1、临床生化检验试剂盒性能评价试验,苏州大学附属第二医院,本实验选择GODPOD法测定血糖的商品试剂盒进行性能评价,一、线性范围试验,目的与要求,掌握检测临床生化检验商品试剂盒测定线性范围的原理和方法，剂量反应曲线的汇制，统计方法和性能评价熟悉线性范围变窄的原因了解影响线性的因素,原理,使用不同浓度的葡萄糖标准溶液，用GODPOD法试剂测定各自的吸光度，用标准浓度为横坐标，以其对应的吸光度为纵坐标，在方格纸上作图，即可绘制出一条直线，即剂量反应曲线,过程,试剂操作步骤计算,注意事项,葡萄糖标准液的加量必须十分准确，应用计量性能准确度很高的微量加样器加样。本法的 线性可达22.24mmol/L，造成
2、线性变窄的原因是试剂配制中组分投料不足；试剂配制后组分稳定性差；因运输、贮存不当等导致试剂组分的含量发生变化等,注意事项,有的测定特别是酶法测定，当酶量相对不足时，用标准液所作的线性范围可以达到指定的高限，但在测定同样高值的 样品时，结果却明显偏低，这往往是样品中的介质效应引起的。,线性范围确定,测定上限应使95的临床标本不经稀释即可进行测定，具体数值必须通过线性范围实验加以确定，因为检测上限是不可超越的界限，当测定值高于上限临界值时，应减少标本用量或将标本稀释后重新测定测定下限实测多少就报告多少，如未经验证，随意延长测定下限的做法是不正确的,线性范围评价,通过制作剂量反应曲线的实验可以确定某
3、种测定方法的吸光度浓度线性范围，就能为制作实际工作中使用的校准曲线打下坚实的基础对线性范围内的浓度与对应吸光度值作直线回归分析，求出直线的截距a和斜率b，建立直线回归方程y=a+bx；并作相关分析，求出相关系数（r）。,线性范围评价,使用高浓度和低浓度临床标本若干分进行实际的线性检查，理想的情况是该方法的分析范围的最高浓度上限能使95的临床标本不经稀释均能得到正确的测定结果。试剂盒测定线性范围是该试剂盒按其说明使用时可准确测量的范围。,线性范围评价,观察试剂盒的测定范围时，应用真实标本如定值血清或标准液操作，高浓度标本含量应超过说明书上规定线性上限的20，整个线性需要五组不同的浓度，每组均需测
4、定4次，并求平均值。一旦线性范围变窄即应放弃。,时间反应曲线试验,（一）终点法时间反映曲线试验,目的要求掌握试剂盒终点法测定反应曲线实验的方法原理，并弄清其试验的意义；终点法测定时间反映曲线图绘制方法；熟悉试剂盒终点法测定的参数及其性能评价方法,（一）终点法时间反应曲线试验,原理终点法测定的是反应达到平衡时产物生成量，这样才能较可靠的反应代测物的量。用稍高于参考值上限的标准液或定值血清，按试剂盒说明书的样品与试剂比例进行测定，以观察反应达到平衡期的时间以及反映持续和中止时间，即可分析有关试剂盒的性能指标。,（一）终点法时间反应曲线试验,试剂操作步骤,（一）终点法时间反应曲线试验,性能评价试剂空
5、白吸光度是否符合要求试剂空白的反应速度时间曲线平坦，吸光度在整个反应期间无明显波动，否则，说明试剂本身不稳定，会导致测定偏差。反映能否在规定时间内达到平衡，达到平衡时间应在临床生化自动分析仪终点法读取测定吸光度的时间之前。反应测定期观察,（二）连续监测法时间反应曲线试验,目的与要求掌握试剂盒连续检测法测定时间反应曲线的 方法和原理，并弄清试验的意义。连续检测法测定时间反应曲线图绘制方法熟悉试剂盒连续检测法测定的参数及其性能评价方法,（二）连续监测法时间反应曲线试验,原理连续检测法测定的实化学反应的初速度。本试验用HK法测定血糖的试剂盒进行测定，观察动态反应中的延迟期，线性期，混合期的出现，持续和中止的时间，即可分析连续检测法试剂盒的性能指标。,（二）连续监测法时间反应曲线试验,试剂操作步骤,（二）连续监测法时间反应曲线试验,性能评价试剂空白值是否符合规定试剂空白的酶促反应时间曲线平坦，吸光度变化不大，A/min0.001，若大于此值，表明试剂本身分解变化，会使测定结果产生误差延迟期，线性反应期与设定的实验参数是否相等，若不符应予修改观察酶促反应速度曲线的斜率，通过定值血清，分析试剂盒的灵敏度,
