细胞化学染色.ppt

1、,过碘酸-雪夫反应 periodic acid-Scheff reaction PAS,原理,过碘酸是氧化剂，能使含有乙二醇基的多糖类物质（糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白及糖脂等）氧化，形成双醛基。醛基与雪夫试剂中的无色品红结合，使无色品红变成紫红色化合物，定位于多糖类的细胞内。,乙二醇基 双醛基,过碘酸氧化,血夫试剂中的无色品红,紫红色化合物,粒细胞系统 分化差的原始粒细胞阴性，分化好的原始粒细胞至中性分叶粒细胞呈阳性，随着细胞成熟阳性增强。 嗜酸性粒细胞颗粒本身不着色，颗粒间胞质红色，是碱性粒细胞反之。,正常细胞的染色反应,红细胞系统： 阴性 单核细胞系统：分化差的原始单核阴性，其它阳性。

2、淋巴细胞系统：大多数阴性，少数阳性（阳性率常20%） 巨核细胞系统：巨核细胞和血小板呈阳性，阳性反应程度随成熟增强。 其他细胞：少数浆细胞阳性，巨噬细胞可呈阳性。,1.红细胞系统疾病： 红血病、红白血病、骨髓增生异常综合征中有核红细胞呈阳性。 缺铁性贫血、地中海贫血、巨幼细胞性贫血、再障有核红细胞呈阴性。,临床意义,2.白细胞系统疾病： 主要用于辅助鉴别急性白血病的细胞类型。 急性巨核细胞白血病：部分巨核细胞呈阳性，呈粗颗粒状、小块状、或弥散分布。 急性粒细胞白血病:部分原始粒细胞呈阳性，呈细颗粒状或弥散分布,急性淋巴细胞白血病粗颗粒状或小块状 急性单核细胞白血病有时胞质边缘颗粒较粗大 慢性淋

3、巴细胞白血病时淋巴细胞阳性率增加，呈粗颗粒状或小块状,戈谢细胞呈阳性，尼曼-皮克细胞呈阴性。 RS细胞阴性或弱阳性，骨髓转移性腺癌呈强阳性。,酯酶染色,分为特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色,特异性酯酶染色：氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色。非特异性酯酶染色：酸性非特异性酯酶染色（酸性-醋酸萘酚酯酶染色）、碱性非特异性酯酶染色（-丁酸萘酚酯酶）和中性非特异性酯酶染色（-醋酸萘酚酯酶染色、醋酸AS-D萘酚酯酶染色）,氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色naphthol AS-D chloroacetate esteraseNAS-DCE,原理,血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶水解基质液中的氯乙酸AS-D萘酚，产生

4、AS-D萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞内酶所在部位。本实验常用重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成有色沉淀为红色。,原理： 氯乙酸AS-D AS-D萘酚 萘酚,氯乙酸AS-D 萘酚酯酶,监牢紫酱GBC,不溶性 沉淀,正常血细胞染色粒细胞系统 分化差的原始粒细胞阴性，分化好的原始粒细胞至成熟粒细胞呈阳性。 嗜酸性粒细胞呈阴性或弱阳性，嗜碱性粒细胞呈阳性。,单核细胞系统:绝大多数为阴性，仅个别单核细胞系统细胞呈弱阳性。 其他细胞：如淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核红细胞、血小板等均呈阴性，肥大细胞阳性。,临床意义,主要用于辅助鉴别诊断急性白血病细胞的类型，是急性白血病的常

