野生半夏总生物碱含量的测定.doc

1、野生半夏总生物碱含量的测定【关键词】 半夏；,生物碱；,紫外光谱摘要：目的用紫外分光光度法测定东北地区野生半夏中总生物碱的含量。方法以溴百里香本分蓝为显色剂,max=407 nm，测得生物碱在1.68.0 g/ml 范围内具有良好线性关系，r=0.999。结果生物碱含量为0.137 7%。结论 与其他地区相比，该含量较高。关键词：半夏； 生物碱； 紫外光谱Determination of the Content of Alkaloids in Wild Pinellia ternateAbstract：ObjectiveTo determine the content of alkaloids

2、 in wild Pinellia ternate in north east Yunnan area by UV spectrophotometry.MethodsThe bromothymol was used as the chromogenic agent, and the detection wavelength was 407 nm, the calibration curve was linear in the range of 1.68.0 g/ml(r=0.999).ResultsThe content of alkaloids in wild Pinellia ternat

3、e was 0.137 7%.ConclusionThe content of alkaloids is very rich in wild pinellia ternate in north east Yunnan area compared to other areas.Key words： Pinellia ternate; Alkaloids; UV spectrum半夏 Pinellia ternate(Thunb.) Breit.为天南星科植物，是一味使用了 2000 多年的常用中药，药材部分为干燥的块茎；具有燥湿化痰,降逆止呕,消痞散结之功1 。首载于神农本草经 ，其性温，味辛，

4、有小毒，归脾、胃、肺经。 中国药典19632005 年均有记载。具有十分重要的药用价值，目前市售镇咳类中药复方制剂中多含有半夏2 。麻黄碱具有抗哮喘的作用3 ，因此半夏中生物碱的含量可以作为其品质的标准2 。滇东北地区的半夏一直是半夏市场的重要产地4 ，半夏块茎粒大，质白，表观品质好；其生物碱含量测定未见报道，本文测定了该地区半夏中总生物碱的含量，并与其它地区半夏的总生物碱含量做了比较，为该地区半夏开发利用提供理论依据。1 仪器与材料1.1 仪器与试剂 TU1800PC 紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)； Na2HPO4NaH2PO4 缓冲液(pH 6.8)（0.2 mol/

5、L Na2HPO4 240 ml 与 0.2 mol/L NaH2PO4250 ml 配制而成） 5 ；溴百里香酚蓝溶液（0.1 g 溴百里香酚蓝加 0.05 mol/L NaOH 溶液 3.2 ml 溶解，加水稀释至 200 ml 配制而成） 6 ，所用试剂均为分析纯。盐酸麻黄碱对照品购自中国药品生物制品检定所。1.2 材料 半夏药材为野生生半夏，收购于昭通市医药公司当年生药材,除杂后经干燥粉碎过 80 目筛，备用。2 方法与结果2.1 供试品溶液与对照品溶液的制备取已干燥至恒重的样品粉末约 1 g，精密称定，置 50 ml 三角瓶中，加 12.5%浓氨水 1.0 ml，湿润后，加氯仿 25

6、.00 ml，冷浸提取 12 h，过滤。残渣以 25 ml 氯仿分 3 次洗涤，合并滤液,80下回收氯仿至约 1 ml,将残留物倒入分液漏斗中，加入 25.00 ml pH 6.8 缓冲液，2.50 ml 溴百里香酚蓝,振摇均匀，静置0.5 h，分出氯仿层,水层再用氯仿同法萃取 2 次,每次 25.00 ml。合并氯仿层，80以下回收至干,残留物用氯仿定容于 25 ml 容量瓶内,即得供试品溶液。精密称取盐酸麻黄碱对照品 0.025 0 g,加水制成 20 g/ml盐酸麻黄碱的溶液,即得对照品溶液。2.2 选择最大吸收波长将盐酸麻黄碱对照液用 TU1800PC 紫外可见分光光度计在 60019

7、0 nm 范围扫描，选择最大吸收波长。2.3 标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液 2.0, 4.0，6.0，8.0，10.0 ml 于分液漏斗内,补加蒸馏水至 10 ml，加入25.00 ml pH 6.8 缓冲液 ,再加入 25.00 ml 氯仿,2.5 ml 溴百里香酚蓝溶液,充分振摇后,静置 0.5 h,分取氯仿层,水层再用氯仿同法萃取两次,25.00 ml/次。合并氯仿层,水浴 80回收至干,再用氯仿溶解,定容于 25 ml 容量瓶内。以相应的试剂同法制作空白,于最大吸收波长处测定吸光度。以盐酸麻黄碱的浓度 C 为横坐标、吸光度为纵坐标作图，求标准曲线的回归方程及相关系数。2.4 盐

