高效液相色谱-蒸发光散射法测定补肾斑龙片中黄芪甲苷的含量.doc

1、高效液相色谱-蒸发光散射法测定补肾斑龙片中黄芪甲苷的含量作者：王建明,刘相辉,王和平【摘要】 目的 建立补肾斑龙片质量控制方法。方法 采用高效液相色谱-蒸发光散射法测定黄芪甲苷的含量。结果 线性范围 1.444.32 g(r=0.999 9),平均加样回收率为 99.69%,RSD=1.16%。结论 本方法简便快速,灵敏度高,为补肾斑龙片的质量控制提供了有效方法。 【关键词】 补肾斑龙片；高效液相色谱-蒸发光散射法；黄芪甲苷Abstract：Objective To establish the quality control method for Bushenbanlong Tablet. M

2、ethods The content of astragaloside was determined by HPLC-ELSD. Results The linearity range was 1.444.32 g with a correlation coefficient r=0.999 9, and the average recovery was 99.69% with RSD=1.16%. Conclusion The method was simple, convient, quick and sensitive. It provide an effective method fo

3、r quality control of Bushenbanlong Tablet.Key words：Bushenbanlong Tablet；HPLC-ELSD；astragaloside补肾斑龙片系由黄芪、鹿茸、肉苁蓉、淫羊藿等 13 味中药制成的片剂,具有补肾壮阳、填精益髓的功效,用于肾虚、阳痿、早泄、遗精、性欲减退等症。为了控制药品的内在质量,确保药品的疗效,我们对该制剂中黄芪的主要成分黄芪甲苷的含量测定方法进行了研究,确定采用高效液相色谱-蒸发光散射法。此方法简便快速、灵敏度高、重现性好,结果准确可靠,为补肾斑龙片的质量标准制定提供了依据。1 仪器与试药Waters 600E 高效

4、液相色谱仪；Millennium32 色谱工作站数据处理系统；Alltech-2000 蒸发光散射检测器。补肾斑龙片(黑龙江中医药大学中医药研究院制)；黄芪甲苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号 0781- 200109)。其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件1色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Kromasil C18,4.6 mm200 mm,5 m)；流动相：乙腈-水(3268)；柱温 30 ；流速 1.0 mL/min。蒸发光散射检测器：高纯氮气流速 2.5 L/min；漂移管温度 105 。理论板数按黄芪甲苷峰面积计算不低于 2 000。2.2 对照品溶液的制备取黄芪

5、甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每 1 mL 含黄芪甲苷0.36 mg 的对照品溶液。2.3 供试品溶液及阴性样品溶液的制备1取本品 30 片,剥去薄膜衣,研成细粉,取粉末约 6 g,精密称定为5.871 6 g,置索氏提取器中,加甲醇 40 mL,冷浸过夜,再加甲醇适量,加热回流提取 6 h。提取液浓缩蒸干,残渣加水 20 mL,微热使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取 5 次(40、30、30、20、20 mL),合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤 2 次,每次 40 mL,弃去氨液,正丁醇液用 20 mL 水洗涤 1 次,弃去水洗液,正丁醇液蒸干,残渣用甲醇溶解,并定容于 5 mL 容量瓶中

6、,作为供试品溶液。去除黄芪的阴性样品溶液的制备同法制得。2.4 空白试验取去除黄芪的阴性样品溶液,吸取 20 L,注入液相色谱仪,依上述色谱条件测定,结果在对照品黄芪甲苷出峰的位置无其他干扰峰出现,证明其他药材对黄芪甲苷峰无干扰。对照品、样品及阴性样品色谱图见图1。2.5 线性关系的考察精密吸取对照品溶液 4、6、8、10、12 L,分别注入液相色谱仪,依上述色谱条件测得黄芪甲苷峰面积。以峰面积的自然对数为纵坐标,黄芪甲苷量的自然对数为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程：Y=11.253 41.501 6X,r=0.999 9。表明黄芪甲苷在 1.444.32 g 范围内线性关系良好。2.6 精

7、密度试验精密吸取对照品溶液 8 L,进样,按上述色谱条件测定,连续进样5 次,峰面积积分值 RSD=0.7%。说明精密度较高。2.7 稳定性试验取供试品溶液,于 0、2、4、6、8、10 h 测定,每次进样 20 L,结果在 10 h 内峰面积积分值 RSD=1.30%。说明供试品溶液在 10 h 内稳定。2.8 重复性试验分别精密称取同一批号(20040601)补肾斑龙片各 5 份,按供试品溶液制备方法制备,吸取 20 L 测定,结果峰面积积分值 RSD=1.62%。表明重复性良好。2.9 加样回收试验分别精密称取已知黄芪甲苷含量的补肾斑龙片(批号 20040601)5份,每份约 3 g,精

8、密称定,分别加入黄芪甲苷对照品 0.36 mg,混匀后,分别按供试品溶液制备方法制备。各精密吸取 20 L 测定,结果加样回收率平均值为 99.69%,相对标准偏差 RSD 为 1.16%。表明回收率较高,方法可靠。见表 1。表 1 加样回收率测定结果（略）2.10 供试品含量测定取 3 批供试品(040601、040602、040603),依供试品制备方法制备成供试品溶液,吸取 20 L 测定,结果见表 2。表 2 供试品中黄芪甲苷含量测定结果（略）3 讨论黄芪甲苷成分的紫外吸收差,用紫外检测器检测受溶剂影响很大。而用蒸发光散射检测器检测,分离效果很好,不受溶剂影响。高效液相色谱-蒸发光散射

9、法测定黄芪中黄芪甲苷含量的报道较多,多种制剂中黄芪含量测定都采用该方法2-3,2005 版中国药典也将黄芪药材的含量测定方法确定为高效液相色谱-蒸发光散射法。我们据此确定了黄芪甲苷的测定条件,对供试品正丁醇萃取后用大孔吸附树脂精制和不精制制备的供试品溶液进行了黄芪甲苷含量测定比较,并无大的不同,故决定省去大孔树脂精制这一步制备供试品溶液。【参考文献】1 国家药典委员会.中国药典(一部)S.北京：化学工业出版社,2005. 212.2 李 涛,许长根,郝武常.HPLC-ELSD 测定桃芪生血胶囊中黄芪甲苷的含量J.中成药,2005,27(5)：541543.3 宋 喆,钱 冰.HPLC-ELSD 测定心脾补益颗粒中黄芪甲苷的含量J.中南药学,2005,3(3)：151153.