江苏省动物实验上岗培训.ppt

1、热烈欢迎参加实验动物从业人员上岗培训的各位老师！,考试形式：上机考试,时间为60分钟（到时间网络自动关机），共100道题，分为是非(400.5)题、单选题(401)和多选题(202)，85分为合格。注意：请务必带好个人身份证方可入场考试！模拟考试网址:www.sgks.org,一.基本概念,实验动物：指经人工饲养、繁育，对其携带的微生物及寄生虫实行控制、遗传背景明确或来源清楚，应用于科学研究、教学、生产和鉴定以及其它科学实验的动物。亦称狭义的实验动物实验用动物：泛指所有应用于科学实验的动物,包括实验动物、野生动物、经济动物和观赏动物。也称广义的实验动物.,实验动物科学诞生于20世纪50年代国际

2、实验动物科学协会的简称为ICLAS，其网址为中国实验动物信息网：我国实验动物质量管理法颁布于1997年，由科技部联合技术监督局等单位共同颁布。实验动物管理条例是1988年经国务院批准颁布的世界最大的实验大、小鼠商品化生产、销售公司：美国查士利华实验室1961年，ICLA与WHO合作，于1979年改名为ICLAS20世纪40年代，美、日、法等过相继成立了实验动物学会或类似组织,我国已建立啮齿类动物的种子中心（上海和北京）国家实验动物质量检测中心挂靠在中国医科院实验动物所GLP（良好实验室操作规范）是用于新药临床前安全性评价的法规实验动物管理条例规定，实验动物繁育和动物实验不能在同一区域。,实验动

3、物许可证的有效期为5年，生产许可证的申请必须种子来源可靠，有健全的质量管理制度，环境符合国家标准。许可证的发放向科技部门申请，由科技部门组织专家评审，合格后发放许可证。包括生产和使用许可证两种。国家种子中心、实验动物质量检测机构的主要任务（p82）近交系：连续20代或20代以上近亲交配所培育而成的品系。如BALB/C,C57BL/6J,DBA,C3H,A/He等（常以F加数字表示近交代数）。封闭群：以非近亲繁殖方式，不从外部引入新个体的前提下至少连续繁殖4代以上。引种数目不少于25对。如KM，SD, Wistar等,杂交群：不同品系或种群间杂交产生的后代近交系小鼠常选用10个染色体上的13个生

4、化位点作为纯度检测的方法，而大鼠一般选用9个位点；皮肤移植一般用同系异体移植同源突变系：两近交系除指明位点外其他基因完全相同重组近交系：两近交系杂交后再连续20代近交而成（以表示）同源导入近交系：通过杂交-互交或回交等方式将一基因导入到近交系中,遗传污染：管理疏忽，本品系与其他品系动物交配遗传漂变：饲养过程中可能发生的随机改变，多由于残留杂合基因的分离突变：基因组中某个核苷酸碱基的置换、缺失或插入引起等位基因的改变近交系数：表示近交程度普通动物：不携带规定的人畜共患病原和烈性传染病病原清洁动物：除普通动物应排除的病原外，不携带对动物危害大和对科研干扰大的病原,无特定病原体动物：除清洁动物应排除

5、的病原外，不携带潜在感染和条件致病、对科学实验干扰大的病原无菌动物：不可检出一切生命体普通级兔应排除兔出血症病毒、普通豚鼠应排除淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、普通猴应排除猴B病毒实验动物按遗传控制可分为：近交系、封闭群、杂交群和突变系实验动物按微生物控制可分为：普通动物、清洁动物、无特定病原体（SPF）和无菌动物,3R指的是：减少（Reduction)、替代(Replacement)、优化(Refinement).动物福利除了生理福利外，还包括心理福利、卫生福利、行为福利、环境福利普通级、清洁级和SPF级动物微生物和寄生虫的检测频率均为每三个月检测一次。无菌动物为每年至少检测一次.取样数量：群体

6、100，取样5只；群体大小为100-500,取样10;群体500,取样20只;无菌动物每个隔离器取样2只2000年6月，人类基因组计划完成。小鼠是继人之后第二个完成基因测序的哺乳动物。小鼠与人类功能基因的同源性高达90%以上，是最为理想的模式动物，并作为基因改造的材料,实验动物的环境与设施动物实验可用R=(A+B+C)D+E公式表示，其中R表示动物实验中实验动物的总反应； A表示动物种间的共同反应； B表示动物的品种品系特有反应； C表示动物的个体反应； D表示环境因素； E表示实验误差。（1959年由Russell和Bruch提出动物的表现型受周围环境的影响而出现不同的演出型）光照对动物的是

