1、改良亲和酶标法检测乳腺癌细胞 ER作者：陶秦渝 张盈华 张利朝 杨红斌 【关键词】 亲和酶标法 关键词: 亲和酶标法;乳腺癌;雌激素受体;抗原修复 0 引言 乳腺癌术后选择何种治疗方法，主要依据乳腺癌组织中雌激素受体（ER）的检测决定的.ER 阳性者选择内分泌治疗，其有效率为50%75%;ER 阴性者，治疗有效率只有 8%10%，一般采取其他治疗方法.为了提高检测 ER 亲和酶标法的灵敏度和准确度，我们以经典 DCC 法作参照，对亲和酶标法进行改良，获得了较好的结果. 1 材料和方法 1.1 材料 本院普外科经临床及病理确诊、手术切除的乳腺癌患者标本 18 例，立即取癌组织约 1g 送生化室作
2、 ER 的生化测定（DCC 法）1 ，同时取癌组织（0.5mm0.5mm0.3mm）12 块作石蜡包理.连续切片，片厚 5m. 1.2 方法 1.2.1 原实验方法 脱蜡至水（依次使用二甲苯，无水乙醇，950mLL-1 乙醇，蒸馏水） ，10mLL-1 ，H 2 O2 ，30，孵育 30min，PBS 洗涤 3 次，每次 5min，50mLL-1 山羊血清封闭 30min，滴加 E2 -HRP 标记抗体 50L.滴加标记抗体后，将所有实验组切片放置湿盒，4冰箱过夜（放置时间不少于 18h） ，取出PBS 洗涤后，DAB 显色 10min，苏木素复合染色，在显微镜下观察结果. 1.2.2 改良实
3、验法 脱蜡至水后，10mLL-1 H2 O2 ，30孵育 30min，PBS 洗涤 5min3 次，微波炉法进行抗原修复（pH6.0 柠檬酸盐缓冲液，909510min，室温冷却 15min） ，PBS 洗涤 3 次，50mLL-1 山羊血清孵育 30min，滴加 E2 -HRP 标记抗体 50L.其他同前. 阳性病例的判断:计数 500 个肿瘤细胞内每 100 个细胞的阳性细胞数大于或等于 30 个为阳性病例. 2 结果 2.1 原实验法与改良实验法比较 18 例乳腺癌标本中，原实验方法组 ER 阳性 4 例，阳性率 20%;改良实验法组 ER 阳性 14 例，阳性率 80%.两组之间有显著
4、差异（2 =7.2，P0.01）. 2.2 改良实验法与 DCC 法比较 18 例乳腺癌标本中，DCC 法阳性（10pmolg-1 ）病例 12 例，与改良实验法结果比较阳性一致率为 100%;6 例 DCC 法阴性（10pmolg-1 ） ，与改良实验法结果比较阴性一致率为 67%，总符合率为 80%. 3 讨论 乳腺为性激素的靶器官，其生长、发育和功能均依赖性激素的支持，因此乳腺癌的激素治疗已经成为手术切除癌肿后的主要辅助疗法.ER 的测定结果与乳腺癌的治疗有关，很受临庆医生欢迎.ER 的检测方法大致有生化法（DCC 法） 、荧光法、组化法 3 种，前两者需要专用仪器，价格昂贵，大多数普通
5、实验室无法开展，组化法简便易行，价格低廉，应用最为广泛2 .其中亲和酶标法试剂制作简单，不需免疫动物，能避免在繁杂的制作过程中抗体滴度下降甚至失活而导致的假阴性结果;而原亲和酶标实验方法因固定剂影响，使得在石蜡标本中检测 ER 的阳性率大大降低并且癌细胞阳性反应减弱、消失或呈弥漫均一性深黄色，背景深度黄染，无法判断标记结果;而在改良实验法中应用了免疫组化法中较新的抗原修复步骤，使 ER 阳性检测率高达 80%，且与 DCC 法符合率为 80%.因此应用改良亲和酶标法检测乳腺癌中 ER，准确度与生化法符合率较高，方法不象生化法繁杂，能够为临床患者的诊治提供可靠依据，易于在一般实验室开展，值得推广应用. 参考文献: 1刘尚廉，沈镇宙，唐锦霞.乳腺癌雌激素受体的酶联雌二醇组化标记法J.肿瘤，1986;6（5）:104-106. 2许良中，许世明，刘亦法.101 例乳腺癌雌激素受体的测定J.肿瘤，1984;4（1）:18-20.