8、酸麻黄碱光谱曲线利用紫外吸收分光光度仪对盐酸麻黄碱对照液在 600190 nm 范围扫描，由光谱扫描图可知，其最大吸收波长为 407 nm。见图 1。图 1 盐酸麻黄碱光谱扫描图（略）2.5 标准曲线的线性关系在 407 nm 波长处分别测定不同浓度对照液的吸光度 A。结果见表 1 及图 2。 表 1 盐酸麻黄碱及样品与吸光值 A 对应表（略）求得标准曲线的回归方程为 A=0.133V-0.1353,r=0.999。结果表明盐酸麻黄碱浓度在 1.68.0 g/ ml 范围内呈良好线性关系。见图2。图 2 盐酸麻黄碱标准曲线（略）因为麻黄碱的紫外吸收很弱，给微量测定带来困难。而将其制成鳌合物可提

9、高含量测定的灵敏度7 。用紫外分光光度法测定盐酸麻黄碱的含量关键在于介质 pH，染料的种类以及有机溶剂的选择，其中尤其以介质的 pH 最为重要。有人曾用数种生物碱与 5 种酸性染料的比色测定作了比较，认为溴百里香酚蓝为最好的显色剂。经不同工作者的实验，认为氯仿是最好的溶剂8 。所以本实验加入溴百里香酚蓝作为盐酸麻黄碱的显色剂来提高盐酸麻黄碱在紫外光下的吸光度。本实验选用Na2HPO4-NaH2PO4 缓冲液，pH=6.8 时该缓冲比C 酸/C 盐=1，其缓冲容量最大，缓冲能力最强，是该缓冲对缓冲效果最好的 pH 值9 。这个 pH 值也恰落在溴百里香酚蓝的显色范围（pH6.07.6）内，所以达

10、到良好的显色目的。2.6 样品测定取供试样品于最大吸收波长 407 nm 处测定吸光度A0.232，计算得半夏样品中总生物碱的浓度为 0.137 7%。生物碱含量%=（测得量/样品量）100%=CV稀释倍数/样品量100%与其它地区产的野生及栽培半夏生物碱含量比较可知滇东北地区野生半夏样品中生物碱含量比较高。各地区半夏中生物碱含量比较见表 2。表 2 各地区半夏中总生物碱含量10 （略）由表 2 可知，野生半夏与栽培半夏中总生物碱含量差异较大。但总体趋势是野生的含量高于栽培的。这可能是因为野生半夏生长年限不明，而栽培的一般为一年生植株，生物碱积累不同所致。从实验结果可知，云南昭通半夏中总生物碱

11、的含量尤其高。由此可见，昭通地区野生半夏的品质确实比较好。3 结论3.1 生物碱是一类含氮的碱性有机化合物，大都具有特殊而显著的生理活性和毒性，对其质量进行正确的检验是非常重要的7 。生物碱有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一11 。生物碱可作为半夏品质的评价标准。云南昭通野生半夏中总生物碱含量为0.1377%，说明生物碱含量是比较高的。3.2 半夏的质量评价标准是颗粒大、个圆、皮净、色白、质坚实、粉质细腻12 ；由云南昭通收购的野生半夏颗粒大、个圆、色白、富粉性，且生物碱含量高，说明该野生半夏的内外品质都较好。半夏可在山地、丘陵的草坡、荒滩、沟谷、溪边生长，也可与玉米、小麦等旱地作

12、物套种4，12 ，生态幅较宽，易于栽培。半夏的组织培养及栽培技术都较成熟，在滇东北地区大规模种植半夏具有广阔的应用前景。参考文献：1 吴 皓，张科卫，李 伟，等.半夏的化学成分研究J.中草药，2003，34（7）：593.2 曾建红，彭正松.半夏不同采收期总生物碱含量的动态变化研究J.湖北林业科技，2004，1：1.3 安银岭.植物化学M.哈尔滨：东北林业大学出版社，1996：195.4 冉懋雄.半夏水半夏附子M.北京：科学技术文献出版社，2002：6.5 赵永芳.生物化学技术原理及应用（第三版） M.北京：科学出版社，2002：494.6 国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2005：附录 159.7 陈发奎.常用中草药有效成分含量测定M.北京：人民卫生出版社，1997：211.8 南京药学院.药物分析M.北京：人民卫生出版社，1984：126.9 陈学泽.无机及分析化学M.北京：中国林业出版社，2000：79.10 白 权，李 敏，贾敏如，等 .川产半夏 3 种化学成分的比较J.中国中药杂志，2004，29（7）：697.11 四川医学院.中草药学M.北京：人民卫生出版社，1979：93.12 王惠清.中药材产销M.成都：四川科学技术出版社，2003：166.