民族药朝天罐提取物抗炎作用及机理研究.doc

1、民族药朝天罐提取物抗炎作用及机理研究作者：蒋霞，黎格，杨柯，杨玉芳，黄东萍【摘要】 目的研究朝天罐提取物对不同炎症模型的抗炎作用及作用机理。方法采用醋酸腹腔注射致小鼠腹腔毛细血管通透性升高试验、二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀模型、皮下埋植棉球诱导小鼠棉球肉芽肿模型观察朝天罐提取物的抗炎作用;采用角叉菜胶致小鼠背部气囊急性滑膜炎模型，通过紫外分光光度法，测定朝天罐提取物不同剂量组中小鼠背部气囊炎性的 渗出液 PGE2 的含量。结果朝天罐高(20g/kg)、低(10g/kg)剂量组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高、二甲苯诱导的小鼠耳廓肿胀和小鼠棉球肉芽肿有明显的抑制作用;可显著降低小鼠背部气囊炎性渗出

2、液中 PGE2 的含量(P0.05)。结论朝天罐提取物具有抗炎作用;其抑制炎症组织中 PGE 的产生可能为抗炎作用机理之一。 【关键词】 朝天罐;抗炎;PGE2朝天罐 Osbeckia opipara C. Y. Wu et C. Chen 为野牡丹科金锦香属植物，又名张天刚、仰天罐、罐子草、七孔莲等。主产于贵州、广西、广东、台湾及长江流域以南各省区，生于海拔 250800 m 的山坡、山谷、水边、路旁、疏林中或灌木丛中1，2，为广西少数民族地区常用本草药材。主要以根入药，又名罐子草根，其味甘、微苦，性平，归肾、大肠经，功能益肾、止血、解毒，主治腰膝酸软,咯血,痢疾,咽喉痛等3，4;亦可全株入

3、药，用于小儿风热、久咳、咯血、胃痛、白带、月经不调、胎漏下血、痔疮出血及癌症等5。目前尚未见朝天罐的相关药理作用报道。本文主要对朝天罐根的抗炎作用进行研究，探讨其抗炎机理，旨在为今后药材的进一步研究与开发利用提供资料与依据。1 仪器与材料1.1 仪器与试剂 722 型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司产);BP211D 万分之一克电子天平(德国赛多利斯);阳性对照药地塞米松(广东三才医药集团有限公司，批号：20080859)。朝天罐(药材采于广西金秀瑶族自治县，经广西壮族自治区药检所鉴定);粗提取物棕褐色，每毫升浸膏相当于生药量 1 g。1.2 动物 KM 小鼠(普通级)，体质量 1824g

4、，雌雄各半，由广西中医学院医学实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：桂医动字第11004 号。2 方法2.1 溶液制备称取药材 1 000 g，加 10 倍量水浸泡 30 min，煮沸，维持 1 h，纱布过滤，药渣再加入 5 倍量水，煮沸，维持 30 min，纱布过滤，合并滤液，浓缩至 1 000 ml，冷却后，4冰箱放置备用。2.2 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响6取小鼠 40 只，雌雄各半，随机分为 4 组，每组 10 只，分别为阳性对照组(地塞米松，6 mg/kg)，空白对照组(生理盐水)，朝天罐高(20 g 生药/kg)、低(10 g 生药/kg)两个剂量组。每天灌胃给药 1

5、次，给药容量 20 ml/kg，连续 5 d。末次给药后 60min 每鼠尾静脉注射 0.5%伊文斯蓝，0.1 ml/10 g，同时腹腔注射 0.6%醋酸溶液，0.1 ml/10 g。15 min 后，脱颈椎处死小鼠，立即注入 6 ml 生理盐水冲洗腹腔，剪开腹腔，用漏斗滤出腹腔洗出液，2 000 r/min 离心 10 min，取上清液于 590 nm 处测定 OD 值。2.3 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响6取小鼠 40 只，雌雄各半，随机分为 4 组，每组 10 只，分别为阳性对照组(地塞米松，6 mg/kg)，空白对照组(生理盐水)，朝天罐高(20 g 生药/kg)，低(10 g 生药

6、/kg)两个剂量组。每天灌胃给药 1 次，给药容量 20 ml/kg，连续 5 d。末次给药后 60 min 每只小鼠以 0.02 ml 二甲苯滴于右耳致炎，15 min 后颈椎脱臼处死，沿耳廓基线剪下二耳。用 6 mm 直径打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重，以左右耳重量差作为肿胀度。2.4 对小鼠棉球肉芽肿的影响6取小鼠 40 只，随机分为空白对照组(生理盐水)，阳性对照组(地塞米松，4.5 mg/kg)，朝天罐高(20 g 生药/kg)、低(10 g 生药/kg)两个剂量组。在各鼠的左右腋下部消毒，各切一小口，各埋入消毒棉球(10 mg)。次日各组均灌胃给药，1 次/d，给药容

