大豆发酵制品中总异黄酮的含量测定.doc

1、大豆发酵制品中总异黄酮的含量测定作者：崔力剑，黄芸，窦玉红，詹文红 【摘要】 目的建立一种测定大豆发酵制品淡豆豉中异黄酮类成分含量的紫外分光光度法分析方法。方法 以染料木素为对照品，利用染料木素与氢氧化钠产生反应，在 271 nm 波长处有最大吸收点，用紫外分光光度法测定淡豆豉中总异黄酮的含量。结果淡豆豉中总异黄酮的含量为 9.884 mg/g，加样回收率为 99.3%，相对标准偏差为 2.1%。结论方法简便、准确、重现性好, 可作为测定淡豆豉中总异黄酮的含量的一种手段，适用于淡豆豉及其它豆制品的日常分析和质量控制。 【关键词】 大豆 淡豆豉 氢氧化钠 异黄酮 分光光度法Abstract：Ob

2、jectiveTo establish a UV spectrophotometry for determination of isoflavones in Semen Sojae Praeparatum.MethodsGenistein was selected as the reference substance. Based on the reaction of genistein and NaOH, which has the maxium absorption in 271nm wavelength, spectrophotometry method was used for det

3、ermination of isoflavones in Semen Sojae Praeparatum. ResultsThe total content of isoflavones in Semen Sojae Praeparatum extracts was 9.884mg/g with mean recovery 99.3%, and the RSD was 2.1%. ConclusionThis method is simple,accurate and reproducible,it can be used for the routine analysis and qualit

4、y control of the Semen Sojae Praeparatum and function food.Key words：Glycine max (L.); Semen Sojae Praeparatum; NaOH; Isoflavones; Spectrophotometry豆豉按微生物种类不同可以分为毛霉型豆豉、 曲霉型豆豉、细菌型豆豉和根霉型豆豉1 。淡豆豉是豆科植物大豆 Glycine max(L.) Merr.的成熟种子与青蒿、桑叶蒸罨、发酵加工而成的制品，发源于中国，是我国的传统食品，也是卫生部确定的第一批药食兼用品种之一。作为常用中药，历版中国药典均有记载。因炮

5、制方法的不同，有的性寒，有的微热，有解毒清热、透疹解毒的功效，适用于风热头疼，胸闷呕吐，痰多虚烦等症。淡豆豉中含有的大豆异黄酮(Soybean Isoflavones)是一类重要的生理活性物质，具有多种生理功能，如降血糖、抗肿瘤作用；对血管的防护作用；雌激素双向调节作用；预防骨质疏松症；较强的抗氧化活性和抗真菌活性等2,3,4 。其有效成分以大黄素(Daidzein)和染料木素(Genistein)为主5 ，这是一类异黄酮成分。本实验以染料木素作为对照品，利用染料木素与氢氧化钠产生反应，并在 271 nm 波长处产生最大吸收峰的特性，采用紫外分光光度法在 271 nm 波长处测定淡豆豉中异黄酮

6、的含量，建立一种快速、准确测定淡豆豉中总异黄酮含量的新方法。1 器材与方法1.1 材料正己烷（A.R） ，天津化学试剂厂产品；无水乙醇（A.R） ，天津化学试剂厂产品；氢氧化钠（A.R） ，河北辛集化工厂产品；染料木素对照品（含量约为 98%） ，Sigma 公司产品。淡豆豉（Semen Sojae Praeparatum）购自石家庄市乐仁堂药店，经河北医科大学中医学院药用植物教研室严玉平副教授鉴定为正品，留样凭证存放于河北医科大学中医学院药用植物教研室。1.2 仪器-2 紫外分光光度仪（美国 PE 公司） 、RE-52A 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂） 、BS223S 电子天平（德国赛多利

7、斯公司） 。1.3 样品溶液制备6取符合实验要求的淡豆豉，粉碎，过 10目筛，精密称取 5 g。加正己烷 40 ml 超声振荡脱脂 25 min，弃去正己烷，重复 1 次。残渣加入 50 ml 70%乙醇溶液，85热回流提取 3 次，1 h/次，收集提取液。减压回收溶剂至干，加 NaOH（0.01 mol/L）溶液溶解，定容为 250 ml，作为供试品液。精密移取供试品液 2 ml 置 100 ml量瓶中，加 NaOH（0.01 mol/L）溶液定容至刻度，摇匀。平行操作 3 份。1.4 标准曲线绘制精密称取 120干燥至恒重的染料木素 10.2 mg，置 50 ml 容量瓶中，加 0.01

