高效液相色谱法测定黄毛耳草中槲皮素的含量.doc

1、高效液相色谱法测定黄毛耳草中槲皮素的含量【关键词】 高效液相色谱法 摘要:目的 建立黄毛耳草中槲皮素含量的测定方法。方法 色谱柱:ODS Kromasil C18 色谱柱（ 4.6 mm150 mm，5 m） ；柱温：35 ;流动相：甲醇 0. 4 %磷酸 (体积比 4555),流速：1.0 mL/min,检测波长：365 nm。结果 槲皮素进样量在 0.0050.045 g 范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9997),回收率 99.88 %,RSD 0.58 %。结论 本法简便,结果可靠，可用于黄毛耳草及其制剂的质量控制。 关键词:黄毛耳草;槲皮素;含量测定;高效液相色谱法 Abstra

2、ct: Objective To establish an HPLC method for content determination of quercetin in Hedyotis chrysoticha (Palib.) Merr. Methods HPLC method was carried on Kromasil C18 column using methanol0.4% phosphoric acid (4555) as the mobile phase under the detection wavelength of 365 nm.Results The calibratio

3、n curve for quercetin was linear in the range of 0.005-0.045g. The average recovery was 99.88 % with RSD 0.58 %. Conclusions The method is simple,convenient and reliable for quality control of Hedyotis chrysoticha (Palib.) Merr. Key words:Hedyotis chrysoticha; HPLC; quercetin 黄毛耳草为茜草科植物黄毛耳草 Hedyotis

4、 chrysoticha (Palib.) Merr.的干燥或新鲜全草。夏、秋季收，晒干或鲜用。主要产地：安徽、江苏、浙江、江西、福建、湖南、广东、广西、云南等省区。味辛、微苦，性凉。功能清热利湿，散瘀止血，解毒消肿(1994 年上海市中药材标准） 。据文献报道，黄毛耳草含有生物碱类、环烯醚萜类、黄酮类等化学成分，如异鼠李素-3-芸香糖苷、芦丁等 1 。有文献报道了黄毛耳草中乌索酸的分离制备及定量分析2 。为更有效地对其进行质量控制,本文建立了黄毛耳草中槲皮素的高效液相色谱测定方法。 1 仪器与试药 高效液相色谱仪（LC10ATvp，SPD10Avp 紫外检测器） ；6010-可见紫外分光光度

5、计（安捷伦科技上海有限公司） ；pH S3B pH 计（上海雷磁精密仪器厂） ；METTLER TOLEDO AB135-S 十万分之一电子天平；CQF-I-6超声波清洗机。 黄毛耳草药材由芜湖市医药公司提供,经芜湖市药品检验所中药室刘承军鉴定为 Hedyotis chrysoticha (Palib.) Merr.的干燥全草;槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0819003） ；其余试剂均为分析纯或色谱纯。 2 色谱条件及系统适应试验 色谱柱：ODS Kromasil C18 色谱柱（ 4.6 mm150 mm，5 m） ；柱温：35 ;流动相：甲醇 0.4%磷酸 (体积比 455

6、5),流速：1.0 mL/min,检测波长：365 nm；进样量： 5 L。理论塔板数不低于 3 000，分离度大于 3.0。对照品与样品的色谱图见图 1、图 2。 3 方法学考察 3.1 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品适量,加甲醇溶解,制成每 1 mL 含桷皮素 5 g 的溶液，即得。 3.2 供试品溶液的制备 取本品粉末约 1. 5 g,精密称定,置 50 mL 磨口圆底烧瓶中,精密加入 5%()硫酸乙醇 25 mL,称定重量。水浴回流 2.5 h,放冷,再称定重量,用 95%()乙醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得。 3.3 线性范围 将对照品溶液分别进样 1、3、5、7、9

7、 L,测定峰面积,以峰面积积分值（A）为纵坐标,槲皮素进样量（m）为横坐标绘制标准曲线,回归方程为: A = 774.1m+0.36,r=0.9997 。槲皮素在 0.0050045 g 范围内与峰面积具有良好的线性关系。 3.4 精密度试验 取同一浓度对照品溶液重复进样 6 次,槲皮素峰面积的 RSD 为1.07%，表明精密度良好。 3.5 稳定性试验 将样品溶液在室温下贮存,于 0、2、4、8、12、24 h 测定,结果桷皮素峰面积 RSD 为 1.52%，表明样品溶液在室温下放置 24 h 内基本稳定。 3.6 加样回收率试验 采用加样回收法，精密称取适量已知含量的同一批号样品 6 份，

8、每份 1 g，分别精密加入槲皮素对照品溶液（0.20 mg/mL）0.3 mL、0.4 mL、0.5 mL，振摇混匀，按上述样品含量测定项下的供试品溶液配制方法操作，记录色谱图，以峰面积，按外标法计算，测定槲皮素含量，计算回收率和相对标准偏差，结果见表 1。表 1 槲皮素加样回收率试验结果（略） 3.7 重复性试验 同一批样品分别称取 5 份,分别测定含量,结果桷皮素峰面积 RSD 为1.03%。 3.8 含量测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5 L,注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件,以外标法计算含量。3 批黄毛耳草药材槲皮素含量分别为:0.0817,0.0830,0.0795 m

9、g/g 。 4 讨 论 4.1 色谱条件的确定 本实验用甲醇 0. 4 %磷酸 (体积比 4555)可将槲皮素与其他峰分离,且流动相配比简单。在实验中曾考察了甲醇 0.4%磷酸不同比例(体积比 5545,5050,4555,4060) 对槲皮素峰的影响,结果表明,流动相比例除对保留时间有一定影响外,对槲皮素峰的分离和峰纯度无影响。 4.2 提取条件的选择 在实验中比较了冷浸、冷浸后再超声、热回流提取等提取方法,结果表明热回流提取最好,因此选用热回流提取方法。并考察了提取时间的影响,结果回流 2.5 h 提取率较高。 4.3 黄毛耳草的质量控制 黄毛耳草因疗效独特而广泛应用于临床,然而其质量评价方法报道极少,因而本试验为黄毛耳草及其制剂的质量控制提供了分析方法。 参考文献: 1彭江南，冯孝章，梁晓天.黄毛耳草化学成分的研究J. 中国新药杂志,1999,8 (11) :741. 2陈武,邹盛勤,李开泉.黄毛耳草中乌索酸的分离制备及定量分析J.宜春学院学报，2005，27（2）：1.