噬中性粒细胞.ppt

1、,噬中性粒细胞,主要内容,一、来源 二、主要构造 三、染色 四、特点 五、研究方向,嗜中性粒细胞，圆形，胞质淡红色。胞核幼稚型呈 杆状或马蹄形，成熟的呈分叶状，三叶的较多见， 来源于骨髓造血干细胞。属于多形核细胞的一种 。,一、来源,中性粒细胞来源于骨髓的造血干细胞，在骨髓中分化发育后，进入血液或组织。在骨髓、血液和结缔组织的分布数量比是28:1:25。每微升血液中约有4500个中性粒细胞。成年人血液中噬中性粒细胞的数量约占白细胞总数的55%-70%，约占粒细胞90%以上。中性粒细胞在血管内停留的时间平均只有6-8小时，它们很快穿过血管壁进入组织发挥作用，而且进入组织后不再返回血液中来。在血管

2、中的中性粒细胞，约有一半随血流循环，通常作白细胞计数只反映了这部分中性粒细胞的情况；另一半则附着在小血管壁上。同时，在骨髓中尚贮备了约两万五千亿个成熟中性粒细胞,在机体需要时可立即动员大量这部分粒细胞进入循环血流。,二、主要构造,细胞直径1012m。中性粒细胞的胞质呈浅粉红色，含有许多细小颗粒，其中浅紫色的为嗜天青颗粒（azurophilic granule），浅红色的为特殊颗粒（specific granule）。嗜天青颗粒约占颗粒总数的 20，电镜下颗粒较大，直径 0.60.7m，呈圆形或椭圆形，电子密度较高。它是一种溶酶体，含有酸性磷酸酶、髓过氧化物酶和多种酸性水解酶类等，能消化吞噬的细

3、菌和异物。特殊颗粒约占颗粒总数的 80，电镜下颗粒较小，直径 0.30.4m，呈哑铃形或椭圆形。特殊颗粒是一种分泌颗粒，内含溶菌酶、吞噬素（Phagocytin）等，吞噬素也称防御素（defensin），具有杀菌作用。,髓过氧化物酶是中性粒细胞所特有，即使在有强吞噬作用的巨噬细胞中也极少或完全没有这种酶。在细胞化学上，一般将这种髓过氧化物酶作为中性粒细胞的标志。,三、染色,1 瑞氏染料是由碱性染料美蓝（ Methvlem blue ）和酸性染料黄色伊红（ Eostm Y ）组成的，合称伊红美蓝染料即瑞氏 （美蓝伊红Y）染料。伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊

4、红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。2 用 甲醇作瑞氏 染料溶剂，即成瑞氏染液。,瑞氏染料 嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合，染粉红色，称为嗜酸性物质； 细胞核蛋白、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞胞质为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色或蓝色，称为嗜碱性物质； 中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫红色，称为嗜中性物质。,血涂片自然干燥后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。随后将玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其盖满血涂片，大约1分钟后，滴加等量或稍多的II液，用吸耳球轻轻混

5、匀。冲洗：染色5-10分钟用流水染液，待干。结果观察，将干燥后的血涂片置显微镜下观察。先用低倍镜观察血涂片，再用油镜。,Eosnophils 嗜酸性粒细胞,Neutrophils 噬中性粒细胞,basophilic granulocyte 嗜碱性粒细胞,四、特点,1.升高降低,生理学变异升高 婴儿约升高220%（皮质激素、肾上腺治疗），用力、艰苦的锻炼约升高40%，妇女妊娠约升高23%，吸烟约升高18%，昼夜委律晚上约升高14%，黄体期约升高9%； 降低 4-14岁儿童约降低11%，月经期约降低15%，绝经约降低18%，黑色人种约低40%； 3.外周血中性粒细胞,一天内存在着变化，下午比早晨高

6、剧烈运动或劳动后，高温、严寒、饱餐、淋浴后、妊娠后期、分娩时也增高。病理学变异增加 见于骨髓增殖综合症、细菌感染、某些寄生虫病、组织局部缺血或坏死、癌和何杰金氏病、急性出血和急性溶血之后、代谢性疾病（痛风危象、糖尿病酸中毒、肾功能不全）、炎症综合性、变态反应和各种中毒。减少 骨髓发育不全、骨髓入侵（成少突神经胶质细,胞的造白细胞组织增生、部分成髓细胞性白血病）、病毒感染、伤寒、副作寒、某些寄生虫病（疟疾、黑热病）、甲状腺机能亢进、脾功能亢进、瓦尔登斯特伦病、多发性骨髓瘤、费尔提综合征、贫血（缺铁、缺叶酸、维生素B12缺乏）、放射线（如：定位治疗）、粒细胞缺乏症（中毒：匹拉咪痛、吩噻嗪、保泰松、

