东北制药辽宁生物生物分子诊断试剂培训材料.ppt

1、,分子检测产品简介,东北制药集团辽宁生物医药有限公司建于2010年2月，是由东北制药集团与国外 先进技术团队共同创办的高科技合资企业。公司以重大传染病分子诊断试剂作为先导产品，陆续推出其他系列分子诊断试剂，同时开展保健品和基因工程药物等产品的研发和生产。公司位于辽宁本溪经济开发区医药产业园，项目计划投资2.52亿元，分两期建设 完成。设有符合GMP要求的生产车间，研发中心和质检中心。公司有6个分子诊断试剂产品投入生产，可以年产3000万人份诊断试剂。公司积极引进国内外高技术人才，不断提升研发能力和生产技术水平，在生物 医药领域为客户提供高品质产品和优质服务，是国内一流的临床诊断试剂和生物 医药

2、产品的生产和供应商。,公司简介,技术平台建立,分子精确检测技术平台,公司引进国外原创技术，创建了分子精确检测技术平台，开发了系列重大传染病病原体（如乙肝，丙肝和艾滋病病毒等）荧光定量检测试剂。其检测灵敏度，精确性和稳定性达到国际同类产品的先进水平，同时检测程序简单，容易操作，更具有产品优势。,纳米磁珠核酸提取技术平台介绍,东药生物,磁珠核酸提取基本原理,第一步：细胞的裂解， 释放核酸,第二步：磁珠选择性的与核酸结合,第三步：用洗涤液将杂质清洗。,第四步：用洗脱液将核酸洗脱下来。,东药生物,东药生物,东药生物磁珠法介绍,全分散高科技纳米磁珠（显微照片）,东药生物磁珠样品,磁珠分离器,东药生物磁珠

3、核酸纯化过程,1.常温裂解 2.磁珠吸附 3.一次清洗,4.磁珠吸附 5.常温洗脱 6.转移核酸,东药生物,常规磁珠核酸纯化基本过程,东药生物,1.加入裂解液 2.高温裂解病毒 3.磁珠吸附 4.一次清洗,9.磁珠吸附 10.洗脱核酸 11.高温助洗脱 12.转移核酸,5.磁珠吸附 6.二次清洗 7.磁珠吸附 8.三次清洗,国内现有试剂操作过程,东药生物磁珠核酸纯化平台技术优势,东药生物,东药生物,内对照分子监测系统介绍,内对照系统的重要性,1. 真实反应扩增效率避免假阴性，假阴性是目前PCR方法诊断试剂体系中最重视的问题之一，是检测结果可靠性的重要标示。2. 内对照能够对整个实验流程，包括样

4、品提取、分装、PCR热循环仪孔间差、PCR抑制元素等等可能的影响因素进行监控，能够提高检测系统的安全性。,东药生物,内对照系统监控流程,东药生物,1.内标监控核酸提取全程,2.内标监控PCR扩增全程,3.内标监控PCR仪器孔间差异,东药生物,内对照系统有效性的比较,目前，东药生物建立的内对照系统，是国内唯一一个能够真正对样本检测全程起到质控作用的高效系统，达到美国罗氏试剂的同级水平。,东药生物,RNA 假病毒（Armored RNA） 质控系统介绍,RNA假病毒的重要性,东药生物,由于裸露的RNA标准品和质控品极不稳定。而使用病原体颗粒或细胞作为标准品和质控品，则有传染的危险性。因此美国罗氏公

5、司开发了耐核糖核酸酶病毒样颗粒-MS2噬菌体样颗粒，又称RNA假病毒颗粒，解决了上述RNA标准品和质控品的长期储存的问题。本公司借鉴罗氏公司的技术，开发了适合本公司产品特点的假病毒制备技术。目前该技术已经成功的应用在丙肝，艾滋病等RNA病毒核酸定量检测试剂中。,东药生物假病毒制备过程,东药生物,噬菌体RNA,噬菌体改造的表达载体,表达的假病毒颗粒,假病毒RT-PCR Real time PCR 检测,产品介绍,乙型肝炎(HBV)核酸（DNA）定量检测试剂盒（荧光探针法） 人免疫缺陷病毒(HIV)核酸（RNA）定量检测试剂盒（荧光探针法）,东药生物,东药生物,乙型肝炎(HBV)核酸（DNA）定量

6、检测试剂盒（荧光探针法）,通过磁珠法获得高纯度核酸，加大检测样本量(200l)，提高检测灵敏度和精确度；通过检测内标来监测样本中是否具有PCR 抑制物，避免假阴性；通过优化PCR体系中的UNG酶+dUTP措施，高效降解可能的污染产物，避免假阳性。,产品优势,磁珠法提取核酸,PCR反应液准备30l样本+20lPCR混合液,PCR扩增结果,30 min,10 min,70 min,灵敏度 10 IU/ml 线性范围 30-3108 IU/ml 基因型检测 HIV-1型的10个亚型 样本量 200 l 出结果时间 100 min 内标 有 操作优势 简便，精确，稳定,产品性能,上机检测,产品特点1,

