蒙药沏其日甘-5抗氧化作用的实验研究.doc

1、蒙药沏其日甘-5 抗氧化作用的实验研究作者：乌日娜，许良，孙福祥，王志民，娜仁花，李大力，段云志【摘要】 目的研究蒙成药沏其日甘-5 的抗氧化作用。方法通过建立氧自由基（O-2） ，羟自由基（OH） ，脂质过氧化物（LPO）生成体系研究和探讨沏其日甘-5 对自由基的清除和抑制作用。结果沏其日甘-5 对 O-2的清除率（S%）是 86.0，抑制率（I%）是 82.9，对OH 的 S%是 84.1，I%是 78.9。对 LPO 的生成也有一定抑制作用。结论沏其日甘-5在体外有很强清除和抑制自由基作用,是良好抗氧化剂。 【关键词】 氧自由基； 羟自由基； 脂质过氧化物； 沏其日甘-5Abstract

2、：ObjectiveTo evaluate the scavenging and inhibitory effects of Qiqirigan-5 extract on free radicals. MethodsThe O-2, OH, and LPO formation systems were established, to evaluate the scavenging and inhibitory effects of the extract.Results The scavenging and inhibiting effects of the medicineon free r

3、adical O-2 were 86.0% and 82.9%, respectively; and the rates on OH were were 84.1% and 78.9%, respectively. In addition, the medicine also has the above effects on the free radical LPO to some extent. ConclusionMongolian medicine Qiqirigan-5 has good scavenging and inhibitory effects on free radical

4、s.It is one of good antioxidants.Key words：Oxygen free radical; Malondialdehyde; Hydroxyl radical; The extract of Qiqirigan-5沏其日甘-5 是蒙医常用药，主要功能是清热化痰，止咳。主治肺热痰多，久咳，喘促。主要成分是沙棘、木香、栀子、甘草、白葡萄干组成。临床上用予治疗肺部疾患，对缺氧性疾患疗效显著。本实验对其抗氧化作用进行研究。 11 材料与方法 1.1 药品和试剂沏其日甘-5 由内蒙古蒙药股份有限公司生产，批号 060810 1231。符合蒙成药制剂通则标准。经蒙药师鉴

5、定为正品。抗坏血酸（Vit.C）,硫酸铜（CuSO4） ，硫脲，蛋氨酸（Net） ，核黄素（Vit.B2） ，四硝基唑兰（NBT） ，均为国产生化试剂。核糖核酸（DR） ，四乙氧基丙烷（TEP） ，硫代巴比妥酸（TBA）均为 Sigma 公司提供。1.2 沏其日甘-5 提取液的制备取沏其日甘-5，烘干。称其一定量，在 60100温度下，用 10 倍量的蒸馏水提取 2 次，提取时间为120min/次，将提取液合并过滤。水定容至 100ml 计算出含量（g/L）冰箱保存备用。1.3 羟自由基（ OH）生成体系的建立终体积为 1.5 ml，其中磷酸盐缓冲液 PB（pH 7.4）1.05 ml，1 m

6、mol/L Vit.C 0.15 ml，1 mmol/L CuSO4 0.15 ml，1 mmol/L Cyt.C 0.15 ml，不同体积的沏其日甘-5 提取液。标准对照加 0.5 mmol/L 硫脲 10 l。25水温 25 min。于紫外分光光度计上，550 nm 处读取光密度（OD）值。由Vit.C，PB，Cyt.C 组成的体系的 OD 值为 Cyt.C 基础量（A1） ，在上述体系中加 CuSO4 的 OD 值为OH 氧化后剩余 Cyt.C 的量（A2） ，A1-A2为OH 氧化掉 Cyt.C 的量，可称OH 的生成量（C1） 。上述体系加沏其日甘-5 提取液后 OD 值（A3） ，

7、A1-A3 为经沏其日甘-5 提取液作用后的OH 的量（C2） ，C1- C2/ C1100%即为清除率（S%） 2 。1.4 O-2 自由基生成（VB2-Met-NBT）体系的建立利用 VB2 光照后产生 O2-，使 NBT 变色的原理。取 Met-NBT 溶液 3.8 ml，加 VB20.1 ml，不同体积的沏其日甘-5 提取液混合。在 40 瓦日光灯下，距离 35 cm，光照 30 min 测定光密度（OD） ，用同法制备的未经光照的做空白调零，用超氧化物歧化酶（SOD）做标准对照。这就是静态法测定清除率（S%） ，用动态法测定抑制率（I%） 34 。1.5 脂质过氧化物（LPO）生成体