7、抗甲状腺药等；免疫-免疫变态反应性疾病；全身性疾病）。,核左移,核左移对病情的严重程度和机体的反应能力的估计有一定的价值。当机体受细菌严重感染时，大量新生细胞从骨髓进入血液，杆状核与2叶核的细胞增多，称为核左移。 相对不成熟的杆状核中性粒细胞等幼稚中性粒白细胞所占中性粒细胞比例增加（超过5），或同时出现晚、中、早幼粒细胞等早期细胞即为核左移。,核右移,通常，中性粒细胞分叶过多（5叶核以上者超过3%）的现象称为核右移。表明骨髓的造血功能发生障碍。 核右移：常伴有白细胞总数的减少和中性粒细胞的相对增多，主要见于营养性巨幼细胞贫血、恶性贫血、尿毒症、脚气病、遗传性中性粒细胞分叶过多及使用抗代谢药物后

8、。,分为再生性核左移和退行性核左移，常见于多种严重感染。 再生性核左移：多见于大叶性肺炎、化脓性阑尾炎、类白血病反应、缺氧、低血压等。 退行性核左移：多见于机体抵抗力低下时的严重感染，如伤寒、伴中毒性休克的败血症。 核左移多见于淋巴造血系统肿瘤，如急性淋巴性白血病。也常见于严重炎症造成的类白血病反应。,药物影响 增加 考的松和氢化考的松能刺激骨髓造血机能，使 中性粒细胞增加。烟酸可使中性粒细胞增加。烟酰胺用药2g，4小时后中性粒细胞可增加40%，长期使用锂可致中性粒细胞增加，停药后即恢复。减少 苯妥英钠、三甲双酮、奋乃静、氯丙嗪、扑热息痛、消炎痛、羟保泰松、安替比林、双氢氯噻嗪（一时性）、地高

9、辛、普鲁卡因酰胺（一时性严重减少）、氯噻嗪、速尿、利尿酸、氯噻酮、华法令、甲亢平、甲碘丁脲（一时性）、维生素A、,氨苄青霉素、二甲氧苯青霉素钠、青霉素、羟苄青霉素（一时性）、先锋霉素、先锋霉素I（N减少、少见总数减少）、强力霉素、四环素 （一时性）、氯霉素（毒性作用或至再障），灰黄霉素（可减少到20%伴总数降低）、利福平、异烟肼、氨基水杨酸、乙醇、瘤可宁（严重减少N）、环磷酰胺、硫唑嘌呤、硫秋水仙碱（N减少，淋巴细胞增加）。,2.非特异性细胞免疫,中性粒细胞在血液的非特异性细胞免疫系统中起着十分重要的作用，它处于机体抵御微生物病原体，特别是在化脓性细菌入侵的第一线。 当炎症发生时，它们被趋化性

10、物质吸引到炎症部位。对中性粒细胞起趋化作用的物质，称为中性粒细胞趋化因子。中性粒细胞膜上有趋化因子受体，受体与趋化因子结合，激活胞膜上的钙泵，细胞向前方伸出片足，使细胞移向产生趋化因子的部位。伪足的变化与F-actin的聚合密切相关,而F-actin的聚合又受到极性信号分子的调节,因此对伪足变化的分析有助于了解中性粒细胞极性,信号传导通路的调节机制。 接触部位的细胞膜下凹，将异物包围，形成含有异物的吞噬体或吞噬泡。中性粒细胞膜表面有IgGFc受体和补体C3受体，可加速吞噬作用。被吞噬的异物裹有抗体和补体时，与中性粒细胞膜上的相应受体结合，而加强了细胞对它的吞噬作用，称为调理作用。 由于它们是借

11、糖酵解获得能量，因此在肿胀并血流不畅的缺氧情况下仍能够生存，它们在这里形成细胞毒存在破坏。,细胞随着吞噬作用的开始，导致细胞膜紊乱而引起呼吸爆发，细胞耗氧量增加，产生大量的过氧化物及超氧化物等细胞毒性效应分子，对寄生虫具有杀伤活性。在IFN-和TNF刺激下，则可产生更多的过氧代谢阴离子，杀死胞外寄生虫。发表在免疫学上的一项研究显示，在嗜中性粒细胞转移到淋巴结的过程中它们在这里形成了动态分子团，就像蜂群一样，这些细胞扮演了抵抗胞内寄生物的一个重要角色。 由于中性粒细胞内含有大量溶酶体酶，因此能将吞噬入细胞内的细菌和组织碎片分解，,这样，入侵的细菌被包围在一个局部，并消灭，防止病原微生物在体内扩散

