糖化血红蛋白.ppt

1、,HbA1c检测及标准化,HbA1c 与糖尿病糖尿病诊疗指南HbA1c检测HbA1c检测标准化进程我国HbA1c检测现状及标准化结,内容：,糖尿病的流行病学,据国际糖尿病联盟（IDF）统计，2000年全球DM为1.51亿，2011年达2.85亿，预计2030年达5亿。中华医学会糖尿病学分会（CDS）调查显示：20岁以上人群中糖尿病患病率为9.7%，糖尿病前期更高达15.5%（1/4高血糖状态）。我国60.7%糖尿病患者未被诊断而无法及早治疗。 中国2型糖尿病防治指南（2010年版）,糖尿病的危害,糖 尿 病,第3位致死原因,60%-70%的患者存在神经损害,糖化血红蛋白,葡萄糖,G-6-P,果

2、糖,血红蛋白,血红蛋白,糖,糖化血红蛋白和HbA1c,糖化血红蛋白（GHb ）：血红蛋白氨基酸残基与糖的氨基化合而成的产物。 HbA1c ：血红蛋白两条链N端的缬氨酸残基与葡萄糖的氨基化合而成的产物。 。,HbA1c,糖,糖,血红蛋白及糖化血红蛋白的种类,糖,糖化HbA,HbA,两条链,两条链,+ 1,6 二磷酸果糖,+ 6 磷酸果糖,+ 丙酮酸,+葡萄糖,HbA1a1,HbA1a2,HbA1b,HbA1c,HbA0,在HbA1中主要的成分是HbA1c，约占60%糖化血红蛋白的术语应为HbA1c，可缩写为A1C,HbA1,HbA1c的形成过程,Amadori,缓慢的非酶促的不可逆的,2糖化血红

3、蛋白比例高低的决定因素：, 血糖浓度 血糖与血红蛋白的接触时间 红细胞的存活时间,HbA1c形成的影响因素,HbA1c 与糖尿病,（Diabetes Control and Complications Trial）,试验简介： 在美国和加拿大以1441名1型糖尿病 患者为对象（29家医疗机构），分为2组治疗，一组是传统治疗法，一组为强化胰岛素疗法，进行了9年的跟踪调查。 结 论： 进行严格的血糖管理，可以有效地控制糖尿病并发症的发生和发展。,DCCT研究（1984-1993）,当HbA1c测定值降低1%：使糖尿病相关并发症发生的风险降低21%，相关死亡降低25%，患者总死亡率降低17%；患者心

4、肌梗死的风险降低18%，脑卒中风险降低15%，眼和肾继发性疾病的风险降低35%。,血糖,糖化血红蛋白,采血时的血糖值,血红蛋白的寿命120天,2-3个月的平均血糖值,反映血糖期间,现在,过去,HbA1c在糖尿病中的作用监测23个月血糖控制的总体水平,平均血糖估计值=30.9HbA1c值-60.6,DCCT：,临床意义： ADA建议HbA1c 控制目标是0.5%,临床有意义的变化 指导临床医生药物的选择,不同的HbA1c水平,空腹和餐后血糖对HbA1c影响不同。,餐后血糖,空腹血糖,HbA1c,糖尿病与HbA1c糖尿病诊疗指南HbA1c检测HbA1c检测标准化进程我国HbA1c检测现状及标准化小

5、结,内容,ADA、EASD、IDF专家委员会2008共识,糖尿病的诊断标准2008,2010年ADA糖尿病诊治指南增加糖化血红蛋白（HbA1c)6.5%作为糖尿病的诊断标准,source：www.care.diabetesjournals.org,2011年-WHO同意将HbA1c作为糖尿病辅助诊断指标HbA1c从治疗监控转型为诊断指标,中国糖尿病诊治指南采用WHO（1999）诊断标准,因HbA1c 6.5 的切点是否适合我国人群尚未在我国人群中验证，且我国HbA1c检测方法的标准化程度不够，测定的仪器和质量控制尚不能符合目前糖尿病诊断标准的要求，因此目前暂不推荐应用HbA1c诊断糖尿病 -中