5、规细胞化学染色。 1.急性粒细胞白血病时原始粒细胞呈阴性或阳性，所以染色结果为阴性者不能排除急粒的可能。,2.急性早幼粒细胞白血病早幼粒细胞呈强阳性。 3.急性单核细胞白血病时原始单核细胞及幼稚单核细胞几乎均呈阴性，个别弱阳性。 4.急性粒-单核细胞白血病时原始粒细胞及早幼粒细胞呈阳性，原始单核细胞及幼稚单核细胞呈阴性。,5.急性淋巴细胞白血病和急性巨核细胞白血病均呈阴性,应用评价,NAS-DCE是粒细胞的特异酯酶，它是急性白血病形态分型时常规做的细胞化学染色，尤其有助于POX染色阳性的急粒急单的鉴别。 该实验敏感性较POX低，如有一定数量白血病细胞NAS-DCE染色呈阳性，可以肯定其中粒系成

6、分的存在，阴性则不能排除有粒系成分的可能。,-醋酸萘酚酯酶染色 -naphthol acetate esterase -NAE,原理,-醋酸萘酚酯酶存在于单核细胞、粒系细胞和淋巴细胞中，是一种中性非特异性酯酶。血细胞内的-NAE在PH中性条件下，水解基质中的-醋酸萘酚释放出-萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性有色沉淀，定位于细胞内酯酶所在部位。 单核细胞系统可被氟化钠抑制，所以做-NAE时，需要同时做氟化钠抑制试验。,醋酸萘酚 萘酚,醋酸萘酚酯酶,水解,重氮盐,不溶性有色沉淀,正常血细胞染色,单核细胞系统：分化差的原始单核细胞呈阳性，分化好的原始单核细胞呈阳性，幼稚单核及单核细胞呈阳性

7、，可被氟化钠抑制。所谓抑制是指氟化钠实验的抑制率大于50%。 抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分氟化钠抑制率= 前抑制阳性率或阳性积分,粒细胞系统：阴性或阳性，但不能被氟化钠抑制。 淋巴细胞系统：多属阴性，少数弱阳性，阳性反应不能被氟化钠抑制。 其他细胞：巨核细胞和血小板呈阳性，阳性反应不能被氟化钠抑制；少数有核红细胞呈弱阳性，阳性反应不能被氟化钠抑制。,临床意义,主要用于 辅助鉴别急性白血病的类型： 1.急性单核细胞白血病中的细胞大多数呈阳性且较强，阳性反应能被氟化钠抑制。 2.急性粒细胞白血病中的原始粒细胞呈阴性或阳性，阳性反应不能被氟化钠抑制。3.急性早幼粒细胞白血病中的早幼

8、粒细胞呈强阳性，阳性反应不被氟化钠抑制。,4.急性淋巴细胞白血病中的原始淋巴细胞及幼稚淋巴细胞呈阴性至阳性，不被氟化钠抑制。5.急性粒单核细胞白血病中的原始粒细胞呈阴性至阳性。反应不被氟化钠抑制；原始单核及幼稚单核细胞呈阳性且较强，阳性反应能被氟化钠抑制。,应用评价,-NAE染色是急性白血病形态学分型时常规要做的细胞化学染色，对单核细胞白血病与粒细胞白血病鉴别诊断意义较大。一般来说，-NAE在急性单核细胞白血病细胞中的阳性较强，但M3或M2b也可呈强阳性。,醋酸AS-D萘酚酯酶染色,naphthol AS-D acetate esterase NAS-DAE,原理,NAS-DAE存在于单核细胞

9、、粒细胞和淋巴细胞中，是一种中性非特异性酯酶。 血细胞内的 NAS-DAE在pH中性的条件下水解基质液中的醋酸AS-D萘酚，释放出AS-D萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联成不溶性的有色沉淀定位于细胞质内酶所在的部位。,正常细胞的染色反应,粒细胞系统中，原始粒细胞阴性或阳性，早幼粒细胞至成熟粒细胞均阳性，阳性反应不被氟化钠抑制，其他血细胞染色基本同-NAE染色。,临床意义,基本同-NAE，用以辅助鉴别急性白血病细胞类型。,应用评价,基本同-NAE,-丁酸萘酚酯酶染色,-naphthol butyrate esterase -NBE,实验原理,-NBE主要存在于单核细胞中，是一种非特异性酯酶。血细