12、。 中性粒细胞在杀死吞噬的细菌等异物后，本身也死亡，死亡的中性粒细胞称为脓细胞。中性粒细胞本身解体时，释出各溶酶体酶类能溶解周围组织而形成脓肿。其分解产物有的又是中性粒细胞趋化因子，能吸引更多的中性粒细胞。中性粒细胞释放的物质中，还有嗜酸性粒细胞趋化因子、中性粒细胞不动因子(NIF)、激肽酶原、血纤维蛋白溶酶原、凝血因子、白三烯等(成令忠，1993)。,中性粒细胞的细胞膜能释放出一种不饱和脂肪酸花生四烯酸，在酶的作用下，由它再进一步生成一组旁分泌激素物质，如血栓素和前列腺素等，这类物质对调节血管口径和通透性有明显的作用，还能引起炎症反应和疼痛，并影响血液凝固。,3.免疫病理损害,除了在抗感染中

13、起重要的防御作用外，中性粒细胞可引起感染部位的炎症反应并参与寄生虫感染引发的变态反应，从而引起免疫病理损害。 （1）抗体直接作用于组织或细胞上的抗原，中性粗细胞通过其Fc受体与靶细胞表面的IgGFc段结合，发挥ADCC作用，从而导致细胞毒型变态反应损害；（2）当抗原抗体比例适合而形成19S大小的免疫复合物，不易被吞噬，沉积于毛细血管壁，激活补体，吸引中性粒细胞至局部。,中性粒细胞通过Fc受体和C3b受体与免疫复合物结合并吞噬之。吞噬过程中脱颗粒，释放出一系列溶酶体酶类，造成血管和周围组织的损伤；（3）在IgE介导的速发型变态反应的部位，也有中性粒细胞的聚集，说明中性粒细胞也参与了速发型变态反应

14、导致的病理损害(刘约翰等，1993)。,PMN的凋亡控制炎症反应的时间和强度，生理情况下，PMN自发性凋亡而保持体内的PMN的数量稳定，急性炎症情况下，它们从血液中迁移到炎症组织，促炎介质使PMN凋亡延迟，这是PMN聚集的重要机制之一，在炎症急性阶段可能有重要作用。许多促炎介质（C5a、GM-CSF、fMLP）被认为是PMN的存活因子，它们通过不同路径延迟PMN的凋亡。PMN适时凋亡可减轻对组织的损害，巨噬细胞吞噬凋亡的PMN时不释放炎性介质，所以它们的凋亡不会损害机体。PMN凋亡紊乱和多种急性和慢性炎症性疾病相关。,五、研究方向,1.NE 中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elas

15、tase,NE)属于丝氨酸蛋白酶超家族,是PMN产生的一种细胞毒性分子，分子量为30kD， NE能够降解几乎所有的细胞外基质蛋白和许多重要的血浆蛋白。每个PMN内NE总量在3pg以上,储存于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中,当细胞活化、呼吸爆发及细胞裂解时,迅速释放到细胞外。生理条件下,NE参与调节炎性反应,促进吞噬细胞消除有害病菌,构成机体防御系统的重要部分。 研究中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE)对人肝癌HepG2细胞内PI3K/Akt、MEK/ERK信号通路的作用并探讨相关机制，,同时观察NE对HepG2细胞增殖与凋亡的影响，为 肝细胞肝癌发病机制的研究提供新的

16、思路。 方法：激光共聚焦法观察NE在细胞内的定位；Western印迹杂交法检测NE作用后HepG2细胞内PI3K/Akt、MEK/ERK信号通路活化状态的变化并分析其相关性；设定不同浓度的NE作用于HepG2细胞，利用CCK-8法检测细胞的增殖情况；用流式细胞仪技术分析特定浓度NE作用后的细胞在受到化疗药物杀伤时细胞凋亡的变化；所得数据采用SPSS17.0软件进行统计分析。 结果：激光共聚焦实验表明NE可以进入细胞,内，且主要位于细胞质靠胞膜侧；20nM和40nM的NE处理HepG2细胞后p-Akt的水平分别提高+45%和+74%（P0.01)，40nM组与20nM相比，p-Akt水平提高了2