7、线性范围宽：每个样本重复2次检测,准确定量线性范围为:3x1083x101IU/ml,东药生物,灵敏度高：,产品特点2,25份10 IU/ml 的灵敏度检测结果图，检出率为100%。,东药生物,产品特点3,HBV基因型检测范围广：可检测HBV A、B、C、D、E、F、G、H已有所有基因型。,检测的基因型血清盘来源于Seracare Life Sciences。,东药生物,产品特点4,假阴性控制：设置高效的内对照系统，内标探针与HBV目标基因探针采用不同的荧光报告基团标记，通过内标来检测PCR检测的全过程，避免PCR假阴性。,内标对高值样本和低值样本都能够起到监测作用。样本为 3x1083x10

8、1IU/ml,HEX:555nm,内标,目的基因,东药生物,产品特点5,严格的假阳性控制：设置了UNG酶+dUTP防污染措施，有效地防范了PCR扩增产物的污染，避免假阳性结果，提高临床诊断依据的可靠性,东药生物,UNG+dUTP系统,非UNG+dUTP系统,产品特点6,试剂精密度高：批内(重复10次测试) 、批间(重复30次测试)Ct值变异系数（CV）均2%；,东药生物,产品特点7,抗干扰能力强：实验证明，本试剂对于高血脂、高胆红素，以及抗病毒治疗等复杂样本具有很好的抗干扰能力，所含内、外源性干扰物质对定量结果没有影响。,检测样本分别模拟溶血，高胆红素，高血脂，以及常用抗病毒药物派罗欣，拉米夫

9、定，替比夫定等患者血清样本。,东药生物,与罗氏产品对比试验,东药生物,以罗氏COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV Test, v2.0作为参比试剂，同时检测20例病人血清样本，分析两者试剂检测的显著关系。实验结果如下图：,实验结果经过线性拟合分析表明，两种试剂的拟合度为99.56%，两者符合度非常高。,东药生物,人免疫缺陷病毒(HIV)核酸（RNA）定量检测试剂盒（荧光探针法）,通过磁珠法获得高纯度核酸，加大检测样本量(200l)，提高检测灵敏度和精确度；通过检测内标来监测样本中是否具有PCR 抑制物，避免假阴性；通过使用假病毒技术，提高工作标准品和质控品的稳定性。

10、,产品优势,磁珠法提取核酸,PCR反应液准备30l样本+20lPCR混合液,PCR扩增结果,30 min,10 min,70 min,灵敏度 100 IU/ml 线性范围 500-1109 IU/ml 基因型检测 HIV-1型的9个亚型 样本量 200 l 出结果时间 100 min 内标 有 操作优势 简便，精确，稳定,产品性能,上机检测,产品特点1,线性范围宽：每个样本重复2次检测,准确定量线性范围为:5x1095x102IU/ml,东药生物,灵敏度高：,产品特点2,60份100 IU/ml 的灵敏度检测结果图，检出率为100%。,东药生物,产品特点3,漏检率低，基因型覆盖范围广：可检测H

11、IV-1型中M，和O族的所有基因型。,检测的基因型血清盘来源NIBSCHIV-1基因型血清盘（包括M，N和O族）。,东药生物,产品特点4,假阴性控制：设置高效的内对照系统，内标探针与HIV目标基因探针采用不同的荧光报告基团标记，通过内标来检测PCR检测的全过程，避免PCR假阴性。,东药生物,产品特点5,工作校准品和质控品稳定性高，同时参与核酸提取过程。,东药生物,校准品经过37处理6天后，检测表明RNA没有任何降解。,产品特点6,抗干扰能力强：实验证明，本试剂对于高血脂、高胆红素，以及抗病毒治疗等复杂样本具有很好的抗干扰能力，所含内、外源性干扰物质对定量结果没有影响。,检测样本分别模拟溶血，高

12、胆红素，高血脂，以及常用抗病毒药物齐多夫定，拉米夫定，司他夫定等患者血清样本。,东药生物,与罗氏产品对比试验,东药生物,以罗氏COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HIV-1 Test作为参比试剂，同时检测20例病人血清样本，分析两者试剂检测的显著关系。实验结果如下图：,实验结果经过线性拟合分析表明，两种试剂的拟合度为99.55%，两者符合度非常高。,东药生物,专利申请,一种定量检测乙型肝炎病毒（HBV）的方法及其试剂盒 申请号：201110099880.9定性定量检测病原微生物遗传物质的方法及其试剂盒 申请号：200910010645.2快速定量检测肝炎病毒核酸的试剂盒及其检验方法申请号：201110164293.3一种易操作实用型磁性分离架专利号：201120122587.5,东药生物,东北制药辽宁生物医药公司,东药生物,Thank You !,谢谢！,