10、胞中的-NBE在PH碱性条件下，水解基质内的-丁酸萘酚并释放出-萘酚，后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性有色沉淀，定位于胞质内酶所在的位置。,正常细胞染色反应,1.粒细胞系统：各阶段粒细胞皆阴性。2.单核细胞系统：分化差的原始单核细胞呈阴性，分化好的原始单核细胞呈阳性，幼稚单核细胞及单核细胞呈阳性，阳性反应被氟化钠抑制。,3.淋巴细胞系统：T淋巴细胞、非T非B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞呈阴性。4.其他细胞：巨核细胞、有核红细胞、浆细胞呈阴性或弱阳性，组织细胞也可呈阳性，但不被氟化钠抑制。,临床意义,与-NAE染色的临床意义相同： 1.急性单核细胞白血病中的细胞大多数呈阳性，阳性反应能被氟化

11、钠抑制 2.急性粒细胞白血病中的原始粒细胞一般呈阴性 3.急性早幼粒细胞白血病中的早幼粒细胞常呈阴性,4.急性粒单核细胞白血病：单核系部分白血病细胞阳性，粒系部分白血病细胞阴性。 5.急性淋巴细胞白血病中的原始淋巴细胞及幼稚淋巴细胞一般呈阴性。,酯酶双染色,在同一张涂片上进行两种酯酶染色的方法称为酯酶双染色。一般采用一种特异性酯酶染色加一种非特异性酯酶染色，故常用的有-醋酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色、-丁酸萘酚酯酶与氯乙酸AS-D萘酚酯酶双染色等。,酸性磷酸酶染色,acid phosphatase ACP,实验原理,酸性磷酸酶（ACP）存在于细胞的溶酶体颗粒中，有些细胞中的酸性磷酸

12、酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的诊断和鉴别诊断。染色方法有偶氮偶联法和Gomori硫化铅法，前者常用。,偶氮偶联法：血细胞内的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）条件下水解基质中的磷酸萘酚AS-BI，释放出萘酚AS-BI，后者与基质中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞之内酶所在的部位。,抗酒石酸酸性磷酸酶染色：用相同的方法制备两份基质液，一份加入适量的L-酒石酸（左旋酒石酸），另一份不加酒石酸。取同一份骨髓标本的两张涂片，分别用这两种不同的基质液做酸性磷酸酶染色。如果血细胞内的酸性磷酸酶耐酒石酸，两张均呈阳性；如不耐酒石酸，不加L-酒石酸呈阳性反应，二甲L-酒石酸呈阴性

13、反应。,正常细胞染色反应,粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞呈阳性。,临床意义,1.多毛细胞白血病呈阳性（长强阳性），阳性反应不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞和恶性淋巴瘤细胞ACP染色也可呈阳性，但被L-酒石酸抑制。 2、戈谢细胞阳性，尼曼匹克细胞阴性。 3、T淋巴细胞阳性，B淋巴细胞阴性。,应用评价,ACP染色在多毛细胞白血病中最具特征性，所以主要用于多毛细胞白血病的诊断，其次是在戈谢病和尼曼匹克病应用。这些疾病在临床上均很少见，故常因为标本过少而导致试剂过期。,组织化学染色小结,在急性髓系白血病骨髓中，以原始和幼稚细胞增生为主，仅仅根据瑞氏染色下的细胞形态容易做出错误判断，因此不论急性白血病细胞形态表现是否典型，均应做细胞化学染色。,建议急性白血病至少应做：过氧化物酶染色、特异酯酶染色、非特异性酯酶染色、及过碘酸-雪夫反应。,白血病细胞具有高度特异性，同一类型白血病细胞在不同患者中，其细胞化学成分也不尽相同，经常会出现细胞化学染色结果不典型、模棱两可或结果与形态不相符的现象。,感谢您的关注！,