蒙药阿给生药及炭药中总黄酮的含量测定.doc

1、蒙药阿给生药及炭药中总黄酮的含量测定作者：张婉，唐丽，谢坤，崔箭【摘要】 目的对蒙药阿给生药及炭药中的黄酮类成分进行初步的定性、定量分析。方法采用显色反应进行定性检识，并以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定总黄酮含量。结果 阿给生药及炭药均含有黄酮类成分，但两者所含主要黄酮类成分的类型有所差异；生药与炭药的总黄酮含量分别为 4.78%，2.26%，生药总黄酮含量约为炭药的 2 倍。结论炮制对阿给药材中黄酮类成分类型及总黄酮含量有一定的影响。分光光度法简便灵敏，重现性良好，适用于阿给总黄酮的含量测定。 【关键词】 蒙药阿给； 总黄酮； 定性检识； 含量测定Abstract：ObjectiveT

2、o identify and determine the total flavonoids in raw and charred Agei. MethodsThe species of flavonoids in samples were identified by color reactions, and the contents of total flavonoids were measured through UV spectroscopy using rutin as control. ResultsThe main species of flavonoids in raw and c

3、harred Agei were different, and the average contents of total flavonoids in raw and charred Agei were 4.78% and 2.26% respectively. ConclusionDrug-processing had some effect on the species and the content of total flavonoids in Agei. Spectrophotometry was an easy operated, accurated, reproducible me

4、thod for content determination of total flavoniods.Key words： Mongolian drug Agi; Total flavonoids; Qualitative identification; Content determination 阿给为菊科蒿属植物冷蒿 Artemisia frigida Willd. (Compositae)的小灌木，又名小白蒿、菟毛蒿，具有蒿类的芳香气味，是蒙古族常用的药用植物，蒙药名阿给。蒙医药大师占布拉道尔吉编著的无误蒙药鉴中有其药用记载。阿给味苦，性燥、淡、糙、钝、凉，有止血、消肿、消“奇哈”之功效

5、13 ，尤其是其炒炭炮制品止血效果显著，疗效在几百年的应用中得到了证实。通过预试验发现，黄酮类物质是阿给的主要化学成分。现代药理研究表明，黄酮类成分具有抗菌消炎、抗氧化、抗肿瘤、镇痛等多种生理活性。但迄今未见阿给炒炭前后黄酮类成分类型及总黄酮含量的文献报道。本实验通过化学显色反应对阿给炒炭后黄酮类化学成分进行了定性检识，并采用紫外分光光度法测定了总黄酮的含量，为合理地开发利用这一宝贵的民族药物提供参考。1 仪器与材料1.1 仪器 UV-4802H 型紫外可见分光光度计（上海尤尼科仪器有限公司） ；AL104 型分析天平（瑞士 METTLER TOLEDO 公司） ；旋转蒸发仪（德国 Heido

6、lph 公司） ；6202 型高速粉碎机（北京环亚天元机械技术有限公司） ；索氏提取器（北京博美玻璃仪器厂） 。1.2 材料蒙药阿给（冷蒿）购自内蒙古药材采购供应公司，内蒙古自治区中蒙医医院蒙药药房鉴定，炭药由北京普生霖药业有限公司按文献方法4代为炮制。芦丁标准品由北京药品生物制品检定所提供，纯度为 99.2%，其他试剂均为 AR 级，由北京化学试剂公司提供。2 方法与结果2.1 样品液的制备精密称取阿给生药和炭药各 1.000 g，分别置索氏提取器中，加 250 ml 70%乙醇，热回流提取 2 h，完成虹吸 5 次，提取液定量转移至 250 ml 容量瓶中，用 70%的乙醇定容，待测。2.

7、2 黄酮类成分的定性分析2.2.1 方法采用显色反应对阿给生药及炭药中的黄酮类成分进行定性分析，检识方法如下5：盐酸+镁粉实验：取供试液 1 ml 于试管中，加入少许镁粉，再加45 滴浓盐酸，水浴 2 min 显色（同时做空白对照） 。乙酸镁实验：用玻璃棒蘸取供试液涂于滤纸上，吹干，喷 1%乙酸镁的甲醇溶液，加热干燥，在紫外灯下观察。氢氧化钠实验：取供试液 1 ml 于试管中，加入 4%氢氧化钠溶液 5 滴，观察现象。硝酸铝实验：用玻璃棒蘸取供试液涂于滤纸上，吹干，喷洒 1%硝酸铝溶液，观察，再置紫外灯下观察。浓硫酸实验：取供试液 1 ml 于试管中，加入浓硫酸数滴，振荡混匀，观察现象。2.2

8、.2 结果显色反应结果见表 1。表 1 阿给生药及炭药中黄酮类成分的定性检识结果（略）*示有荧光定性分析结果表明：阿给生药及炭药均含有黄酮类成分，但两者所含黄酮类成分的类型有所差异，生药以黄酮、黄酮醇、查耳酮、异黄酮为主，通过炒炭炮制后，黄酮、黄酮醇类成分减少，而主要以查耳酮、异黄酮为主。2.3 总黄酮的含量测定6 以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法测定阿给生药及炭药中的总黄酮含量。2.3.1 芦丁标准储备液的配制精密称取 120 减压干燥至恒重的芦丁标准品 10 mg，置于 100 ml 容量瓶中，加适量 70%乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，得 0.1 mgml-1 的芦丁标准储备液。2.3.

