贵州野生多汁乳菇对小鼠免疫功能影响.doc

1、贵州野生多汁乳菇对小鼠免疫功能影响【摘要】 目的 观察贵州野生多汁乳菇对正常及环磷酰胺(CP)损伤免疫系统小鼠的免疫调节作用。方法 实验设多汁乳菇组 9.0mg/(kgbw)、多汁乳菇组 9.0mg/(kgbw)+CP、CP 组、正常对照组。灌胃给小鼠多汁乳菇提取液 35d，CP 腹腔注射造成小鼠免疫损伤。观察小鼠体重的生长情况、小鼠脏器系数、血清溶血素、小鼠足趾迟发型超敏反应(DTH)、碳粒廓清指数 等指标。结果 小鼠胸腺系数、血清溶血素(HC50)、小鼠足趾 DTH、碳粒廓清指数 明显高于 CP 组(P0.01)。其中小鼠足趾DTH,碳粒廓清指数 恢复至正常对照组水平。结论 贵州野生多汁乳

2、菇对 CP 所致的免疫损伤小鼠的细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫功能有明显的改善作用。 【关键词】 野生多汁乳菇贵州野生多汁乳菇，又名奶浆菌，盛产在贵州山区，富含人体必需氨基酸及常量、微量元素1 ，贵州野生多汁乳菇具有明显抗辐射作用2 。蘑菇类提取的多糖具有增强机体免疫力、抗辐射、抗肿瘤、抗疲劳等多方面的生物学活性3，4 。本文对野生多汁乳菇改善机体免疫功能的作用进行了研究。1 材料与方法11 材料111 多汁乳菇提取物的制备 市场上购得批次鲜品，测定鲜品平均水份为 893 ，去泥、洗净，在 5560烘箱内烘干，粉碎，过 25 目筛，置干燥器内保存备用。称取一定量的多汁乳菇干品，加适量蒸馏水，

3、煮沸 3 次，每次 05h ，合并 3 次滤液，80水浴浓缩，定容备用。112 实验动物及环境 清洁级雌性昆明种小鼠(贵阳医学院实验动物中心)合格证号 SCXK(黔)2002-0001 ，体重 1822g，小鼠饲料、绵羊红细胞、制备补体用的豚鼠。饲养环境为贵州省疾病预防控制中心洁净动物实验室(合格证号 SYXK(黔)2003-0003)。12 方法121 动物分组与方法 据动物体重随机分组，用雌性小鼠 80只，分为 4 组，每组动物 20 只。设为：(1)正常对照组；(2)多汁乳菇组9g/(kgbw);(3)多汁乳菇 9g/(kgbw)+环磷酰胺(CP)50mg/(kgbw)组；(4)环磷酰胺

4、(CP)50mg/(kgbw)组。每日上午 9：00 灌胃；(2)、(3)组给多汁乳菇提取物;(1)、(4)组灌胃等容积的蒸馏水，连续 35d。(3)、(4)组在开始实验时，每天腹腔注射环磷酰胺 50mg/(kgbw)，连续 7d，实验结束前 5d，(3)、(4)组小鼠再腹腔注射环磷酰胺 100mg/(kgbw)一次。122 测定指标5 (1)动物体重变化：观察动物的一般表现，每周称体重 1 次。(2)免疫器官及脏体系数：试验结束称体重后，处死小鼠，摘取胸腺和脾脏，称重，计算脏体系数。(3)碳粒廓清试验：试验结束时，小鼠左内眦静脉丛注射 33的印度墨水 20ml/(kgbw)，于注射后 110

5、min，分别从右内眦静脉丛取血 20l，放入 2ml 2Na2CO3溶液中，测定 2 次的吸光度(A)值，用吞噬指数 ( 代表小鼠碳廓清的能力)表示。=体重/(肝重+脾重)3K，K=(1gA1-lgA2)/(t2-t1)，t1、t2 代表注射墨汁后的 2 次取血时间。(4)血清抗绵羊红细胞(SRBC)抗体测定(HC50)：用 2% SRBC 腹腔免疫小鼠 4d 后，眼内眦静脉取血，分离血清，测定血清抗体水平，以半数溶血值(HC50)表示，HC50=样品吸光度值/SRBC 半数溶血时的吸光度值稀释倍数。(5)迟发性变态反应(DTH)：用 2SRBC 腹腔免疫小鼠后第 4d,在其左后趾部皮内注射

