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流式细胞术检测九节龙皂甙对Hela细胞凋亡的诱导作用.doc

1、流式细胞术检测九节龙皂甙对 Hela 细胞凋亡的诱导作用作者:梁克明 王四旺 谢艳华 王晓娟 【关键词】 九节龙皂甙 关键词: 九节龙皂甙;细胞凋亡;流式细胞术;Hela 0 引言 细胞凋亡(Apoptosis)是一种生理性细胞程序化死亡,与肿瘤的发生、发展密切相关,已成为当前肿瘤研究的新热点.九节龙皂甙是从川产九节龙全草中提出的单体1 ,我们观察九节龙皂甙诱导 Hela 细胞凋亡,采用流式细胞术(flow cytometry,FCM)进行分析,结果如下: 1 材料和方法 1.1 细胞系及细胞培养 人宫颈癌细胞株(Hela)为上皮样癌细胞,本校 403 研究所提供.细胞培养方法见参考文献2.

2、1.2 细胞凋亡的诱导和分析 实验组分别以1.5650.0gmL-1 九节龙皂甙(本校药物研究所提供)作用Hela 细胞(106 mL-1 )072h,未经过药物处理的细胞为阴性对照组,加入等量培养液(100mLL-1 胎牛血清的 RPMI1640 培养液)中细胞常规培养,按作用不同时间,分别收集细胞,经 PBS 洗涤2 次,加入-4700mLL-1 乙醇固定过夜,离心收集细胞,再经PBS 洗涤后,依次加入膜穿孔剂,溴化乙锭(PI)和 Rnase4染色30min,350 目筛网过滤,Epics-profile流式细胞仪(美国 Coulter 公司)上进行 DNA 含量及细胞周期分析. 2 结果

3、 细胞凋亡过程中,核内 DNA 被降解成寡核苷酸片断,经 PI 染色后可直接观察到细胞 DNA 含量变化.染色的小分子 DNA 在细胞周期分布图中,形成正常二倍体细胞 DNA 峰(G1 峰)之前的亚二倍体峰,即 Apoptosis峰(亦称 Ap 峰) ,是凋亡细胞核固缩及 DNA 降解的结果,根据 Ap 峰可测凋亡细胞占细胞总数的比例.图 1 示 6.25mgL-1 作用 48h 后 G1 峰前出现凋亡峰,占细胞总数的 34.5%,而阴性对照组细胞 G1 峰无凋亡峰出现(图 2). 图 1 图 2 略 3 讨论 九节龙皂甙各剂量处理组随时间的增加 S 期(DNA 合成期)及 G2 期(DNA 合成后期)细胞数少于阴性对照组,G1 期(DNA 合成前期)细胞数较阴性对照组增加,表明九节龙皂甙抑制了癌细胞 DNA 合成,使癌细胞增殖活性受到抑制.同时在计算机显示屏上动态观察到,九节龙皂甙处理 48h 后,随电压增高,大部分细胞碎片移动,但有部分细胞并不移动,这一现象可能是药物使 Hela 细胞改变了形态,体积减小所致,至于确切其机制有待进一步阐明. 参考文献: 1张清华,王晓娟,缪振春.川产九节龙皂甙的化学研究J.药学学报,1993;28(9):673-678. 2司徒镇强,吴军正主编.细胞培养M.西安:世界图书出版公司,1996:127-134.

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