9、2 最大吸收波长的选择分别量取 2.0 ml 芦丁标准储备液和样品液置于 3 支 10 ml 试管中，加入 3 ml 70%乙醇, 摇匀后加入 5%亚硝酸钠 0.3 ml，摇匀，放置 6 min，加入 10%硝酸铝溶液 0.3 ml，摇匀，放置 6 min，再加入 4%氢氧化钠溶液 1 ml，摇匀，放置 15 min 后，以相应的试剂做空白对照，在分光光度计上进行全波长扫描，比较标准品和样品的扫描曲线，确定以 510 nm 为最大吸收波长来进行阿给总黄酮含量的测定。2.3.3 标准曲线的绘制精密量取芦丁标准储备液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml，分别置于 10 ml 试管中

10、，加 70%乙醇补足 5 ml，按“2.3.1”项所述的方法进行显色，以溶剂为空白对照，在紫外可见分光光度计上于 510 nm 波长处测定吸光度。结果见表 2。表 2 芦丁标准品浓度与吸光度（略）以吸光度（A）为纵坐标，浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，用最小二乘法做直线回归，得回归方程 A=10.942C+0.001 9，R2=0.999 6。结果表明芦丁在 0.0150.076 mgml-1 浓度范围内具有良好的线性关系见图 1。2.3.4 精密度实验取同一供试品溶液按上述方法在波长 510 nm处，以试剂空白为参比，重复测定 5 次，计算得 RSD=0.40%（n=5） ，结果表明仪器的精

11、密度良好。2.3.5 稳定性实验对同一供试品溶液，每间隔 15 min 测定吸光度，考察其在 1 h 之内的稳定性，计算得 RSD=2.51%。结果显示，随着显色时间的延长，所测得的总黄酮含量呈缓慢下降趋势，但在 1 h 内基本保持稳定，可满足测定要求。2.3.6 重复性实验取同种阿给药材粗粉，按“2.2”项下方法平行制备 5 份样液，进行含量测定，计算得 RSD=1.40%（n=5） 。结果表明，本实验方法的重复性较好。图 1 芦丁标准曲线（略）2.3.7 加标回收实验精密量取适量阿给提取液（生药 2 ml，炭药3 ml ）各 4 份，分别置于 10 ml 试管中，按下表精密加入一定体积的

12、0.1 mgml-1 的芦丁标准储备液，再加 70%乙醇补足体积 5 ml，照前述方法进行含量测定，代入标准曲线回归方程计算回收率，结果见表 3。2.3.8 样品总黄酮含量的测定精密量取适量体积（V）的阿给提取液（生药 2 ml，炭药 3 ml）各 5 份，分别置于 10 ml 试管中，按标准曲线测定方法进行含量测定，根据回归方程及回收率计算出药材中总黄酮的含量，结果见表 4。表 3 回收率实验结果（略）回收率 P（）测得量-原有量加入量100表 4 阿给生药及炭药中的总黄酮含量（略）3 小结本实验首次对蒙药阿给炒炭前后的黄酮类成分类型及总黄酮含量进行了分析。显色反应结果表明，阿给生药及炭药均

13、含有黄酮类成分，但两者所含黄酮类成分类型有所差异，生药中以黄酮、黄酮醇为主，而炭药中以查耳酮和异黄酮为主。以芦丁为标准品，检测波长为 510 nm，采用分光光度法测得阿给生药及炭药中总黄酮含量分别为 4.78%和 2.26%，生药的总黄酮含量约为炭药的 2 倍。实验数据重现性好，加标回收率高，相对偏差小，该法适用于阿给药材中总黄酮含量的测定。阿给中黄酮类成分含量丰富，但通过炮制后，黄酮、黄酮醇类成分减少，总黄酮含量明显降低，这与炮制过程中某些黄酮类成分受热分解有关，该结果对阿给药材的利用具有重要的指导意义阿给资源丰富，具有止血、凉血、祛瘀的功效，极具开发潜力。因此，对蒙药阿给及其炮制品中的黄酮

14、类成分进行定性与定量分析将为该民族药材的有效利用提供一定的参考依据。【参考文献】1 布日额, 阿拉腾图亚, 包金泉, 等. 蒙药阿给的生药学研究J. 中国民族医学杂志, 1998, 4(增刊): 53.2 布日额, 吴秋实. 蒙药阿给的民族植物学研究J.中药材，2001，24（6）：394.3 崔 箭, 唐 丽, 蓝 蓉，等.蒙药阿给炭治疗支气管扩张咯血临床观察J. 中央民族大学学报(自然科学版)， 2006, 15（2）:150.4 崔 箭, 张 婉, 唐 丽, 等. 蒙药阿给制炭工艺的实验研究J. 时珍国医国药, 2008, 19（11）：（2587）.5 姚新生. 天然药物化学（第三版） M. 北京: 人民卫生出版社, 2002： 175. 6 中华人民共和国卫生部药典委员会. 中国药典（部） S. 北京： 人民卫生出版社, 1990：60.