常见微生物标本的采集保存与送检.ppt

1、2018/7/17,1,常见微生物标本的采集、保存与送检,茂名市CDC流行病学培训班 麦充志 2011、3,2018/7/17,2,碗与筷子的关系,2018/7/17,3,标本采集,采集时间-何时采采集种类-采什么采集方法-怎么采采集数量-采多少,2018/7/17,4,怎么采,样品采集程序 采样用物品准备 采样程序方法 采样记录 样品编号 样品保存 样品送检,2018/7/17,5,采多少,所有标本在采集时立即分装，一式 N 份(不同检验项目、重复实验、其它实验室复核、留样),2018/7/17,6,样本采集的一般需要量 样品种类 检验目的 样品量 饮用水 全分析及致病菌 5 l 液体食品

2、致病菌或毒物分析 可疑食物200ml 固体食品 致病菌或毒物分析 可疑食物200g 呕吐物 致病菌或毒物分析 50g(ml) 洗胃液 致病菌或毒物分析 200ml 腹泻物 致病菌或毒物分析 50g(ml) 血液 病原分离、抗体分析 5ml 脑脊液 病原分离 2ml 皮损分泌物 病原分析 灭菌生理盐水浸泡棉签涂取,2018/7/17,7,标本标签内容,最小包装（每个标本）每个包装箱每批样本后要附上一个样本清单，详细列出此批样本的名称、状态和注意事项。,2018/7/17,8,样本编号唯一性样本来源从什么物质、材料中采集的，如病理采集的肝脏就可标注为某某患者肝脏样本数量包装中样本的数量，如：此包装

3、中同时采集了2块肝脏样本，就要标注为2 采样时间：采样地点：采样人：样本处理情况：抗凝剂 、运送培养基、标本状况（开封食品）,2018/7/17,9,标本的保存、包装、运送,样品的保存容器、介质、温度样品的包装感染性样本样品的运送标本应由专业人员专人运送，最好使用专车交接手续,2018/7/17,10,怎么检,对重大事件的毒物鉴定或样本检测要同时送数家具有鉴定检验资质的实验室同步开展工作，避免因实验室管理和技术因素对结果的影响。,2018/7/17,11,要达到有效控制疫情的目的，必须做到,早期发现和报告可疑病例；快速的流行病学调查；实验室对病原体的快速确诊；实施有效的控制措施。,2018/7

4、/17,12,实验室诊断的目的意义,识别暴发、确定病因 确定传染来源确定流行范围确定传播链 发现特殊的毒株判断院内交叉感染疫苗实施项目的考核 仲裁依据,2018/7/17,13,实验室对病原体的快速确诊依靠,技术和试剂储备充分收集适当的、足够的标本正确的包装和快速运送到实验室适当的生物安全和消毒措施，以减少疾病 进一步扩散的可能。,2018/7/17,14,围绕病因假设,确定检验项目，采集标本,专业知识、经验充分物质准备高度的责任心,2018/7/17,15,在去现场之前，应考虑到以下的问题,在进行临床和流行病学信息评估时，需考虑引起暴发的潜在病原体； 地方性疾病谱和流行季节谱可进一步缩小可能

5、的因素；同时还必须考虑到多种病原体感染可出现相似的临床表现，因而需要采集多种类型的标本用于定义暴发的原因。,2018/7/17,16,采样基本原则,尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守无菌操作、正确保存和运送。容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。,2018/7/17,17,标本种类和采集时间,血液标本全血标本采集血清标本采集第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集第二份血清应在发病后第34周采集在病愈出院或死亡前采集血标本1份,2018/7/17,18,血液标本的采集,目的：血培养、分离血清血培养：怀疑是细菌性疾病，特别是脑膜炎或疑似菌血