6、国血糖监测临床应用指南（年版）,中国血糖监测临床应用指南-2011,中国成人2型糖尿病HbA1c控制目标的专家共识（2010年）,虽然目前HbA1c尚未纳入中国糖尿病诊疗指南中，但HbA1c在治疗中的重要性日益彰显。,糖尿病与HbA1c糖尿病诊疗指南HbA1c检测HbA1c检测标准化进程我国HbA1c检测现状及标准化小结,内容,HbA1c的检测方法,HbA1c的检测方法,离子交换HPLC法-ADA推荐参考方法,非糖化血红蛋白（HbA0) 链N-端带正电荷 当被糖基化(HbA1c），正电荷减少,离子交换 HPLC 洗脱原理 ：按照电荷差异性,离子交换 HPLC 洗脱原理 ：按照电荷差异性,His

7、,Leu,Thr,Val,HbA1B-chain,?,Val,His,Leu,Thr,Val,His,Leu,Thr,HbA1A1-chain,HbA1A2-chain,Fru,G6,Val,His,Leu,Thr,HbA0-chain,Val,His,Leu,Thr,Gluc,HbA1C-chain,HbF,慢 快,亲和层析法,Val,His,Leu,Thr,Gluc,NH,B,OH,OH,OH,O,O,亲和层析法检测的是总糖化血红蛋白（GHb),包括HbA1c和在其他位点被糖基化的血红蛋白。,Val,His,Leu,Thr,固相 (苯基硼酸柱),亲和层析图谱,亲和层析法检测原理检测总糖化血

8、红蛋白（GHb）,酶法,酶法检测原理（积水医疗）,蛋白酶酶切,第一步：Hb 浓度测定,第二步：HbA1c 浓度测定,果糖基肽氧化酶（FPOX）,H2O2,过氧化氢酶（POD) 显色剂,显 色,需要采集血球标本再进行溶血处理半自动操作，速度慢,全血直接检测比色法检测 Hb免疫竞争抑制法检测 HbA1c检测的高特异性和精确性，检测IFCC参考系统定义的真正的HbA1c,.,免疫法反应原理,Reaction kinetics of the twin test mode on INTEGRA and cobas c systems with Tina-quant HbA1c reagents,“双胞试

9、验”，同一比色杯同时检测Hb和HbA1c，计算或转换为 NGSP或IFCC数值提高精密度优化通量,免疫法原理检测技术,电泳法,原理 各种蛋白质都有其等电点，蛋白质在一定条件下带有不同电荷，在电场中泳动不同 优点：干扰少不足：1.需成批进行，无法进行实时检测，速度比较慢2.自动化程度低，急诊插入、自动维护等功能比较欠缺。 3.商品化产品少，用于科研。,HbA0,HbA1c,HbA1a HbA1b,+,-,影响HbA1c测定结果的因素,40,HbA1c的测定结果取决于血糖水平,Tahara Y et al.Diabetes Care,1993,16(9):1313-1314. Fitzgibbon

10、s,et al.J Clin Invest,1976,41:820-824.,41,糖化血红蛋白水平反映的是在检测前120天内的平均血糖水平，HbA1c的测定结果取决于血糖水平,HbA1c与空腹血糖及餐后血糖有很好线性相关,Ito C,et al. Diabetes Research and Clinical Practice,2000,50: 225-230.,42,HbA1c随年龄而变化,目前HbA1c未因年龄差异制定不同的控制目标,Pani LN，et al. Diabetes Care，2008，31：1991-1996.,43,：所有个体：女性：男性,血红蛋白类型及水平异常干扰HbA

11、1c检测方法,Roberts WL，et al. Clin Chem，2005，51：776-778.Cox T，et al.Am J Clin Pathol，1993，99（2）：137-141.Bry L，et al. Clin Chem，2001，47（2）：153-163.,44,目前许多检测方法可对大部分常见血红蛋白亚型进行校正，但部分方法检测结果仍会受到血红蛋白亚型的干扰,以CLC 330 的HPLC方法为参照方法，比较了11种检测方法对HbA1c（AA、AC、AS）检测结果的影响P0.01时:临床上有显著差异#: 统计学上有显著差异，与HbAA的差具有显著性意义,检测方法对HbA

