1、免疫金渗滤法检测 Hp CagA 抗体试剂盒的研制作者：侯瑜 张菊 韩丰产 阎小君 【关键词】 螺杆菌 关键词: 幽门;螺杆菌;细胞毒素相关蛋白 A;胶体金;免疫渗滤;抗体 1 材料和方法 1.1 材料 血清标本由第四军医大学西京医院消化门诊及西安市中心医院消化内科提供.实验用氯金酸（成都化学试剂厂） ，葡萄球菌 A 蛋白（SPA，上海申索公司） ，细胞毒素相关蛋白 A（CagA，第四军医大学全军基因诊断技术研究所制备） ，酶联免疫吸附试验检测抗 CagA-IgG 试剂盒（上海晶莹公司）. 1.2 方法 去离子水溶解氯金酸，煮沸后加入 10gL-1 柠檬酸三钠水溶液，继续煮沸 7min，待冷却
2、后电镜观察胶体金颗粒直径和形状.取颗粒直径为 15nm 的胶体金溶液，用 0.1molL-1 K2 CO3 调至 pH6.2，搅拌下加入 1gL-1 SPA，继续搅拌;加入50gL-1 BSA，继续搅拌 5min.43000rmin-1 离心5min，弃沉淀，上清液以 12000rmin-1 离心 15min，沉淀即为制备的胶体金.用悬浮液悬浮，4保存.在硝酸纤维素膜上固相 CagA 抗原，用 50gL-1 BSA 封闭 2h，用 0.01molL-1 PBS 洗涤，干燥后依次装入自制的渗滤装置，干燥剂封闭，4保存.抗 Hp-CagA IgG的检测用 0.01molL-1 PBS 将硝酸纤维素
3、膜活化，0.0150.03mL 血清滴加在硝酸纤维素膜上，完全渗入后，用0.01molL-1 PBS 洗涤，再将已标记好的胶体金 0.02mL 滴加在硝酸纤维素膜上，待完全渗入，再次洗涤.以试剂盒硝酸纤维素膜上出现红色致密斑块且边缘清晰者为阳性，若无红色斑块出现则为阴性.结果确定时间为 35min. 2 结果 用预先处理好的覆盖有 Formvar 膜的镍网浸入胶体金溶液中，取出放置空气干燥，然后在透射电镜下观察，可见胶体金颗粒大小均匀一致，颗粒直径为 15nm.本法与 ELISA 试剂盒对比检测西京医院门诊及市中心医院 326 例患者血清中的抗 Hp-CagA IgG，结果满意.以 ELISA
4、 检测 Hp-CagA 抗体试剂盒作为参照标准，DIGFA 法的特异性 95.8%，敏感度97.3%，总符合率 96.6%.DIGFA 试剂盒于 4下放置 6mo，每月检测抗 Hp-CagA IgG 阳性及阴性血清各 50 份，该试剂盒的各种性能指标均稳定.将DIGFA 试剂盒于 37恒温箱内置 6d，做热稳定性试验，与放置 4的试剂盒对照，结果无显著差异. 3 讨论 目前公认的细菌培养、呼气试验（UBT） 、组织染色等创伤性检测方法虽具有高敏感与特异性，可作为 Hp 感染诊断标准，但上述方法痛苦大、所需仪器昂贵、操作步骤烦琐费时、需要专业人员.其中呼气试验对患者和医务人员以及周围环境的污染尚
5、未解决，故无创伤性检测 Hp 感染是诊断 Hp 感染的发展方向.近年 CagA 阳性 Hp 感染的诊断方法已有很大进展，特别是血清学检测方法，因其为非侵入性检测手段并且经济、简便、快速而倍受重视1，2 .ELISA 法有较高特异性和敏感性被临床认可，但需专业人员和仪器，操作时间长.我们研制的方法，经临床检测具有敏感性高，特异性强，稳定性及重复性好，操作快速、简便等优点.该试剂盒结构简单，易于判断结果，检测时间仅需 35min，无需任何设备.鉴于该方法的诸多优点，因而具有广泛的应用价值，值得推广. 参考文献: 1Mclaughlin P.Treatment of follicular and other indolent lym-phomas J.Cuur Opib Oncol，1999;11:333-338. 2庄小强，林三仁.幽门螺杆菌与胃癌的研究进展J.世界华人消化杂志，2000;5（2）:2206-2207.
