蚕豆根尖细胞微核实验.doc

1、蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名：马丽 同组者：李哲 指导教师：郝雪峰（太原师范学院 生物系 112 班）摘 要 微核（micronucleus,MCN）是真核生物细胞经各种理化因子作用后引起染色体畸变，在间期细胞中的一种表现形式。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形，游离于主核之外，大小应在主核1/31/20，染色与主核一样或稍浅。一般认为微核是由无着丝粒的染色体断片或落后染色体，在分裂末期不能进入主核，便形成了主核之外的核块。当子细胞进入下一次分裂间期时，它们便浓缩成主核之外的小核，即微核。 1Abstract Micronucleus (MCN, micronucleus) is eu

2、karyotic cells by various physical and chemical factors caused by chromosome aberration, and in a form of interphase cells. In interphase cells micronucleus assumes the circular or elliptic, free from the main nuclear, nuclear 1/3 1/20 size should be in the main, dyeing and the main nuclear as or sl

3、ightly shallow. Generally considered microkernel by acentric chromosome fragment or lagging chromosomes, in the late division could not enter the nucleus, formed the main nuclear nuclear block. When the cells into the next phase split between, they condense into main small nuclear nuclear, namely th

4、e microkernel. 1 关键词 蚕豆根尖 微核 洗衣粉 染色体畸变 千分率 Keyword Broad bean root tip Micronucleus Washing powder Chromosomal aberration Permillage 引 言 掌握蚕豆根尖细胞微核检测技术的一般方法。并利用蚕豆根尖细胞微核检测技术对洗衣粉的毒性状况给出客观的评价，同时表明蚕豆根尖细胞 MCN 对胁迫很敏感，蚕豆根尖微核技术可用于洗漱用品的安全监测。蚕豆是一种很好的细胞遗传学研究材料。它的染色体为六对相当大的染色体，而且根尖含有较多的分裂相细胞，非常适合显微观察。目前，蚕豆根尖微核技

5、术在环境致突变性检测/监测方面已经形成了一套完整的体系。它的可靠性和灵敏性较高，且本底较低，这对于一种致突变性检测方法是十分重要的。此外，它的检测物谱较广。目前多数学者认为，在镜检细胞微核时，应按下列标准计数微核：（1）凡主核大小 1/3 以下，与主核分离的小核；（2）小核的着色与主核相当或稍浅；（3）小核形态可为圆形，不规则等。 2Foreword Grasp the broad bean root tip cells micronucleus test technique of general method. And use the broad bean root tip cell mic

6、ronucleus test on the shampoos toxic condition objective evaluation is given, and shows broad bean root tip cells MCN is sensitive to stress, broad bean root tip micro nuclear technology can be used in the safety monitoring of toiletries.Bean is a kind of very good genetics research materials. Its s

7、ix for considerable chromosomes, and root tip contains more split phase cells, very suitable for microscopic observation. At present, the broad bean root tip micro nuclear technology in environment respectively detection/monitoring aspects have formed a set of complete system. Its reliability and hi

8、gh sensitivity and low background, it is very important for a detection method respectively. In addition, it widely test spectrum. At present most of scholars believe that, in the microscopic cell micronucleus, microkernel should according to the following standard count: (1) all the main nuclear si

9、ze under a third, separated from the main nuclear small nuclear; (2) nuclear quite a small nuclear staining with the Lord or slightly shallow; (3) small nuclear shape can be round, irregular, etc. 3 1. 材料与方法1.1 实验材料蚕豆种子、洗衣粉、显微镜、镊子、培养皿、剪刀、载玻片、盖玻片、烧杯、Carnoys固定液、盐酸酒精解离液、改良苯酚品红染液等。1.2 毒液配制选取所测洗衣粉，按平时所用比

10、例与水混合均匀。1.3 实验方法1.3.1 浸种 择饱满、均匀的 20 粒种子，洗净后用蒸馏水常规浸种 24h，此期至少换水 2 次；待种子充分吸胀后，移入干净的培养皿内培养。1.3.2 催芽种子吸胀后，保持湿度，在室温下催芽 2 天。1.3.3 被检测液处理根尖各取 10 粒，分别用蒸馏水（自来水）和毒液培养种子 1.5 天。1.3.4 根尖细胞恢复培养处理后的种子用蒸馏水（自来水）浸洗 3 次，每次 23 min；将处理液洗净后，置于干净培养皿恢复 2224h；同时均设蒸馏水处理为空白对照组。以上各步操作温度均在常温下进行。1.3.5 根尖细胞固定将恢复后的种子，从根尖顶端切下 1cm 左

