舒痛安汤对吗啡依赖大鼠镇痛及生殖功能的影响.doc

1、舒痛安汤对吗啡依赖大鼠镇痛及生殖功能的影响作者：肖烈钢,朱成全,张玉亮,洪加津【摘要】 目的 观察舒痛安汤对吗啡依赖大鼠镇痛及生殖功能的影响,探讨其作用机理。方法 建立吗啡依赖模型大鼠,采用放免法观察舒痛安汤对吗啡依赖大鼠下丘脑和血浆 -内啡肽(-EP)、结状神经节和孤束核P 物质(SP)以及血清内分泌激素的变化。结果 吗啡依赖大鼠下丘脑 -EP 的含量均较正常大鼠降低,舒痛安汤高剂量组可增高下丘脑 -EP 含量(P0.01),舒痛安汤中、高剂量组可增高血浆 -EP 含量(P0.01,P0.05)；吗啡依赖大鼠结状神经节和孤束核 SP 含量升高,舒痛安汤高剂量组可降低结状神经节和孤束核 SP

2、的含量(P0.01,P0.05)。吗啡依赖雌性大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、泌乳素(PRL)均低于正常对照组,舒痛安汤中、高剂量组均可增高血清 FSH、E2、PRL 含量(P0.01,P0.05)；吗啡依赖大鼠睾丸酮(T)含量显著降低(P0.01),舒痛安汤中、高剂量组均可增高雄性大鼠血清 T 含量(P0.01),而对大鼠血清黄体生成素、PRL 含量无显著影响。结论 舒痛安汤可能通过改善吗啡依赖大鼠下丘脑-垂体-肾上腺的变化,消除戒断症状,从而达到治疗目的。 【关键词】 舒痛安汤；吗啡依赖；-内啡肽；P 物质；性激素；大鼠Key words：Shutongan Decoctio

3、n；morphine dependence；-endorphin；substance P；sex hormone；rat舒痛安汤临床主要用于戒毒治疗1。为了进一步探讨其治疗阿片类依赖的机理,了解该方对吗啡依赖大鼠镇痛及生殖功能的影响,我们检测了 SD 大鼠吗啡依赖模型下丘脑、血浆 -内啡肽(-endorphin,-EP)、P 物质(Substance P,SP)以及血清内分泌激素的变化。现报道如下。1 实验材料1.1 药物盐酸吗啡注射液(Mor),为沈阳第一制药厂产品；盐酸可乐定(Clonidine,CND)片,为江苏常州制药厂产品；舒痛安汤,广州海军疗养院提供,由黄芪、钩藤、党参、延胡索、细

4、辛、栀子、鸡血藤、黄连、黄柏、生地黄、山药、茯苓、牡丹皮、当归、川芎等 16 味药材组成,用时煎成浓缩液,原药材含量为 2.0 g/mL。1.2 试剂与仪器-EP 试剂盒、SP 试剂盒、睾丸酮(T)试剂盒、泌乳素(PRL)试剂盒、雌二醇(E2)试剂盒、卵泡刺激素(FSH)试剂盒及黄体生成素(LH)试剂盒均由美国 Sigma 公司提供。检测仪器为 -计数仪(上海核福光电仪器有限公司生产)。1.3 动物SD 大鼠,雌雄各半,体重 180220 g,广州中医药大学实验动物中心提供,动物合格证号：2000A019。2 实验方法2.1 分组将实验动物随机分成 6 组：生理盐水组(A 组)、吗啡生理盐水组

5、(B 组)、吗啡舒痛安汤低剂量组(C 组)、吗啡舒痛安汤中剂量组(D 组)、吗啡舒痛安汤高剂量组(E 组)和吗啡可乐定组(F 组),每组 10 只,雌雄各半。2.2 造模参照文献2方法,B、C、D、E、F 组大鼠皮下注射 Mor,首日 10 mg/kg (bid)；隔日每次增加 10 mg/kg,至第 6 日末次注射 50 mg/kg,建立吗啡依赖模型。而 A 组则以生理盐水代替吗啡同法注射。2.3 给药及检测C、D、E 组分别以舒痛安汤浓缩液灌胃,剂量为 50、100、200 mg/kg；F 组灌胃 CND 0.2 mg/kg,A、B 组灌胃等容量生理盐水,每日给药2 次,共给药 2 d。于

6、末次皮下注射 Mor 或生理盐水 1 h 后,各组大鼠经 10%水合氯醛麻醉后,颈动脉取血,4%Na2EDTA 抗凝,3 000 r/min 离心 15 min,取上清置-70 冰箱保存。各组动物取血后,断头处死,迅速取出下丘脑组织、双侧结状神经节和双侧孤束核区。下丘脑组织称重后,置入加有 0.06 mol/L DHBA(二羟苄胺)20 L 及 0.1 mol/L HClO4 380 L 的Eppendorf 管中,置于-70 冰箱中保存,待测。迷走神经结状神经节和孤束核区称重后,切成 2 mm2 mm 碎块,置于 0.5 mol/L 的乙酸中 95 水溶 10 min,用 Ultra-Tur

7、rax 匀浆机做成匀浆,离心 20 min (4 ,7 400/g),上清液分装冻干,密封贮存于-70 冰箱备用。参照文献3-4方法进行测定。2.4 统计学方法数据以 xs 表示,各组数据用 SPSS10.0 软件进行分析,2 组比较采用 t 检验,多组比较采用单因素方差分析,P0.05 为差异有显著性意义。3 结果(见表 1表 3)表 1 舒痛安汤对吗啡依赖大鼠 -EP 和 SP 的影响(略)注：与 B 组比较,*P0.05,*P0.01；与 A 组比较,P0.01(下同) 表 2 舒痛安汤对雌性吗啡依赖大鼠血清 FSH、E2 和PRL 的影响（略） 表 3 舒痛安汤对雄性吗啡依赖大鼠血清