6、20% SRBC，注射后 24h 测定足趾部厚度，以攻击前后足趾厚度差值(mm)表示。13 统计分析 采用 SPSS110 软件进行方差分析。2 结果21 一般状况 在实验期间，腹腔注射 CP 的小鼠在实验开始 3d后，表现为精神不振、呆卧、竖毛、少食，实验到 14d 后，小鼠基本恢复正常。正常对照组和多汁乳菇组小鼠体重变化从 04 周生长体重呈增加趋势，至第 4 周小鼠平均体重基本相等；多汁乳菇+CP 组从 04 周体重呈增加趋势，第 4 周时平均体重低于正常对照组；CP 组小鼠在第 2 周时平均体重低于第 1 周，以后呈增加趋势，第 4 周时平均体重低于正常对照组。22 对小鼠各器官重量的

7、影响(表 1) CP 组的胸腺指数较正常对照组明显降低(P001) ，说明用 CP 免疫小鼠，使模型组的胸腺明显萎缩，免疫功能下降，在给 CP 的同时给予 9g/(kgbw)多汁乳菇后，该组的胸腺指数明显高于 CP 组，提示多汁乳菇能促进小鼠胸腺的生长发育，增强免疫力。多汁乳菇+CP 组和 CP 组的脾脏系数由正常的430mg/g 上升至 982 和 767mg/g ，明显高于正常对照组(P001) ，这可能与本次实验建立的免疫缺陷模型的方式有关。表 1 各实验组小鼠脏器系数（略）注：与正常对照组比较,a P001 ；与 CP 组比较，b P00523 对小鼠血清溶血素的影响(表 2) 利用

8、SRBC 免疫小鼠后，产生抗 SRBC 抗体(溶血体)，与 SRBC 一起孵育，在补体参与下可发生溶血反应，通过测定 Hb 含量反映血清溶血素的含量。昆明种小鼠在受 CP损伤后，血清 HC50 明显下降，但在同时给 9g/(kgbw)的多汁乳菇后，HC50 明显升高(P001) ，但仍明显低于正常对照组(P0.01)。提示多汁乳菇能增强免疫损伤小鼠的体液免疫功能，但不能使之恢复到正常水平。表 2 各实验组小鼠的免疫指标（略）注：与正常对照组比较,a P001 ；与 CP 组比较，b P00124 对小鼠 DTH 反应的影响 CP+9g/(kgbw)的多汁乳菇组明显提高小鼠足趾厚度差值(P001

9、) ，且与正常对照组比较差异无统计学意义。提示多汁乳菇能增强免疫损伤小鼠的细胞免疫功能，并使之恢复到正常水平。25 对小鼠吞噬功能碳粒廓清指数的影响 碳粒廓清指数表示在一定范围内，小鼠清除进入机体碳粒的速率，是非特异性免疫功能的1 个指标。CP+9g/(kgbw)的多汁乳菇组明显提高小鼠的碳粒廓清速率(P001) ，且与正常对照组差异无统计学意义。提示多汁乳菇能明显改善免疫损伤小鼠的非特异免疫功能，并使之恢复到正常水平。3 讨论本次实验小鼠在开始实验时腹腔注射 CP50mg/(kgbw)7d，在实验结束前 5d，再腹腔注射一次 CP100mg/(kgbw)后，小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性

10、免疫功能指标均比正常对照组明显降低，说明免疫受损模型是成功的。在机体免疫系统受损的同时给野生多汁乳菇提取液9mg/(kgbw) 35d 后，血清溶血素、DTH、碳粒廓清指数、胸腺指数较CP 组都有明显提高，其中 DTH、碳粒廓清指数 恢复至正常水平。这提示多汁乳菇对细胞免疫功能和非特异性免疫功能有较好的保护作用。血清溶血素水平多汁乳菇+CP 组明显高于 CP 组，但未恢复至正常水平。这可能是因为体液免疫功能对免疫损伤较敏感。体液免疫功能恢复需要具有分泌抗体能力 B 淋巴细胞的恢复才能体现，这导致小鼠体液免疫系统免疫损伤的恢复时间较长。本次实验结果表明，多汁乳菇具有明显改善受损机体免疫功能的作用，但其具体的功效成分、作用强度及最佳生物学效应还有待进一步研究。【参考文献】1 周庆珍，苏维词.贵州野生多汁乳菇营养成分分析J.营养学报，2003，25(2)：130-132.2 刘佳，高敏，向红.野生多汁乳菇抗辐射作用研究J.中国公共卫生，2006，22(4)：453-454.3 方积年，王顺春.香菇多糖的研究进展J.中国药学杂志，1997，32(6)：332-334.4 杨娟，吴谋成，张声华，等.香菇多糖抗疲劳作用研究J.营养学报，2001，23(4):350-353.5 中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范S.2003：22-39.