马钱子及其不同炮制品水煎出物中士的宁和马钱子碱的含量测定.doc

1、马钱子及其不同炮制品水煎出物中士的宁和马钱子碱的含量测定【摘要】 ：目的 用 HPLC 法对马钱子的江西法炮制品及其改良法炮制品的水煎出物中士的宁和马钱子碱含量进行测定。方法 色谱柱填料为硅胶,流动相为正己烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨水(47.547.550.35),检测波长为 254 nm。结果 江西法炮制品及其改良法炮制品中士的宁和马钱子碱的含量较低。其中以醋浸砂炒品中的含量为最低。结论 江西法及其改良法炮制的马钱子比其砂烫法和油炸法更易降低毒性,使其安全范围增大,从而提高其临床用药的安全性。 【关键词】 马钱子 炮制 士的宁 马钱子碱 高效液相色谱法 含量测定Abstract：Objecti

2、ve HPLC method was used to determine strychnine and brucine in the decoction of Semen Strychni and its processed products of Jiangxi methods and innovated methods. Methods SiO2 was used as the stationary phase, n-hexanedichloromethanemethanolammonia (47.547.550.35) as the mobile phase, with detectio

3、n wavelength at 254 nm. Result The contents of strychnine and brucine in the processed products of Jiangxi methods and innovated methods were low. The content of that in acetic acid-soaked product scalded with hot sand was the lowest. Conclusion Semen Strychni and its processed products of Jiangxi m

4、ethods and innovated methods can lower the toxicity and improve the safety of clinical use.Key words：Strychnos nux-vomica L.；processing；strychnine；brucine；HPLC；determination马钱子为马钱科植物 Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子。主要成分为生物碱类,其中主要是士的宁,其次是马钱子碱,为临床常用毒剧中药,具有通络止痛、散结消肿的功效。目前研究较多的主要是药典法炮制的砂烫马钱子和北方法炮制的油炸马钱子,

5、而马钱子的江西传统炮制方法及相关改良法的研究较少,有些炮制方法如樟帮的尿泡滑石粉炒法和建帮的尿泡砂炒法甚至未见报道。本试验来用高效液相色谱法对马钱子及其各炮制品的水煎出物中士的宁和马钱子碱含量进行了测定。1 实验材料1.1 仪器Agilent 1100 Series 高效液相色谱仪,7725i 柱温箱,Agilent 1100 色谱管理系统,可变波长扫描紫外检测器(VWD)。1.2 试药对照品士的宁和马钱子碱均购于中国药品生物制品检定所。士的宁(批号 0705-200005)供含量测定用；马钱子碱(批号 0706-9403)供鉴别用,经纯化后,用归-化法测定含量为 98.5%。甲醇为色谱纯,其

6、余试剂均为分析纯。样品马钱子购自樟树药材市场,经鉴定为马钱科植物马钱Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子。2 样品炮制2.1 砂烫法取生马钱子粉碎成细粉,按中华人民共和国药典2005 年版(一部)马钱子项下方法炮制。2.2 油炸法1取市售麻油,倒入铁锅中加热至 235 左右(以 400 的温度计距锅底 3 mm 处测定),投入马钱子炸至老黄色为度(约 3 min),取出,沥尽油,晾干即得。2.3 樟帮尿泡法2原药放入童便中浸 49 d(夏季放入冰箱中,温度控制在 1520 左右)至鼓胀,取出,再用清水(长流水)漂约 1421 d,取出,刮去绒毛,再用水漂 7 d,捞出,

7、沥干水,用樟刀切成腰子片,晒干。2.4 樟帮尿泡滑石粉炒法2取尿泡马钱子片,用滑石粉炒至黄色,筛去滑石粉,研末即可。2.5 建帮尿泡砂炒法取原药材加入童便浸泡,加盖置 49 d 后取出,用清水搅拌冲洗尽尿汁,再加清水漂 35 d,取出,用碎瓷片刮去绒毛,切薄片,晒至全干。取定量的净白砂,入锅内用武火炒至洪热或轻松流利,倒入马钱片,转文火不断翻炒至表面鼓起、转棕褐色时,迅速出锅,筛去砂子,摊凉,再碾细末。2.6 醋酸浸法取净马钱子,用水泡 2 d,润半天,洗净,切 1.5 mm 的薄片,再用 5%的醋酸溶液浸泡 5 d,水漂 3 d,干燥,碾碎。2.7 醋酸浸泡砂炒法取醋酸浸马钱子片,按砂烫法项