17、0%（P0.01)，Akt、p-MAPK(Erk1/2)和MAPK(Erk1/2)无明显改变(P0.05)； CCK-8法检测不同浓度NE（20nM,40nM）作用细胞后的吸光度（OD值），结果发现经NE作用后的细胞吸光度明显增加；流式细胞仪检测HepG2细胞在经过15ug/ml丝裂霉素(MMC)处理后，凋亡率为39.72.3%，经过同样处理的NE（40nM)/HepG2细胞，凋亡率降至15.71.5%（P0.01)。,结论： NE可以进入细胞并定位于胞膜侧，通过上调PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平从而促进HepG2细胞增殖和逃避凋亡。,2.人体天网,德国科学家在观察人体免疫系统对

18、付细菌的过程中意外发现，在那些被人体灭菌勇士白血球杀死的细菌周围，经常会看到一些丝状体物质。起初，他们以为这是显微镜的镜片不干净导致的观察错觉。但后来他们发现，这些丝状物总是在细菌进入人体后，很快就出现在细菌周围。它们相互缠绕，构成了网。这些网就像蜘蛛网那样，能够迅速把细菌横七竖八地黏在上面，从而将细菌擒拿。随后，这些网就密切配合人体白细胞里的其他物质，把被擒拿的细菌毒杀或者吞吃掉。,更为奇特的是，这种由丝状体物质构成的网还能对人体内健康的细胞起到保护作用。实验发现，在对付病毒的战斗中，有一种细胞分泌出来的蛋白酶在同细菌作战的时候，有时候会伤及无辜，给人体健康细胞造成伤害。为了避免或减少这种伤

19、害事件的发生，这个网凭借自身的黏性，主动把这些蛋白酶集中到病菌密集的局部地方，帮助它们认准来犯之敌，同时避免误伤健康细胞。最让人吃惊的是，这些由丝状体物质编成的网，在发挥完杀敌和护体作用后，就自行化解，神秘地消失了。,什么是物质编织？ 德国科学家通过细致观察和辨认，最后揭开了谜底。原来，白血球里的中性粒细胞在发现细菌入侵的敌情后，会马上奔赴疆场，与细菌拼杀。这些投入到疆场的中性粒细胞注定要成为烈士，因为它们就像是过河的小卒，从不知道退路在哪里，而且它们的寿命只有几个小时。这些投入疆场的勇士，在与细菌拼杀到筋疲力尽的时候，便自行解体，从体内抛出丝状体物质。众多勇士的丝状体物质缠绕在一起，就构成了

20、细菌难逃的“天网”。让人惊讶的是，构成“天网”的丝状体物质，恰恰就是隐藏在中性粒细胞内部的DNA。,DNA竟然会在危急时刻挺身而出，织“网”杀敌这可是长久以来有关DNA的从未有过的重大发现。,用“天网”破解谜案。体内由DNA编织的“天网”被发现后，这种奇特现象立即触发了许多医学家的联想和灵感。他们发现，过去许多非常难解的医学谜案，现在看来可能与人体“天网”有关。 不孕症问题就是一例。有些夫妇婚后多年不能生育，根本原因是什么？长久以来，医学界一直是说法众多，莫衷一是。前不久，美国研究人员发现，不孕症竟然与“天网”有神秘联系。研究人员在对母马进行人工授精的过程中发现，中性粒细胞在母马体内遇到人工输

21、入的公马的精子时，也会抛出“天网”，将精子捕获。中性粒细胞为什么要阻挡精子呢？,原来有的精子本身携带有细菌，这使得中性粒细胞误以为它们都是细菌，所以只好六亲不认，统统将其拿下。但精子也有自己的逃生绝活儿，它们本身携带有一种能够将“天网”网丝熔化开的特殊物质，因此，那些健康的精子只消在“天网”上停留片刻，就会胜利大逃亡了。如果“天网”过密、过多，精子还能摆脱束缚去与卵子汇合孕育下一代吗？研究人员推断，这种精子被束缚在“天网”上的情况肯定会存在。由此，他们推测，人的不孕症问题很可能是由女性体内的中性粒细胞抛出的“天网”过密、过多导致的。,还有一种很难找到症结的疾病，今天看来，也和人体“天网”有关。这种病叫作先天性黏液稠厚症，它的特点是人体肺部的分泌物过于黏稠，很容易堵塞人的呼吸通道，使人断气而亡。奇怪的是，那些分泌物中总是有数量极大的DNA。长久以来，医学专家只知道这种疾病肯定和基因有关，但其中的疾病制造内幕总是弄不清楚。现在，他们才明白，这很可能是中性粒细胞在肺部抛出的“天网”过密、过多所导致。,