12、1c结果的影响,Bry L，et al. Clin Chem，2001，47（2）：153-163.,45,当糖化血红蛋白遗传学异常或是生化修饰异常时，不同的检测方法所测定的HbA1c结果可能不同,不同地域的HbA1c水平存在差异,杨历新,等. 中华内分泌代谢杂志, 2012, 28(5): 412-413.,46,海拔愈高，居留时间愈久，红细胞、Hb也愈多，HbA1c红细胞水平愈高,高海拔地区人群的血红蛋白水平升高，与平原、低海拔地区人群的血红蛋白水平差异很大分析处于高海拔地区人群的HbA1c检测结果时需要特别谨慎,部分饮食和药物影响HbA1c的检测结果,Boeing H，et al.Am

13、J Clin Nutr，2000，71（5）：1115-1122. Bry L，et al. Clin Chem，2001，47（2）：153-163. Jain SK，et al.Free Radic Biol Med，2007，43（8）：1124-1131. Jain SK，et al.J Am Coll Nutr，1996，15（5）：458-461. Iwamoto Y，et al. J Periodontol，2001，72（6）：774-778. Camargo JL，et al.Clin Chim Acta，2006，372（1-2）：206-209.,47,1773名中年男性

14、和女性的横断面研究：通过饮食和生活方式分组判断对平均HbA1c水平的影响，发现酒精、维生素C和维生素E的摄入量与HbA1c水平显著相关,Quintiles of PAL：1 (男性1.48; 女性1.48)；2 (男性1.67; 女性1.63)；3 (男性1.87; 女性1.83)；4 (男性2.15; 女性2.07)，5 (男性 2.15; 女性 2.07)；对照组：Quintile 1（低HbA1c ）,社会经济状况和心理状态,自我控制能力低、合作能力差、社会支持少的人HbA1c水平较高,Daniel M，et al. Prev Med，1999，29（5）：405-413.Feldman

15、 PJ，Steptoe A. Health Psychol，2003，22（4）：398-405.,48,Daniel等多元分层分析：研究社会变化、较低控制、生存条件等心理压力指标对HbA1c的影响,HbA1c水平存在种族差异,Herman WH，et al.Diabetes Care，2007，30：2756-2758.Saaddine JB，et al. Diabetes Care，2002，25（8）：1326-1330.,49,HbA1c的种族差异原因尚不明确，制定管理目标时需要考虑此因素,特殊的糖尿病类型,刘志文等,中华临床医师杂志(电子版),2011,5(5):1536-7.中华医

16、学会糖尿病学分会.中国1型糖尿病诊治指南.人民卫生出版社.2012.,50,有一些临床少见的情况，如进展迅速的1型糖尿病，这时HbA1c就可能没法“赶上”急性血糖变化的速度，检测结果偏低，因而不能反应真实的平均血糖水平,中国病例报告：暴发性1型糖尿病一例,空腹血糖,餐后血糖,随机血糖,其他疾病状态对HbA1c的影响,Lahousen T,et al.World J Gastroenterol,2004,10(15):2284-2286. Schnedl WJ,et al.Clin Lab,2007,53(3-4):179-181. Mohan Kumar KM,et al.Clin Chim

17、Acta,2004,342(1-2):187-192. Inaba M,et al.J Am Soc Nephrol,2007,18(3):896-903. Abe M,Matsumoto K.Nat Clin Pract Nephrol,2008,4(9):482-483. Diop ME,et al.AIDS Res Hum Retroviruses,2006,22(12):1242-1247.,51,很多其他疾病及为治疗疾病所使用的药物都会对HbA1c水平造成影响,甲亢脂质过氧化影响HbA1c检测结果贫血和注射促红素后幼稚红细胞比例增加降低HbA1c检测结果HIV感染抗逆转录病毒药物所导

18、致的亚临床溶血降低HbA1c检测结果酗酒和肝炎干扰红细胞生成及降低红细胞寿命降低HbA1c检测结果抗病毒药物病毒唑联合干扰素治疗溶血性贫血影响HbA1c检测结果,常见的肝脏疾病对HbA1c检测结果的影响,Lahousen T,et al.World J Gastroenterol,2004,10(15):2284-2286.,52,糖尿病与HbA1c糖尿病诊疗指南HbA1c检测HbA1c检测标准化进程我国HbA1c检测现状及标准化小结,内容,HbA1c检测标准化进程,国际标准化主要组织,IFCC欧州,NGSP美国,JDS日本,JDS和IFCC，NGSP协调，已经搞清楚了和其的互换关系式。,IF