8、系的建立根据 Fenton 原理，采用 Fe2+/H2O2 体系产生的OH 自由基，诱导 DR 过氧化物的生成，加入沏其日甘-5 提取液后，观察其抑制 LPO 的生成作用。用 TBA 显色，TEP做标准，计算过氧化物（丙二醛）的生成量5 。2 结果2.1 沏其日甘-5 提取液对 O-2的清除和抑制作用在 VB2-Met-NBT 体系中，有清除和抑制 O-2的作用。存在剂量依赖性，随着沏其日甘-5 提取液加入量的增加，而清除和抑制作用增强。当加入 300 g/ml时 S%达 86.0%。I%达 82.9%。 见表 1。2.2 沏其日甘-5 提取液对OH 的清除和抑制作用在OH 自由基生成（Vit

9、.C- CuSO4-Cyt.C）体系中加入沏其日甘-5 提取液后，显示有很强的清除和抑制OH 的作用。当加入沏其日甘-5 提取液达 150 g/ml 时其清除和抑制 OH 分别达 84.1%，78.9%。见表 1。2.3 沏其日甘-5 提取液对 LPO 生成的抑制作用在实验中加入沏其日甘-5 提取液 0.05 ，0.1，0.15，0.2 ml，LPO 生成量随着沏其日甘-5 加入量的增加而减少。说明沏其日甘-5 有抑制脂质过氧化物反应的作用。表 1 沏其日甘-5 提取液对 O-2，OH 的清除和抑制作用（略）3 讨论人体内自由基种类很多，但是最重要的是 O-2，OH，产生途径多、作用大。当体内

10、 O-2和OH 产生和清除失衡时，造成自由基的堆积，引起抗氧化酶活性下降。过多的自由基攻击生物大分子，使细胞膜的结构和功能发生改变。这在心肌缺血、缺氧、再灌注损伤病理过程中表现最为明显。沏其日甘-5 含有丰富的维生素、多种氨基酸，超氧化物歧化酶（SOD）以及黄酮类等生物活性物质。具有医疗和保健双重作用。沏其日甘-5 提取液在 VB2-Met-NBT 体系抗 O-2自由基的清除率 86.0%，抑制率为 82.9%，显示了该药抗自由基作用。沏其日甘-5 提取液在 Vit.C- CuSO4-Cyt.C 体系中对OH 的清除率为 84.1%，抑制率为 78.9%，清除率作用大于抑制作用。细胞有氧代谢过

11、程中产生大量活性氧，如 O-2和H2O2，H2O2 经铁离子介导的 Haber-Weiss 反应生成OH，OH 是体内损伤最为严重的自由基。OH 的大量堆积，可促进衰老、肿瘤、辐射损伤等病理过程6 。因此沏其日甘-5 通过抗氧化作用达到治疗目的。LPO 的生成是自由基损伤最重要的产物，作者利用 Fe2+/H2O2 诱导DR 产生 LPO 的终产物丙二醛，来研究沏其日甘-5 抗 LPO 的作用，实验结果显示当沏其日甘-5 提取液加 150 g/ml 时抑制率可达 64%。综合上述，沏其日甘-5 提取液在体外有很强清除和抑制自由基作用，是良好抗氧化剂。但确切的药理作用及作用机制需要进一步的实验。【

12、参考文献】1 内蒙古卫生厅.内蒙古蒙成药标准S.赤峰:内蒙古科技出版社,1989：210.2 王成莲,刘 莉.比色法测定抗坏血酸体系产生的OHJ.生物化学与生物物理学进展，1989,16(6):433.3 陈 奇.中药药理学研究方法学M.北京:人民卫生出版社,1993:953.4 鲁纯素,赵会英,陈雅研,等.异喹啉生物碱类化合物对羟自由基的清除作用J.北京医科大学学报,1998,20（6）:45.5 Agil A.Fuler CJ.Jdial Susceptibility of Plasma no Ferrous Iron/Hydrogen Peroxide-mediated oxidation; Demanstitration of a Possible Fenton recto on Cline J.Chem.1995:41/222.6 莫 简.医用自由基生物学导论M.北京:北京出版社,1991:21.