8、下炮制。2.8 醋酸煮法取净马钱子用水泡 2 d,润半天,洗净,切 1.5 mm 的薄片,用%的醋酸溶液缓火煮 1.5 h,取出,晾干。2.9 醋酸煮砂炒法取醋酸煮马钱子片,按砂烫法项下炮制。3 结果3.1 色谱条件色谱柱：Hypersil SiO2 (4.6 mm200 mm,5 m)；流动相：正己烷-二氯甲烷-甲醇-浓氨水(47.547.550.35)；流速：1 mL/min；检测波长：254 nm。士的宁和马钱子碱的分离度值大于 1.5,定量方法为外标工作曲线法。士的宁和马钱子碱的理论塔板数分别不低于 2 500 和 3 000。3.2 标准曲线的绘制精密称取士的宁和马钱子碱对照品分别为

9、 11.60 mg 和 11.20 mg,置25 mL 容量瓶中,加氯仿至刻度,作为混合对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液 3、5、7、9、11、13 L,注入液相色谱仪,测定其峰面积积分值。以进样量为横坐标,峰面积值为纵坐标绘制标准曲线。士的宁和马钱子碱的回归方程分别为：Y2 116.75X9.29,r0.999 9；Y1 249.84X21.35,r0.999 8。3.3 精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液 15 L,注入高效液相色谱仪,重复进样 6 次,计算,RSD 分别为：士的宁 2.01%,马钱子碱 1.75%。3.4 重现性试验对砂烫品煎出液测定 5 次,结果士的宁平均含量为 0

10、.329%, RSD1.86%；马钱子碱平均含量为 0.108%,RSD2.68%。3.5 稳定性试验取同一样品试液,分别于 2、4、6、8、10、12 h 进行测定,得士的宁和马钱子碱的 RSD 分别为 2.14%和 2.32%。3.6 回收率试验采用加标回收法,取已知含量的炮制品 5 份,精密称取,精密加入对照品贮备液适量,按样品测定项下方法操作,计算回收率。结果见表 1、表2。 表 1 士的宁加标回收率试验结果(略)表 2 马钱子碱加标回收率试验结果(略)3.7 含量测定将马钱子生品和炮制品切成小块后粉碎成细末,过 3 号筛。精密称取生品及其炮制品各 3 份,每份约 5 g,置 100

11、mL 烧杯中,加水 35 mL 浸 1 h,煎45 min,滤出药液,药渣再加水 20 mL,煎 20 min,过滤,合并滤液并定容至50 mL,再精密量取 20 mL 于分液漏斗中,加氨水调 pH 至 910,用氯仿萃取 4 次(15、10、5、5 mL),合并氯仿萃取液,水浴浓缩,定容至 25 mL。按“3.1”项下色谱条件测定,每次进样 15 L,求得样品煎煮液中士的宁和马钱子碱的含量。结果见图 1、表 3、表 4。表 3 不同炮制方法马钱子中士的宁含量测定结果(略)表 4 不同炮制方法马钱子中马钱子碱含量测定结果(略)4 结论马钱子各炮制品的水煎出物中士的宁和马钱子碱含量以油炸品和砂烫

12、品为高,其中油炸品最高,与生品比较仍达 90%以上,这可能与马钱子经油炸和砂烫后质地疏松,其化学成分易于煎出有关。江西法及其改良法炮制品的水煎出物中士的宁和马钱子碱含量较低,其中以醋浸砂炒品最低,士的宁含量为 0.132%,仅为生品的 31.7%,马钱子碱含量为 0.031%,仅为生品的 21.8%。马钱子碱的毒性为士的宁的 1/8,但其疗效却只有士的宁的1/40,各炮制品中马钱子碱含量下降均比士的宁大,达到了去掉疗效差、毒性大的马钱子碱的目的。可见,江西法及其改良法炮制的马钱子比其砂烫法和油炸法更易降低毒性,使其安全范围增大,从而提高其临床用药的安全性。改良法用 5%醋酸溶液代替童便炮制马钱子可缩短炮制时间、简化炮制程序,且 5%醋酸溶液与童便 pH 值大致相当,均为 56,醋酸廉价易得,醋味宜人。故可考虑用 5%的醋酸溶液代替童便炮制马钱子。【参考文献】1 吴 皓,蔡宝昌,郑培新,等.炮制对马钱子中生物碱的影响J.中国中药杂志,1994,19(5)：277279.2 龚千锋.樟树中药炮制全书M.南昌：江西科学技术出版社,1990.250.