农用微生物菌剂(GB-20287-2006).doc

1、农用微生物菌剂（GB 20287-2006）前 言本标准的 5.1、5.3 和第 8 章条文为强制性条款，其余为推荐性条款。本标准的附录 A、附录 C 和附录 D 为规范性附录，附录 B 为资料性附录。农用微生物菌剂1 范围本标准规定了农用微生物菌剂（即微生物接种剂）的术语和定义、产品分类、要求、试验方法、检验规则、包装、标识、运输和贮存。本标准适用于农用微生物菌剂类产品。2 规范性引用文件（略）3 术语和定义（略）4 产品分类产品按剂型可分为液体、粉剂、颗粒型；按内含的微生物种类或功能特性可分为根瘤菌菌剂、固氮菌菌剂、解磷类微生物菌剂、硅酸盐微生物菌剂、光合细菌菌剂、有机物料腐熟剂、促生菌剂

2、、菌根菌剂、生物修复菌剂等。5 要求5.1 菌种生产用的微生物菌种应安全、有效。生产者应提供菌种的分类鉴定报告，包括属及种的学名、形态、生理生化特性及鉴定依据等完整资料。生产者应提供菌种安全性评价资料。采用生物工程菌，应具有允许大面积释放的生物安全性有关批文。5.2 产品外观（略）5.3 产品技术指标5.3.1 农用微生物菌剂产品的技术指标见表 1，其中有机物料腐熟剂产品的技术指标按表 2 执行。表 1 农用微生物菌剂产品的技术指标剂 型项 目液 体 粉 剂 颗 粒有效活菌数(cfu) a ，亿/g(mL) 2.0 2.0 1.0霉菌杂菌数，个/g(mL) 3.0106 3.0106 3.01

3、06杂菌率， % 10.0 20.0 30.0水分，% - 35.0 20.0细度，% - 80 80pH 值 5.08.0 5.58.5 5.58.5保质期 b，月 3 6a 复合菌剂，每一种有效菌的数量不得少于 0.01 亿/g(mL)；以单一的胶质芽胞杆菌（ Bacillus mucilaginosus）制成的粉剂产品中有效活菌数不少于 1.2 亿/g。b 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。表 2 有机物料腐熟剂产品的技术指标剂 型项目液 体 粉 剂 颗 粒有效活菌数(cfu)， 亿/g(mL) 1.0 0.50 0.50纤维素酶活 a，U/g（mL） 30.0 30.0 30

4、.0蛋白酶活 b，U/g(mL) 15.0 15.0 15.0水 分，% - 35.0 20.0细 度，% - 70 70pH 值 5.08.5 5.58.5 5.58.5保质期 c，月 3 6a 以农作物秸秆类为腐熟对象测定纤维素酶活。b 以畜禽粪便类为腐熟对象测定蛋白酶活。c 此项仅在监督部门或仲裁双方认为有必要时检测。5.3.2 农用微生物菌剂产品中无害化指标见表 3。表 3 农用微生物菌剂产品的无害化技术指标参数 标准极限粪大肠菌群数，个/g(mL) 100蛔虫卵死亡率，% 95砷及其化合物（以 As 计），mg/kg 75镉及其化合物（以 Cd 计），mg/kg 10铅及其化合物（以

5、 Pb 计），mg/kg 100铬及其化合物（以 Cr 计），mg/kg 150汞及其化合物（以 Hg 计），mg/kg 56 试验方法6.1 仪器设备（略）6.2 试剂（略）6.3 产品参数的检测6.3.1 外观(感官) 的测定取少量样品放到白色搪瓷盘(或白色塑料调色板)中，仔细观察样品的颜色、形状、质地。6.3.2 有效活菌数的测定采用平板计数法，根据所测微生物的种类选用适宜的培养基。若采用最大可能数（Most Probable Number，MPN）5 管法，遵照附录 C 的规定。6.3.2.1 系列稀释称取样品 10 g（精确到 0.01 g），加入带玻璃珠的 100 mL 的无菌水中