19、CC値= 1.068 JDS値 1.741%,NGSP値= 0.999 JDS値 0.290%,NGSP值= 0.0915IFCC值+2.15%,不同国家HPLC方法检测值不同,NGSP & IFCC NGSP参考方法非特异性,以DCCT中BioRex 70 HPLC为参考方法优点：精密度好，结果长期稳定，CV3%缺点：非特异，方法间的差异大（如：DCCT/NGSP中Bio-Rex 70 HPLC和瑞典Mono-S HPLC两种方法在判断限水平的差异达20%）,确定参考系统IFCC定义的HbA1c：血红蛋白链N-端缬氨酸被不可逆地糖化。,美国标准化,国际标准化,国际HbA1c标准化IFCC（国

20、际临床化学学会）参考系统建立特异性检测方法,HbA1c,缺乏统一公认的标准物质和参考方法。三个标准化组织的HPLC检测方法为非特异性，结果各不相同。,制备高度纯化的一级标准物质,明确定义HbA1c,建立国际参考实验室网络,建立特异性检测HbA1c的方法,国际标准化,2009年时， HbA1c已被标准化，时机已成熟：99%的美国和欧洲的HbA1c检测已被NGSP以DCCT标准标准化方法学已广泛被接受，且妨碍因素几乎均被考虑或最小化所有HbA1c检测方法均必须溯源到IFCC的参考方法，同时必须得到NGSP的认证,NGSP&IFCC 溯源性证书,IFCC的参考方法分为三步：,IFCC参考方法流程（特

21、异性检测）,IFCC参考方法专利,IFCC参考方法专利号：EP 693 599,ADA/EASD/IDF/IFCC 2010国际共识确认IFCC参考系统为全球标准化唯一系统,溯源到IFCC参考系统。,糖尿病与HbA1c糖尿病诊疗指南HbA1c检测HbA1c检测标准化进程我国HbA1c检测现状及标准化小结,内容,2008 HbA1c 室间质评,2011年HbA1c检测仪器现况调查,，,Upper boundaries,Low boundaries,UPPER and low boundaries of HbA1c assays in 569 hospitals 2010 HA1c的报告参考范围,

22、2011年HbA1c检测仪器现况调查,69,SFDA行业标准糖化血红蛋白分析仪 -针对厂家在中国上市 HbA1c 结果报告：IFCC (mmol/mol)及衍生的NGSP(%) 卫生部糖化血红蛋白（HbA1c）实验室检测指南 -针对临床实验室 HbA1c 结果报告：NGSP(%), IFCC (mmol/mol),中国相继出台HbA1c行业标准,69,70,方法精密度要求：室内CV3%；血液采集：合适的采血管；样本保存：按照说明书要求，长期保存需在-70；室内质控：每批分析都应同时测定至少2个不同水平（高、低值）的质控物；质控品分装冷冻保存，-70可保存一年以上。参加室间质评结果报告：NGSP

23、(%), IFCC (mmol/mol)参考区间：验证实验室应知晓本室所用色谱柱可检测样品的数量，达到检测数量限应及时更换，不可超量使用。 注：不同方法的色谱柱可检测样品数量是不同的。,相关质量要求,70,我国向HbA1c标准化迈步,参加卫生部临检中心室间质量评价的实验室逐年增加,实验室间CV值逐年减小,2010年3月中国HbA1c教育计划在京启动,2012年，上海市临床检验中心建立 IFCC检测的一级参考方法,卫生部临检中心建立了检测参考方法，研制出了国家一级标准物质。,历年卫生部EQA结果一览,July 21, 2018,中国有超过20918家医院,小结,HbA1c 检测除用于疗效评估外，逐渐被纳入诊断指南HbA1c检测方法众多，均有其优劣势，但国际标准化是大势所趋我国日益重视HbA1c检测标准化。,谢 谢！,一路同行，携手共攀高峰,