7、个强烈的刺激因素，起定时器的作用屏障设施内,粗效空气过滤器设置在取风口;中效过滤器设置在正压处;高效过滤器设置在系统末端,生物安全柜为活病原微生物的动物实验设施;动植物确实存在或潜在危害的,该实验需在感染性动物实验设施内进行普通环境饲养普通级动物;屏障环境饲养清洁级或SPF级动物;隔离环境饲养无菌动物实验动物环境指标中,只有氨气浓度是动态检测指标;屏障环境的空气洁净度指标为10000级国标中，生产型和使用型屏障系统大小鼠温度为20-26;相对湿度为40%-70%;换气次数为10-20次/h;气流速度为0.1-0.2m/s;压强梯度为20-50Pa国标中，使用型屏障系统工作照度为150-300l

8、x;动物照度为15-20lx,实验动物环境检测标准规定,普通犬兔繁育生产设施内(生产型)温度为16-28;湿度为40-70%;换气次数为8-10次/h;气流速度0.1-0.2m/s;工作照度为150-300lx;动物照度100-200lx; (使用型)温度为16-26;湿度为40-70%;换气次数为8-10次/h;气流速度0.1-0.2m/s;工作照度为150-300lx;动物照度100-200lx笼器具产品抽检数量,笼箱及引水瓶为10-15只/次/批;网盖和笼架为3-5只/次/批动物适宜的温度为21-27 ，（相对）湿度为40-70%国标中规定，实验动物室氨浓度应小于14mg/m3；噪音低于

9、60db;,实验动物设施的空调系统按空气处理设备的设置不同一般分为集中式、局部式和半集中式。集中式即集中冷源，并将全部空气处理设备集中在同一机房内，处理过空气经风道、风口送至屏障设施内。空气乱流利用稀释作用是室内产生的灰尘均匀扩散而被“冲淡”，一般采用上送下回的形式，使气流自上而下与尘埃重力沉降方向一致。空气乱流是流向单一，并具有一定的、均匀的断面速度的气流组织形式。,实验动物饲料与营养,豚鼠和猕猴体内不能合成维生素C,须从饲料中获得大小鼠、兔目前常用的是颗粒饲料；贮存的颗粒饲料的含水率应低于11%饲料灭菌的最佳方式是辐照必须氨基酸只能从饲料中提供，而非必须氨基酸体内能合成，无须从饲料中供给。

10、碳水化合物是体内能量的主要来源，其中粗纤维可促进胃肠蠕动；无氮浸出物可提供热能并可转化成脂肪,饲料中脂肪有真脂肪（由脂肪酸和甘油组成）和类脂肪（由脂肪酸和甘油及其他含氮物质组成）饲料抽样数量为0.5Kg/次/批维生素A维持上皮的形态与功能；维生素D参与钙磷调节；维生素E与生殖泌乳有关大小鼠饲料水分10%；豚鼠维持料蛋白17%，繁殖料蛋白20%；兔维持饲料粗蛋白 14%，繁殖料粗蛋白 17%；犬维持饲料粗蛋白 20%，繁殖料粗蛋白 24%,实验动物的生物学特性一.小鼠属于啮齿目,初生为红色,12-13天睁眼,妊娠期19-21天，哺乳期为20-22天,雌性有5对乳头,成年体重为18-40克,一般生

11、育期为1年，寿命为1-2年.体温为36.5 ,KM鼠每胎产8-15只,维生素A过量可致繁殖紊乱二.大鼠啮齿目,新生为红色,约5-6克; 8-10天长牙;14-17天睁眼;妊娠期哺乳期均为21天; 为常年多发情动物;成年体重为250-450克;寿命为2-3年;封闭群平均产仔数为8只;尾是散热器官;无胆囊;体温37.5。近交系大鼠：ACI,F344,SHR,BN,AGUS;封闭群：Long-Evans, Brown-Norway(饲养类），SD, Wistar,三.豚鼠:啮齿目,草食动物,妊娠期为68天,哺乳期21天,刚出生就有视力,初生体重75-100克,有1对乳头,每胎产3-4只,一般寿命为6