6、(液体菌剂取 l0.0 mL 加入 90 mL 的无菌水中)，静置 20 min，在旋转式摇床上 200 r/min 充分振荡 30 min，即成母液菌悬液（基础液）。用无菌移液管分别吸取 5.0mL 上述母液菌悬液加入 45 mL 无菌水中，按1:10 进行系列稀释，分别得到 1:1101，1:110 2，1:110 3，1:110 4稀释的菌悬液（每个稀释度应更换无菌移液管）。6.3.2.2 加样及培养每个样品取 3 个连续适宜的稀释度，用无菌移液管分别吸取不同稀释度菌悬液 0.1 mL，加至预先制备好的固体培养基平板上，分别用无菌玻璃刮刀将不同稀释度的菌悬液均匀地涂于琼脂表面。每一稀释度

7、重复 3 次，同时以无菌水作空白对照，于适宜的条件下培养。6.3.2.3 菌落识别根据所检测菌种的技术资料，每个稀释度取不同类型的代表菌落通过涂片、染色、镜检等技术手段确认有效菌。当空白对照培养皿出现菌落数时，检测结果无效，应重做。6.3.2.4 菌落计数以出现 20300 个菌落数的稀释度的平板为计数标准（丝状真菌为 10150个菌落数），分别统计有效活菌数目和杂菌数目。当只有一个稀释度，其平均菌落数在 20300 个之间时，则以该平均菌落数计算。若有两个稀释度，其平均菌落数均在 20300 个之间时，应按两者菌落总数之比值决定。若其比值小于等于 2 应计算两者的平均数；若大于 2 则以稀释

8、度小的菌落平均数计算。有效活菌数按式（1）或式（2）计算：nm = xkv1/(m0v2) 10-8 （1）nv = xkv1/(v0v2) 10-8 （2）式中：nm 质量有效活菌数， 亿/gnv 体积有效活菌数， 亿/mLx 菌落平均数， 个k 稀释倍数v1 基础液体积， mLv2 菌悬液加入量， mLv0 样品量， mLm0 样品量， g6.3.3 霉菌杂菌数的测定 采用马丁培养基，测定方法同 6.3.2。6.3.4 杂菌率的测定除样品有效菌外其它的菌均为杂菌。样品中杂菌率按式（3）计算：m = n1/(n1+n)100 （3）式中：m 样品杂菌率， %n1 杂菌数， 亿/g(mL)n

9、有效活菌数， 亿/g(mL)6.3.5 水分的测定将空铝盒置于干燥箱中 105 2 烘干 0.5 h，冷却后称量记录空铝盒的质量。然后称取 2 份平行样品（颗粒型样品，应先粉碎过 1.0 mm 试验筛），每份20 g（精确到 0.01 g），分别加入铝盒中并记录质量。将装好样品的铝盒置于干燥箱中 105 2 下烘干 4 h6 h。取出置于干燥器中冷却 20 min 后进行称量。水分含量按式（4）计算（结果为两次测定的平均值）：w = (m1- m2)/( m1- m0) 100 （4）式中：w 样品水分含量， %m0 空铝盒的质量， gm1 样品和铝盒的质量， gm2 烘干后样品和铝盒的质量，

10、 g6.3.6 细度的测定6.3.6.1 粉剂样品称取样品 50 g（精确到 0.1 g），放入 300 mL 烧杯中，加 200 mL 水浸泡 10 min30 min 后倒入孔径 0.18 mm 的试验筛中，然后用水冲洗，并用刷子轻轻地刷筛面上的样品，直至筛下流出清水为止。将试验筛连同筛上样品放入干燥箱中，在 105 2 烘干 4 h 6 h。冷却后称量筛上样品质量。样品细度按式（5）计算：s =1- m1/ m0（1- w） 100 （5）式中：s 筛下样品质量分数， %m0 样品质量， gw 样品含水量， %m1 筛上干样品质量， g6.3.6.2 颗粒样品称取样品 50 g（精确到

11、0.1 g），将两个不同孔径的试验筛（1.0 mm 和 4.75 mm）摞在一起放在底盘上(大孔径试验筛放在上面)。样品倒入大孔径试验筛内筛样品，然后称小孔径试验筛上的样品质量。颗粒细度按式（6）计算：g = m1 /m0 100 （6）式中：g 样品质量分数， %m1 小孔径试验筛上样品质量，gm0 样 品 质 量， g6.3.7 pH 值的测定打开酸度计电源预热 30 min，用标准溶液校准。pH 值的测定，每个样品重复三次，计算三次的平均值。6.3.7.1 液体样品用量筒取 40mL 样品放入 50 mL 的烧杯中，直接用酸度计测定，仪器读数稳定后记录。6.3.7.2 粉剂样品称取样品