8、mol/L NaOH 溶液定容至刻度，摇匀。精密吸取此溶液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 ml 分别置于 100 ml 容量瓶中，加 0.01 mol/L NaOH 定容至刻度，摇匀，以 0.01 mol/L NaOH 溶液为空白溶液，在 271 nm 处测吸收度。以吸收度（Y）为纵坐标，染料木素浓度(g/ml)（X）为横坐标绘制标准曲线（见图 1） ，结果表明染料木素浓度与吸收度呈良好线性关系。回归方程为 Y = 0.169 8X + 0.005 9，r= 1.000 0。1.5 样品测定以 0.01 mol/L NaOH 溶液为空白溶液，在 271 nm处测吸收度。每个样品重复测

9、定 2 次。2 结果2.1 溶剂的选择从染料木素的结构特点及理化性质可知，其具有强疏水性，难溶于水、稀盐酸等，微溶于甲醇、乙醇。选择上述溶液作为染料木素的溶出介质不适宜。根据染料木素及异黄酮类化合物的理化特性（结构中含有酚羟基呈现弱酸性，易溶于稀碱） ，选择稀氢氧化钠（0.01 mol /L）溶液溶解大豆提取物中异黄酮类化合物，是简便可行的。2.2 波长选择由对照品紫外扫描图谱(图 2)可得知，最大吸收峰都在 271 nm，且最大吸收峰周围干扰较小，我们就把 271 nm 作为测定波长。2.3 线性关系考察本法中，染料木素在 0.514.08 g / ml 范围呈良好线性关系(见图 1)，相关

10、系数 r=1.000 0，测定上限可达 8.0 g/ml，下限为 0.2 g/ml。2.4 回收率实验精密吸取标准品溶液 25，50，25，50，25 l，分别置 5 只 5ml 容量瓶中,再分别精密加入供试液 150 l，0.01 mol/L NaOH 定容至刻度，摇匀，按“1.3.3”项操作，计算回收率，结果平均回收率为 99.3%，RSD 为 2.1%。见表 1。2.5 精密度实验精密吸取标准品溶液 100 l，分别置 5 只 5 ml容量瓶中, 加 0.01 mol/L NaOH 定容至刻度，摇匀，按“1.4”项操作，测定吸收度，RSD 为 1.9%。2.6 样品测定取已制备好的 3

11、份样品溶液测定，每份样品按测定程序测定 2 次，以染料木素计量大豆异黄酮含量，所得结果见表 2。表 1 加样回收率（略）表 2 样品中大豆异黄酮含量（略）3 讨论淡豆豉为常用药食同源物质，其最新报道有降血糖、血脂的作用，但有关淡豆豉中总异黄酮的质量分析报道较少7 。我们经过研究对比，确定用一种简单易行的紫外分光光度法对其主要有效成分异黄酮类成分进行测定，建立了一种淡豆豉的质量控制标准。本法简便、快速、选择性好、线性范围宽、重复性好、能全面反映样品中大豆异黄酮的总含量，适用于淡豆豉中总异黄酮的质量检测和测定，尤其是生产过程的质量控制。采用稀碱溶液溶解异黄酮，增加了异黄酮的溶解度，使得淡豆豉中总异

12、黄酮含量测定准确度大大提高。同时由于淡豆豉中异黄酮与碱发生反应，使得其最大吸收波长发生红移，紫外吸收峰远离末端吸收，也提高了淡豆豉中总异黄酮含量测定准确度。【参考文献】1杨淑媛,田元兰,丁纯孝. 新编大豆食品M.北京：中国商业出版社,1989：284.2CLee Holder，Mona I. Churchwell，Daniel R. Doerge.Quantification of Soy Isoflavones，Genistein and Conjugates in Rat Blood Using LC/ES-MSJ.Agric Food Chem.，1999，47：3764.3牛丽颖,王鑫国,葛喜珍,等.淡豆豉提取物降糖有效部位研究J.中药药理与临床,2002,20(5):21.4王鑫国,葛喜珍,白 霞,等.淡豆豉对去卵巢大鼠脂代谢的影响J.中药材,2003，26(9),652.5王强,丛晓东,余伯阳,等.中药分析M.福州：福建科技出版社,1993:193.6窦玉红,崔力剑,黄 芸,等. 正交设计优选淡豆豉中总异黄酮的提取工艺J.河北中医药学报,2006,21（2）:33.7崔力剑,黄 芸,杜淑娟,等.紫外分光光度法测定淡豆豉中异黄酮的含量J. 河北中医药学报,2004,19(3):32.