九节龙皂甙对8株人癌细胞的抑制作用.doc

1、九节龙皂甙对 8 株人癌细胞的抑制作用作者：梁克明，王四旺，王晓娟 【关键词】 人癌细胞 关键词: MTT;九节龙皂甙;药物敏感性;人癌细胞 川产九节龙（Ardisea pusilla A.PC）系紫金牛科紫金牛属植物的全草，九节龙皂甙（Ardipusilloside）是从该全草中分离出的 C 53 H 86 O22 .2H2 O，经初步药理试验表明具有提高免疫功能的作用1 .我们采用 MTT 法观察九节龙皂甙对 8 株人癌细胞的细胞毒作用. 1 材料和方法 1.1 材料 肝癌（SMMC-7721） ，本校西京医院中医科提供;肝癌（HCC-9204） ，本校病理科提供;胃癌（SGC-7901）

2、 ，本校西京医院消化内科提供;卵巢癌（HO-8910）本校西京医院妇产科提供;宫颈癌（Hela）本校 403 研究所提供;肺癌（A549） 、食管癌（Eca-109） 、肾癌（GRC-1）本校实验动物研究中心提供.九节龙皂甙由本校药物研究所提纯，批号:971017;丝裂霉素（MMC）日本协和发酵工业株式会社生产，批号:174AGF;MTT（SIGMA 公司产品）.两种药物终浓度均为:50.0mg L-1 25.0mg L-1 12.5mg L-1 6.25mg L-1 3.13mg L-1 1.56mg L 1.2 方法 将 8 株人癌细胞制成单细胞悬液，接种于 96 孔平面培养板中，调正细胞

3、数为 5104 mL-1 ，每孔细胞悬液 100L.将 96 孔板置于 37，50mL L-1 CO2 饱和温度的二氧化碳培养箱培养 24h，设实验，阴性对照及阳性对照孔.实验和阳性对照孔分别加入 50.0mg L-1 ，25.0mg L-1 ，12.5mg L-1 ，6.25mg L-1 ，3.13mg L-1 ，1.56mg L-1 的九节龙皂甙及 MMC，阴性对照孔加入等量的培养液，以不含细胞的 1640 完全培养液为空白对照，每组 6 个平行孔，继续培养 72h，去除培养液，加入 5g L-1 MTT20L，继续培养 4h，加入二甲基亚砜（DMSO）150L/孔，并振荡待紫蓝色结晶完全

4、溶解，采用 DG-3022 型酶标仪（国营华东电子管厂）测各孔的吸光度值（A490nm ） ，按公式（实验孔平均 A490nm 值/阴性对照孔平均 A490nm 值）100%计算，并以实验药物浓度的对数为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制剂量效应曲线，并求半数细胞抑制剂量值（IC50 ）. 统计学处理:采用 SPLM 软件方差分析，q 检验. 2 结果 对照孔光镜下见细胞贴壁生长，细胞界限清楚，核分裂相明显，有伪足伸出;加药孔细胞生长缓慢，可见细胞皱缩，分裂相减少或停止，胞质粗糙，死亡脱落细胞增加.人癌细胞各细胞株对九节龙皂甙敏感性即IC50 （mg L-1 ）分别为 :SMMC-77213.74

5、;HCC-92044.53;A5494.31;SGC-79017.09;HO-89103.56;Hela3.43;Eca-1096.10;GRC-19.36.九节龙皂甙对 8 株人癌细胞的 IC50 9.36mg L-1 ，同时，随药物浓度的增加，细胞存活率逐渐下降呈现剂量效应依赖关系（P0.01，图 1）. 3 讨论 自 1983 年 Mosman3 发表 MTT 法以来，许多实验证明 2-4 MTT 法是一种敏感、稳定、快速、简便、经济的方法. 我们采用 MTT 法观察了九节龙皂甙对 8 种人癌细胞株的杀 伤作用，以 IC50 为指标，发现 Hela 对九节龙皂甙最敏感;而 GRC-1，S

6、GC-7901，Eca-109 敏感较差，这一结果恰好与临床上化学治疗对肾癌、胃癌、食管癌大多疗效不佳极为相似5 .癌细胞株存活率与九节龙皂甙的剂量、作用时间有密切关系，剂量大，作用时间长，其存活率低，反之，则相反.8 种人癌细胞株 MMC 处理 1h，MMC12.5mg L-1 组，光镜下可见癌细胞呈散在碎片坏死，看不见完整的细胞结构，MMC6.25mg L-1 组，细胞皱缩不等;相同剂量和作用时间相同情况下，九节龙皂甙处理组癌细胞变化不明显，而处理 24h，九节龙皂甙组细胞出现皱缩，多呈圆形，胞质粗糙，死亡脱落细胞增多;处理 72h，九节龙皂甙25.0mg L-1 与 MMC组细胞存活率相

7、比无差异（P0.05）.表明 MMC 具有较强细胞毒作用，而九节龙皂甙直接作用癌细胞的细胞毒较低.至于九节龙皂甙影响癌细胞的生长机制，还有待进一步研究. 参考文献: 1Zhang QH，Wang XJ，Miao ZC，Feng R.Studies on the saponin constituents of jiujielong（Ardisia pusilla） J.Yaoxue Xuebao（Acta Pharm Sin） ，1993;28（9）:673-678. 2Mosman T.Rapid colorimetric assay for cellular growth and survi

8、val:application to prolifention and cytotoxici by assays J.J Immunol Methods，1983;65:55. 3Cole S，Rapid chemosensitivity testing of human lung tumor cells using the MTT assay J.Cancer Chemother Pharm，1986;17:259. 4Sargent JM，Taylor CG.Appraisal of the MTT assay as a rapid test of chemosensitivity in acute myeloid leukacmia J.Br J Cancer，1989;60:206. 5Fditor in Chief:Han R.Chemoprevention and drug therapy of cancer M.Beijin:Beijin Yike Daxue.Zhongguo Xiehe Yike Daxue Lianhe Chubanshe（United Press of Chinese Xiehe Medi-cal University） ，1994:611-613;582-583;574-576.