12、15 g，放入 50 mL 的烧杯中，按 1:2(样品 :无离子水)的比例将无离子水加到烧杯中(如果样品含水量低，可根据基质类型按 1:31:5 的比例加无离子水)，搅拌均匀。然后静置 30 min，测样品悬液的 pH 值，仪器读数稳定后记录。6.3.7.3 颗粒样品样品先研碎过 1.0 mm 试验筛，按照 6.3.7.2 的方法测定。6.3.8 粪大肠菌群数的测定应符合 GB/T 19524.1肥料中粪大肠菌群的测定 的规定。6.3.9 蛔虫卵死亡率的测定应符合 GB/T 19524.2肥料中蛔虫卵死亡率的测定 的规定。6.3.10 纤维素酶活、蛋白酶活的测定应符合附录 D 的规定。6.3.

13、11 砷、镉、铅、铬、汞的测定应符合 GB 188772002 中的 5.125.17 的规定。6.3.12 保质期的检验在产品说明书标明的保质期前，按 6.3.16.3.11 方法测定产品相应指标。7 检验规则本标准中产品技术指标的数字修约应符合 GB 8170 的规定；产品质量合格判定应符合 GB 1250 中修约值比较法的规定。7.1 抽样按每一发酵罐菌液（或每批固体发酵）加工成的产品为一批，进行抽样检验，抽样过程严格避免杂菌污染。7.1.1 抽样工具无菌塑料袋(瓶) ，金属勺、抽样器、量筒、牛皮纸袋、胶水、抽样封条及抽样单等。7.1.2 抽样方法和数量一般在成品库中抽样，采用随机法抽取

14、。抽样以件为单位，小包装以每一包装箱为一件。随机抽取 35 件，每件中随机抽取一袋( 瓶) ；若每袋 (瓶) 包装小于 500 g（mL ）的产品，应多抽几件。大包装产品以一袋(桶) 为一件，随机抽取 510 件，在无菌条件下，每件取样 500 g(mL)，然后将抽取样品混匀，按四分法分装 3 袋(瓶)，每袋（瓶）不少于 500 g(mL)。7.2 检验分类（略）7.3 判定规则7.3.1 具下列任何一条款者，均为合格产品a. 检验结果各项技术指标均符合标准要求的产品；b. 在产品的外观、水分、细度、pH 值等检测项目中，有 1 项不符合要求，而其它各项技术指标符合要求的产品。7.3.2 具下

15、列任何一条款者，均为不合格产品a. 有效活菌数不符合技术指标；b. 霉菌杂菌数不符合技术指标；c. 杂菌率不符合技术指标；d. 粪大肠菌群不符合技术指标；e. 蛔虫卵死亡率不符合技术指标；f. 砷、镉、铅、铬、汞中任一含量不符合技术指标；g. 有机物料腐熟剂产品中所测酶活不符合技术指标；h. 在外观、水分、细度、pH 值等检测项目中，有 2 项（含）以上不符合要求。8 包装、标识、运输和贮存参见 NY 885-2004农用微生物产品标识要求附 录 A 常用检测培养基 参见 NY/T 1114-2004微生物肥料实验用培养基技术条件附 录 B（资料性附录）常用染色剂B.1 革兰氏染色剂B.1.1 结晶紫染色液（Hucker 氏配方）甲液：结晶紫（Crystal violet） 2.0 g乙醇(95%) 20.0 mL乙液：草酸铵(NH 4)2C2O4H2O 0.8g蒸馏水 80.0 mL甲、乙两液相混，过滤，棕色瓶保存。B.1.2 卢哥(Lugol)氏碘液碘(I 2)片 1.0 g碘化钾(KI) 2.0 g蒸馏水 300 mL先溶碘化钾于少量蒸馏水中，再将碘溶于碘化钾溶液中，可稍加热，最后加足蒸馏水，棕色瓶保存。B.1.3 脱色液 95%的乙醇液。B.1.4 复染液 0.5%的番红水溶液（Safranin O)