11、右长的幼根，用卡诺氏液固定 1012 h。1.3.6 酸解用蒸馏水浸洗固定好的幼根 3 次，每次 5min，吸净蒸馏水，加入盐酸酒精解离液 60下酸解 68min，幼根软化即可。1.3.7 染色吸去盐酸，用蒸馏水浸没幼根 3 次，每次 12 分钟。最后浸于水中。制片前取出置载玻片上，截下 12mm 左右长的根尖，滴 1-2 滴改良苯酚品红染液染色 20min，之后方可压片观察。1.3.8 压片观察对各种不同处理的根尖分生组织进行常规压片，每个处理各取 3 个根尖压片。在高倍镜下观察压片根尖分生区细胞分散良好的区域，并统计不少于 1000 个细胞中的微核数，然后再统计算出每个根尖的 MCN。 3

12、2. 结果2.1 标准规定 4对于蚕豆微核实验中微核千分率的计算可采用以下公式：MCN=某测试样点（或对照组）观察到的 MCN 数某测试样点（或对照组）观察到的细胞数1000对于污染指数（PI）的计算可采用以下公式：PI=实验组 MSN总数对照组 MSN总数污染指数（PI）判断 5如果采用市售蚕豆种子，按规范操作标准实验条件（其对照本底为 10以下），其监测样品污染程度的划分可采用“污染指数（PI）”判断。根据全国生物技术监测规范蚕豆根尖微核技术规定的污染指数划分标准，采用污染指数（PI）值来划分受污染程度。此方法可避免因实验条件等因素带来的 MCN本底的波动，标准见表 1 。凡数值在上、下限

13、时定为上一级污染。表 1 污染指数 PI 值评价洗衣粉标准表2.2 结果在对照组和实验组中均可见到一定数量的微核，也发现少量有丝分裂期微核，各种染色体畸变等。根据镜检统计结果，对 3 个实验组玻片以及对照组（蒸馏水）共计 4 个样本的 MCN进行统计（表 2）。表 2 洗衣粉安全指数MCN总数 PI 污染指数对照组 1.98（1.28，1.33，3.37）一 4.71（3.94，4.22，5.97） 2.38 中污染二 5.45（4.81，4.95，6.59） 2.75 中污染三 5.11（4.46，4.89，5.98） 2.58 中污染结论：各样品 MCN差异不大，但都和对照组相比差异较显著

14、，表明洗衣粉存在一定致突变性，且对人体有危害，但不是很大。3. 讨论从以上的实验结果及分析可看到，洗衣粉使蚕豆根尖细胞产生微核。微核试验是一种以染色体断裂及纺缍丝损伤等为测试终点的植物微核监测方法，是监测致突变性污染的一种经济快速方法。随着工农业生产的迅速发展,新的化学物质和工业污染指数 PI 值 样品污染等级0 1.5 基本无污染1.5 2.0 轻污染2.0 3.5 中污染3.5 以上 重污染“三废”不断地进入人们的生活环境,它们中有许多可能对遗传物质产生损害并造成“致癌、致畸、致突变”等遗传毒理效应的环境致突变物,可对人类健康和生存构成严重危害. 6 通过实验表明，洗衣粉也具有一定的致癌性

15、。实验证明，我们的洗漱用品具有一定的毒性，作用于蚕豆根尖后引起染色体畸变，由此可推断对人体也可能致癌、致畸、致突变，提醒我们选择安全的洗漱用品，减少使用含有害化学物质的日常生活用品。4. 结语蚕豆根尖微核试验技术属于植物遗传检测系统,微核试验是利用环境污染因子诱变细胞染色体畸变产生微核而建立起来的一种技术,也是近年来环境生物监测领域的重要进展之一。 7 它作为一种环境致突变性的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。 85.参考文献1 陈光荣，金波，李明等.蚕豆根尖微核技术.见：环境监测技术规范第四册生物（水环境部分）。国家环保局，1986,7578.2 陈光荣、金波

16、、李明等.污染指数在微核技术监测水质污染中的应用.中国环境科学，1986，6（2）：6063.3 陈光荣、金波、李明等.蚕豆叶尖细胞威吓测定（MCNT）及其监测大气污染的研究.中国环境科学，1988，6（2）：38.4 陈光荣、金波、李明等.蚕豆细胞微核技术监测农业土壤污染的研究.环境科学，1988，13（2）：7477.5 王永兴等.应用蚕豆根尖细胞微核技术监测太湖水质的研究.中国环境科学，1997，17（3）：252.6 陈瑞娇、李均祥.韶关学院学报（自然科学），2006 年 09 期。7张江丽、王淑敏等。环境与健康杂志，2009 年 09 期。8藏宇、薛开先。癌变 畸变 突变，1999 年 03 期。学生设计性实验论文题目：蚕豆根尖细胞微核技术检测洗衣粉的毒性姓名 马丽 学号 2011131215专业 生物科学 班级 112 相关实验课程名称 细胞生物学实验指导教师 郝雪峰 实验学期 2012-2013 学年 二 学期