量的影响。 【方法】以芦丁为对照品，采用分光光度法测定不同方法所提取的蜂胶中总黄酮的含量。 【结果】药典法和甲醇索氏提取法所得总黄酮的含量较高，以芦丁计分别为 0198 2、0197 8?mgg，两者无显著性差异。 【结论】与药典法比较，甲醇索氏提取法简便、省时、经济，在测定总黄酮的含量时可以考虑用甲醇索氏提取法来代替药典法。 【关键词】 蜂胶/化学；总黄酮/分析；分光光度法，紫外线 【Objective】To explore the effect of di

2、fferent extraction methods on the content of total flavones from propolis. 【Methods】With rutin as the control，spectrophotometry was used to investigate the content of total flavones extracted from propolis. 【Results】The content of total flavones extracted by pharmacopoeia extraction method was 01982

3、?mg/g and 01978?mg/g by methanol Soxhlet extraction method，the difference being insignificant. 【Conclusion】Methanol Soxhlet extraction method is simple，effective and practical，and can be used to replace pharmacopoeia extraction method for the determination of total flavones from propolis when necess

4、ary. Key words：PROPOLIS/chemistry；TOTAL FLAVONES/analysis；SPECTROPHOTOMETRY，ULTRAVIOLET 蜂胶（propolis）是蜜蜂从植物芽苞和树干处采集树胶，混入蜜蜂上颚腺分泌物和蜂蜡等而形成的一种具有芳香味的胶状固形物，其主要化学成分为黄酮类、萜烯类、酚酸类化合物等多种生物活性物质1 。中华人民共和国药典2005 版一部收载了该药材，作为抗菌消炎、调节免疫中药应用2 。现代药理研究表明，蜂胶总黄酮具有抗病毒、抗菌消炎、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、调节机体免疫功能等多种生物活性作用3 。蜂胶总黄酮的含量已成为判定蜂胶产品质

5、量的标志性物质之一，而提取方法是影响蜂胶总黄酮含量测定准确性的重要因素之一，为此，笔者进行了本项研究。 仪器及试药 11 仪器 UV2100 紫外可见分光光度计（成都科析电子商务有限公司） ；8953 Dietikon 型电子分析天平（瑞士，精度 01?mg ） ；AS2060B 型超声仪（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）等。 12 试剂与药品流动相所用甲醇为色谱醇，其他试剂甲醇、磷酸等均为分析纯；蜂胶（毛胶，由广州市宝生园有限公司提供） ；芦丁对照品（批号为 0809705 ）由中国药品生物制品检定所提供。 2 方法与结果 21 芦丁对照品标准曲线的制备2精密称取无水芦丁对照品适量，加甲醇制成

6、0268?mg mL 的溶液；吸取该溶液 0、1、2、3、4、5?mL，分别置 25?mL 容量瓶中，加水至 6?mL，加 50?g/L 亚硝酸钠溶液 l?mL，摇匀，静置 6?min；加 100?g/L 硝酸铝溶液 l?mL，摇匀，放置 6?min；加43?g/L 氢氧化钠溶液 10?mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置 15?min，以相应试剂为空白，按紫外可见分光光度法（2005 版药典附录 VA） ，在波长 500?nm 处测定吸光度（） 。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，结果见图 1。 22 供试品总黄酮含量测定精确移取各样品溶液 1?mL，置 25?mL 容量瓶中，加水至

7、 6?mL，加 50?g/L?亚硝酸钠溶液 l?mL，摇匀，静置6?min；加 图 1 芦丁标准曲线 略 23 提取方法的比较研究 231 药典法将蜂胶在-10冷冻数天后用粉碎机粉碎，分别精密称取 1006 6?g、1009 0?g、0999 0?g 蜂胶，分别置于索氏提取器中，加 100?mL 丙酮，加热回流至提取液无色，提取液回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至 100?mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取4?mL 置 10?mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 232 乙醇回流法取同一批蜂胶，分别精密称取 1002 8?g、1001 8?g、1007 4?g，以体积分数 95%

8、的乙醇回流 2 次，每次加乙醇 50?mL，第 1 次回流 15? ，第 2 次回流 1?，回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解并转移至 100?mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取 4?mL 置 10?mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。 233 甲醇索氏提取法取同一批蜂胶，分别精密称取 1000 8?g、1001 6?g、1002 4?g，分别置于索氏提取器中，加 100?mL 甲醇，加热回流至提取液无色，提取液转移至 100?mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取 4?mL 置 10?mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。24 方法学考察 241 稳定性试验取甲醇索氏提取法所得的

9、供试品溶液，按 22项下所述方法，分别在 0、1、2、3、5?h 不同时间点进行检测，相对标准差(s)为 08% ，表明供试品溶液在 5?h 内是稳定的。 242 重复性试验用甲醇索氏提取法平行制备 6 份供试品溶液，按22 项下所述方法，分别测定其吸光度，s为 05% ，结果表明重复性好。 243 精密度试验取甲醇索氏提取法所得的供试品溶液，按 22项下所述方法，测定其吸光度，连续测定 5 次，其 s为 03% 。 244 回收率试验精确移取 05?mL 样品溶液 5 份，置 25?mL 容量瓶中，分别准确加入芦丁对照品甲醇液 05?mL （0268?mg/mL ） ，按22 项下所述方法，

10、分别测定其吸光度，并计算回收率，其回收率为10008% （=5） ，s为 095% 。 25 不同提取方法所得样品总黄酮含量测定结果表 1 结果说明药典法和甲醇索氏提取法所得的总黄酮的含量较高，但两者无显著性差异。 表 1 不同提取方法所得样品测定结果比较（略） 3 讨论 本实验对药典法、乙醇回流法和甲醇索氏提取法进行比较研究，从实验结果可以看出，药典法和甲醇索氏提取法所得总黄酮含量较高，但两者含量接近。其原因可能是，两种方法均采用索氏提取法，均回流至无色，虽然药典法采用丙酮回流，丙酮的极性与甲醇有一定的差别，提取的物质也有所不同，但提取液回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，这可能是药典法和甲醇索氏

11、提取法所得的总黄酮含量接近的原因之一。在本实验中，用甲醇溶解时采用超声波助溶，能够将丙酮提取出的总黄酮几乎全部转移至甲醇溶液中。这也可能是药典法和甲醇索氏提取法所得总黄酮含量较接近的主要原因之一。对乙醇回流法进行研究，预实验中第1 次回流 15?h ，第 2、3 次各回流 1?h，分别将 3 次所得的提取液进行总黄酮含量测定，结果发现，经 2 次提取率已达 95%以上。因此，本实验采用了乙醇回流 2 次，第 1 次回流 15?h ，第 2 次回流?1?h。药典法和甲醇索氏提取法所得的总黄酮含量较接近，且无显著性差异，同时甲醇索氏提取法具有简便、省时、经济的优点，在总黄酮含量测定时可以考虑采用甲醇索氏提取法来代替药典法。 【参考文献】 1王宗伟，黄兆胜.蜂胶的药理作用J.国外医药植物药分册，1997，12：151. 2国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部） S.北京：化学工业出版社，2005：246. 3胡福良，玄红专.蜂胶的生物学活性及毒性和过敏反应J.科技通报，2003，19（2）：166.