6、症的病人均要抽血。在病人高热时可采取静脉血3ml，注入双相血培养瓶（也可用盛有30ml葡萄糖肉汤的三角瓶）内增菌培养。分离血清用于抗体检测。在疾病急性期和恢复期各采血2-3ml,2018/7/17,19,血培养瓶含有0.025%SPS（聚茴香脑磺酸钠sodium polyanethol sulfonate SPS），可以起到抗凝、抗吞噬、抗鳌合的作用；还含有树脂、炭颗粒，可吸收血液中的抗生素，提高细菌培养的阳性率。血量3ml时，将血分别放入两个血培养瓶，若瓶子装血太多将降低降低阳性率。,2018/7/17,20,用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟，15002000rpm离心1

7、0分钟，收集血清于2ml无菌螺口塑料管中,2018/7/17,21,标本种类和采集时间,呼吸道标本上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液下呼吸道标本：呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本尽早采集上述标本，发病一至两周也可采集,2018/7/17,22,2018/7/17,23,呼吸道标本,2018/7/17,24,拭子的选择,应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐棉拭子和木柄。,2018/7/17,25,2018/7/17,26,急性呼吸道综合症的可疑暴发,可能的病原体,白喉链球菌性咽炎猩红热,汉坦病毒肺综合症,百日咳嗜血流感杆菌呼吸道合

8、胞病毒,肺链军团肺炭疽肺鼠疫支原体,喉拭子血清,血清,鼻咽拭子血清,血培养血清痰、尿肺泡灌洗液,流感禽流感,咽拭子气管吸取物血清,2018/7/17,27,需要准备的材料,运送培养基、拭子、压舌板消毒的螺旋盖管、真空采血管、5ml注射器75%酒精、压脉带、记号笔等。,2018/7/17,28,运送培养基的选择,维持活力，不增菌的非营养性半固体培养基Stuarts, Cary-Blair, Amies, STGG 四种主要的运送培养基。,2018/7/17,29,127CSoft aluminum wire - green cap软金属，易弯曲.,143C Regular aluminum wi

9、re - orange cap男性尿道拭子,139CDouble plastic swabs - red cap咽拭子、阴道拭子、伤口和皮肤,2018/7/17,30,195CFlexible twisted wire - blue capDesigned specifically for nasopharyngeal sampling. Very flexible, will bend and yield when in contact with posterior nasopharyngeal wall. Features a safe loop shaped wire tip cover

10、ed with soft rayon.鼻咽拭子标本,2018/7/17,31,2018/7/17,32,Stuarts主要成分,甘油磷酸钠硫代硫酸钠氯化钙亚甲兰琼脂炭粉,2018/7/17,33,Stuarts运送培养基,2018/7/17,34,Cary-Blair运送培养基,克服在运送肠道菌时，因这些菌含有甘油磷酸脱氢酶，造成低度氧化，使细菌能代谢而生长。特别适合于运送含弧菌的标本。研究显示，在28情况下，Cary-Blair可维持弧菌活力22天，沙门氏、志贺氏菌49天；7080副溶血弧菌可达35天。,2018/7/17,35,Cary-Blair运送培养基,2018/7/17,36,Am

11、ies运送培养基-Stuarts的改良产品,（含活性炭）用磷酸盐缓冲液代替甘油磷酸钠等,2018/7/17,37,STGG运送保存培养基(Skim-milktrytone glucose glycerol, STGG）,2018/7/17,38,鼻咽拭子插入STGG培养基后，可立即冻存标本。报告显示，置冰上几小时后再放置-70，肺炎链球菌、嗜血流感杆菌的活力仍能维持，在-20环境可达8周。置于-70的STGG中保存的鼻咽分泌物，其肺炎链球菌的分离率与直接接种平板相似，保存于-20分离率亦可接受,而4环境保存5天，分离率不理想。,STGG运送保存培养基,2018/7/17,39,需要采集的标本,