7、量为 20 ml/kg，共 14 d。末次药后 1 d，取出带肉芽组织的棉球于80烘箱内烘 7h 至干，称重，减去棉球重，比较各组肉芽组织干重量。2.5 对小鼠背部气囊炎性渗出液中 PGE2 含量的影响7取雄性小鼠50 只，随机分成 5 组，每组 10 只，分别为正常组(生理盐水组)、模型组、阳性对照组(地塞米松，6 mg/kg)、朝天罐高(20 g 生药/kg)、低(10 g生药/kg)两个剂量组。各组小鼠背部皮下注射空气 5 ml，第 3 天及第 6天再次注入空气各 3 ml，维持气囊的膨胀，于首次注入空气的第 3 天开始灌胃给药或生理盐水 20 ml/kg，1 次/天，连续 5 天，末次

8、给药后 1 h囊内注射 2%甲醛 0.2 ml/只，6 h 后处死动物，于气囊内注入冰生理盐水(含肝素 50 U/ml)3 ml，轻轻按压，吸出 1 ml，3 000 r/min 离心 10 min。取上清液 0.4 ml，加 0.5 molL-1 氢氧化钾-甲醇液 2 ml，在50水浴异构化 20 min 后，用甲醇稀释至 5 ml，于紫外分光光度计波长278 nm 处测定其吸光度(OD)值，代表 PGE2 的生成量。2.6 统计学处理 应用统计软件 SPSS11.0 对所得实验数据进行 t 检验。3 结果3.1 对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响与空白对照组比较，地塞米松阳性对照组及朝天

9、罐提取物高、低剂量组对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性有显著抑制作用(P0.01)。结果见表 1。表 1 对腹腔毛细血管通透性的影响3.2 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀度的影响 与空白对照组比较，地塞米松阳性对照组及朝天罐提取物高、低剂量组对二甲苯所诱导小鼠耳廓肿胀有明显抑制作用(P0.05)。结果见表 2。表 2 对耳廓肿胀度的影响3.3 对小鼠棉球肉芽肿的影响 与空白对照组比较，地塞米松阳性对照组及朝天罐提取物高、低剂量组对小鼠棉球肉芽肿有明显抑制作用(P0.01 或 P0.05)。结果见表 3。表 3 对小鼠棉球肉芽肿的影响3.4 对小鼠背部气囊炎性渗出液中 PGE2 含量的影响与正常组比较，模

10、型组小鼠背部气囊炎性渗出液中 PGE2 的含量显著升高(P0.01)。地塞米松阳性对照组及朝天罐提取物高、低剂量组与模型组相比，小鼠背部气囊炎性渗出液中 PGE2 的含量明显降低(P0.05 或 P0.01)。结果见表 4。表 4 对小鼠背部气囊炎性渗出液中 PGE2 含量的影响4 讨论非特异性炎症反应通常分为 3 个时相，即以局部血管扩张、毛细血管通透性增加为特征的急性时相;以白细胞、巨噬细胞浸润为特征的亚急性时相;以组织变性和纤维化为特征的慢性增殖相。本实验结果显示，朝天罐高(20 g/kg)、低(10 g/kg)剂量组可显著降低醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高，减轻二甲苯诱导的小鼠耳肿胀，

11、表明其对炎症的急性时相明显的抑制作用;同时朝天罐提取物能显著抑制小鼠棉球肉芽肿，说明其对炎症的慢性增殖相也有较好的抑制效果。花生四烯酸(AA)代谢在炎症病理过程中起着主要作用，而 PGE2 是AA 代谢过程中产生的一个重要炎症介质，在炎症过程中可通过其强大的扩血管、协同趋化因子激活及吸引中性粒细胞、增强血管壁通透性、引起发热及痛觉过敏等作用促进炎症反应发生发展8。实验结果表明，朝天罐提取物高、低剂量组均能明显抑制小鼠背部气囊炎症模型内 PGE2 的含量。该结果提示朝天罐提取物抑制炎症组织中 PGE2 产生可能为其抗炎作用机理之一。【参考文献】1陈介.中国野牡丹科金锦香属植物的研究J.广西植物，

12、1982，2(4)：181.2刘杰，陈海生，张卫东. 金锦香属植物的研究概况J.解放军药学学报，2001，17(3)：151.3广西壮族自治区中医药研究所. 广西药用植物名录M.南宁:广西人民出版社, 1986: 164.4吴其浚. 植物名实图考(修订本) M. 上海: 商务印书馆,1957: 226, 208, 414.5广西中药资源普查办公室.广西中药资源名录M.南宁:广西民族出版社, 1993: 90.6陈奇.中药药理研究方法学M.北京：人民卫生出版社，1993：271.7王利津，徐强.黄连解毒汤的抗炎作用机理研究J.中国中药杂志，2000，25(8)：493.8王玉香，刘青云，彭代银.痹复康抗炎和镇痛作用的实验研究J.中国实验方剂学杂志，2001，7(5)：44.