8、T、LH 和 PRL的影响（略）4 讨论脑内存在内源性阿片样物质,-EP 是内源性阿片肽的一种,为强力阿片肽受体激动剂,能抑制儿茶酚胺对心血管的效应,具有调节心血管和内分泌的活动5。吗啡有类似于内源性阿片样物质的功能,可竞争性地与 -EP 受体结合,使促性腺素释放激素和促黄体生成素分泌减少,降低性腺功能；SP 则广泛分布在神经系统中,能直接作用于组织引起疼痛,强而持久,阿片类依赖者往往引起 SP 的增加。本研究证实,吗啡依赖大鼠下丘脑和血浆 -EP 的含量明显减少,SP 则与此刚好相反,而舒痛安汤和可乐定对上述 2 种物质可以进行双向调节。可乐定属于 2 激动药,其中枢活性产生强效镇痛作用,但

9、其作用的神经元部位和机理仍在争论之中。有资料认为,2 肾上腺素能激动药的作用机理与阿片机理相符合6,2 受体拮抗药 Yohimbine 减弱阿片全身用药和高位脊髓用药的抗伤害作用7,但纳络酮不能减弱可乐定鞘内用药的抗伤害作用。吗啡与可乐定虽有交叉耐受,但并不完全。舒痛安汤是纯中药制剂,它含有多种生物活性成分,可能有类似 2 受体拮抗药作用。阿片类依赖者存在性机能障碍及内分泌激素水平明显降低,并认为是由于海洛因对下丘脑-垂体-性腺轴抑制所致8-9。生理情况下,多巴胺促进 PRL 的分泌,阿片肽则抑制 PRL 分泌,二者相互作用,互相影响。对于阿片类依赖者来说,反复用药已使性激素分泌受到抑制,脱毒

10、时应用阿片类物质替代疗法,虽能有效地抑制戒断症状,但在一定程度上加重了性机能障碍(可能增加了阿片类物质对性激素分泌的抑制作用)。本研究显示,吗啡依赖雌性和雄性大鼠内分泌激素的变化是有差异的,雌性吗啡大鼠血清 FSH、E2 和 PRL 均有所降低,而雄性大鼠仅 T 降低,LH 和 PRL 变化不显著。可乐定(除雌性大鼠 PRL 外)和舒痛安汤对上述低水平的性激素均有一定的升高作用。中医学认为,阿片类物质最易耗气伤阴,损精耗液,依赖后可出现气虚、精亏、血瘀、火旺等症状,严重时元气耗竭,脏腑阴阳俱损。我们根据上述病机拟定戒毒脱瘾汤10,以黄连、黄柏、栀子清热解毒,排除毒邪；生地黄、牡丹皮凉血清营；川

11、乌、细辛既可温肾壮阳以逐内寒,又可合延胡索、钩藤舒筋通络而止痛；当归补血汤加生地黄、鸡血藤,可益气养阴生血；另酌加山药、茯苓补脾益气而辅助后天之本,使气血生化之源得以补益。综上,舒痛安汤对吗啡依赖大鼠下丘脑-垂体-性腺轴紊乱的激素有一定的调节作用,但其具体作用机制尚需进行深一步研究。【参考文献】1 蒙桂珍,戴京萍,范锡川,等.舒通安胶囊治疗海洛因依赖疗效观察J.中华实用中西医杂志,2000,13(7)：12811282.2 陈艳明,田育望.硕苞蔷薇化学成分对抗吗啡戒断症状的实验研究J.湖南中医学院学报,2000,21(1)：67.3 祝元祥,管小滨,崔瑞耀,等.-内啡肽的抗血清制备及其放射免疫

12、测定J.第二军医大学学报,1986,7：332335.4 Baraniuk JN, Lundgren JD, Okayama M, et al. Substance P and neurokinin A in human nasal mucosaJ. Am J Respi Cell Mol Biol,1991,4：228.5 Nakagawa T, Masuda T, Watanabe T, et al. Possible involvement of the locus coeruleus in inhibition by prostanoid EP(3) receptor- selecti

13、ve agonists of morphine withdrawal syndrome in ratsJ. Eur J Pharmacol,2000,390(3)：257266.6 Fresco P, Diniz C, Queiroz G, et al. Release inhibitory receptors activation favours the A(2A)-adenosine receptor-mediated facilitation of noradrenaline release in isolated rat tail arteryJ. Br J Pharmacol,200

14、2,136(2)：230236.7 Bishai JM, Penninga L, Nijland R, et al. Pre- and postjunctional alpha(2)-adrenergic receptors in fetal and adult ovine cerebral arteriesJ. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2002,282(6)：16541662.8 苏木金,戴廷恩,张 豫,等.海洛因成瘾对下丘脑神经内分泌激素系统的影响J.中国药物滥用防治杂志,1999,18(1)：2224.9 De Rensis F, Quintavalla F, Foxcroft GR. Treatment of lactating sows with the dopamine agonist Cabergoline：effects on LH and prolactin secretion and responses to challenges with naloxone and morphineJ. Anim Reprod Sci,1998,51(3)：233247.10 朱成全,张宏胜,范锡川,等.解毒脱瘾胶囊治疗海洛因成瘾 131例观察J.实用中医药杂志,1999,15(11)：35.