12、上呼吸道感染：鼻咽拭子咽拭子血下呼吸道感染：痰标本支气管灌洗液胸液血,2018/7/17,40,上呼吸道可能的致病菌,-溶血性链球菌：A、B、C、G群链球菌等； 肺炎链球菌、嗜血流感杆菌、金黄色葡萄球菌；白喉棒状杆菌、百日咳等,2018/7/17,41,下呼吸道感染性疾病可能的致病菌,肺炎链球菌嗜血流感杆菌肠球菌肺炎克雷伯氏菌-溶血性链球菌军团菌百日咳菌属 金黄色葡萄球菌脑膜炎奈瑟氏菌属假单胞菌肺炎支原体肺炎衣原体,2018/7/17,42,咽拭子的采集,对健康人群或病人密切接触者进行带菌检验时一般采咽拭子。用无菌棉拭子擦取悬雍垂后之鼻咽部粘膜数下，应避免接触口腔内其它部分，直接接种到巧克力双

13、抗平板或0.5%葡萄糖增菌肉汤中。,2018/7/17,43,干采用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入含3ml采样液的螺口管中，尾部弃去，旋紧管盖。,2018/7/17,44,咽拭采集的正确与否？,wrong,right,2018/7/17,45,鼻拭子的采集,将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，尾部弃去，旋紧管盖。,2018/7/17,46,鼻咽抽取物或呼吸道抽取物的采集,用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气

14、管抽取呼吸道分泌物。将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采样液冲洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集器）。,2018/7/17,47,咽漱液的采集,用10ml不含抗菌素的采样液漱口。漱口时让患者头部微后仰，发“噢”声，让洗液在咽部转动。然后将咽漱液收集于50ml无菌的螺口塑料管中。无条件的可用平皿或烧杯收集咽漱液并转入10ml螺口采样管中。,2018/7/17,48,深咳痰液的采集,要求病人深咳后，将咳出的痰液收集于50ml含3ml采样液的螺口塑料管中,2018/7/17,49,呼吸道灌洗液的采集,将收集器头部从鼻孔

15、或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器1次（亦可用小孩导尿管接在50ml注射器上来替代收集）,2018/7/17,50,常用的病毒采样保存液成分,pH7.07.6的Hanks液或MEM/DMEM液或生理盐水。在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2g/ml）,2018/7/17,51,病毒采样盒,咽拭子器具,2018/7/17,52,出血点渗液,接种0.5%葡萄糖增菌肉汤或直接接种含双抗巧克力平板和血平板,接种增菌肉汤或直接

16、接种巧克力平板和血平板,咽拭子,血液,接种血培养瓶,分离血清检测IgG,涂片G染色,2018/7/17,53,患者站立或床上坐直，在收集前嘱咐患者用开水含漱口腔；深呼吸，从深部咳痰，将痰吐入已消毒的广口螺旋盖管（2550ml）内；痰量1-2ml，如不足，应重复上述步骤。,痰标本的采集,2018/7/17,54,接种培养板的选择,根据所要检测的目的菌而定，一般选择两种平板：血平板和巧克力平板链球菌属：新鲜绵羊血（或马血）平板奈瑟氏菌属：巧克力平板（CAP），不含抗生素嗜血流感杆菌：含300g/ml的杆菌肽的巧克力平板,2018/7/17,55,标本种类和采集时间,肠道标本粪便标本采集肛拭标本采集

17、发病后尽可能早的采集标本粪便标本采集,2018/7/17,56,肠道标本的采集,采集510g粪便或采集肛拭子标本置于含310ml无菌采样液的螺口管中，严格密封,2018/7/17,57,肠道标本的采集用具,2018/7/17,58,脑脊液标本的采集,正常人的脑脊液是无菌的。以无菌手续通过腰椎穿刺采集脑脊液3-5ml，应立即送检或床边接种。应在35保温运送。,2018/7/17,59,脑脊液(CSF),CSF一经采集，就应尽快送到实验室，运送过程中，标本应置于1837的环境，不要暴露于阳光下或冷冻保存。若CSF不能马上送到实验室处理，延迟在几小时之内，可将血培养瓶或螺旋管盖拧松，置35、5%CO

18、2环境。,2018/7/17,60,CSF,离心10002000rpm，3 5 min,上清（用于胶乳凝集试验）,沉淀 （混匀）,接种平板培养,注：如若CSF不足1ml，不必离心，直接进行G染色和接种培养。,革兰染色,接种血培养,2018/7/17,61,CSF标本的运送和处理,最好床旁接种,涂片,血培养瓶或2ml的0.5%葡萄糖增菌肉汤,巧克力平板或血平板,螺旋管装CSF,2018/7/17,62,尸检标本的采集,尸检标本病人死亡后应尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检主要采集肺、气管、肝、肾、脾、心脏、脑、胃、肠、淋巴结等可疑组织标本同时采集血标本、分泌物或渗出物没有条件

19、进行尸体解剖的，可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本,2018/7/17,63,可疑组织标本 每种组织应多部位取材，每一采集部位分别使用不同消毒器械，以防交叉污染；各部位应取2050g，淋巴结取2个。各部位标本，一半用10福尔马林固定，通常所取组织块固定于不少于510倍以上体积的10福尔马林溶液中；另一半直接放70或液氮罐中保存,2018/7/17,64,血 无菌操作采集死者血液5ml，其2.5ml置无菌玻璃管中，使血球沉淀，吸出血清分泌物或渗出物： 用灭菌棉棒擦拭局部，采集分泌物后，装入放有保存液的试管中,2018/7/17,65,其他标本,出血点瘀斑胸水肺活检标本,2018/7/17

20、,66,出血点、瘀斑：可挑取出血点、瘀斑进行培养和涂片,2018/7/17,67,出血点、瘀斑渗出液,以75%酒精消毒局部皮肤(切忌用碘酒消毒，因其具有渗透作用杀死出血点内细菌)，用无菌针头挑破出血点或瘀斑，轻轻地挤出组织液。用无菌毛吸管吸取渗出液直接接种到血（和巧克力）平板上做分离培养，也可将渗出液涂片，作革兰氏染色镜检。,2018/7/17,68,胸水、肺组织活检标本,胸水 在B超定位下进行胸腔穿刺，抽取胸水5ml，置于无菌的塑料螺口管中肺组织活检标本 在超声或X线定位下，经皮穿刺取肺组织活检标本，置于含3ml采样液的塑料螺口管中,2018/7/17,69,标本保存,用于病毒分离和核酸检测

21、的标本应尽快送样进行检测24小时内能检测的标本可置于4保存24小时内无法检测的标本则应置于-70或以下保存如无70保存条件，则于20冰箱暂存血清可在4存放3天、-20以下长期保存。标本运送期间应避免反复冻融,2018/7/17,70,标本送检程序,一般应立即送检，搁置时间过久，会影响检验结果。如路途较远，应予冷藏保存送检。但有些标本(如怀疑流脑)在送检途中应保存在保温瓶中(37)或密封包装好；放在贴身内衣内保温，尽快送检。不同疾病的标本按照相关疾病的送检程序进行送检,2018/7/17,71,标本分析前的质量控制,标本采取与运送是否正确，对检验结果影响很大，国内权威机构的一次调查，目前各级医疗

22、单位88%的性病检验标本由临床医师采取，经检查，采取标本的合格率仅为46%。,2018/7/17,72,分析前的质量控制是实验室全面质量控制的重要组成部分和基础，也就是说，实验室要想获得准确、可靠及对临床应用有价值的可靠检测结果，必须进行分析前的质量控制，认识和控制分析前的因素，不仅是实验室技术人员的努力方向，也有赖于多部门的配合。,2018/7/17,73,包括医师正确选择检验项目及化验申请、病人准备、样本采集、标本运送及标本保存，任何一个环节处理不当均会影响检验结果的准确性。标本采集是检验质量保证的重要环节之一，标本运送过程中要注意标本的包装、温度要求及处理方法等，要确保分析成分的稳定性，在运送过程中要保持标本管口封闭，向上垂直放置，避免剧烈振动。,2018/7/17,74,谢谢,