12、年;体内缺少合成维生素C的酶(猴),免疫学研究首选动物,是最早获得无菌动物的实验动物。无尾巴四.地鼠啮齿目, 有冬眠和假妊娠现象,妊娠期16天，是哺乳动物中妊娠期最短的动物;哺乳期21天;有颊囊,可贮存食物;为全年多发情动物;寿命2-2.5年。中国地鼠无胆囊, 有5对乳腺;金黄地鼠有乳腺6-7对。,五.兔兔形目；有圆小囊；是眼科研究首选动物；妊娠期32天,哺乳期42天;为刺激性排卵动物(猫);有季节性换毛现象;有乳腺4对;其胸腔构造与其他动物不同;有食粪癖;也有假妊娠现象;对缺钙耐受力强;寿命8年左右;体温为39.2六.犬食肉目,红绿色盲,几乎没汗腺,春秋季单发情动物,妊娠期60天,哺乳期60

13、天,性周期180天,对脂肪耐受强.对呕吐敏感,成年正常体温是38，易建立条件反射,七.猫除夏季外均可发情，属季节性多发情动物;善攀登和跳跃;妊娠期63天，哺乳期60天;有4对乳头;可根据光线的强弱灵敏的调节瞳孔;喜孤独自由的生活;饲料中重点补充维生素.八.猴有颊囊；有月经周期，与人的生殖生理非常接近；妊娠期165天左右，哺乳期6个月以上；对呕吐反应灵敏；主要组织相容性抗原（RhLA)与人的HLA相似；能用手操纵工具;是脊髓灰质炎疫苗研究鉴定的动物,八.小型猪偶蹄目;常年多发情;妊娠期114,哺乳期1个月;是皮肤烧伤实验研究的首选动物;平均体温为38九.沙鼠 啮齿目,大小介于大、小鼠之间，成年重

14、78克；常年多发情；性成熟10-12月；平均寿命2-4年;有自发性癫痫病；可建立脑缺血模型;应激时肾上腺释放糖皮质激素和黄体酮,牛羊属于偶蹄目，草食性多胃动物马属于奇蹄目.鼠兔与家兔体形相似,是草食动物;有换毛现象;,实验方法,动物标记中染色法最简单、适用于小动物短期实验；常用染色液：苦味酸、硝酸银、品红；染色编号方法：先左后右，先上后下，单一颜色可标记1-10号；烙印常用溶于酒精的黑墨染色；还有耳缘剪孔法局部麻醉常用浸润麻醉大小鼠豚鼠肌肉注射部位：大腿外侧面腹腔注射常选择在腹白线两侧大小鼠尿液采集适宜用代谢笼，采集未污染尿液则应采用导尿法；大小鼠大量采血常采用股动脉采血,犬、猫的皮下注射一般

15、在大腿外侧，静脉注射不超过10ml小鼠（20g）一般灌胃不超过0.8ml、腹腔注射不超过1.0ml、静脉注射不超过0.8ml大鼠一般灌胃不超过5ml、腹腔注射不超过4ml、静脉注射不超过4ml静脉注射 兔:耳缘静脉，最大容量10ml;猴:皮下浅层静脉(小隐、股、头静脉），最大容量20ml；犬最大容量100ml。肌肉注射最大给药量 猴：3ml；犬：4ml。兔少量多次采血一般为耳缘静脉采血,动物实验中，去除被毛的方法有拔毛法、剪毛法、剃毛法和脱毛法；小动物一般采用剪毛法、大动物采用剃毛法吸入麻醉常用乙醚、氯仿；腹腔和静脉麻醉一般持续时间长，过程平稳，常用巴比妥类、氯氨酮、水合氯醛、氨基甲酸等；全身

16、麻醉时一般禁食不少于8小时化学药物致死最好采用CO2、KCl；家兔处死常用空气栓塞法,动物模型按产生原因分为：自发性模型：应用价值高，与人类相应疾病相似程度高，但来源困难，种类有限诱发性模型：来源多，条件易控制、但相似程度稍差；诱发性肿瘤模型分为原位和异位诱发抗疾病模型：特定疾病不在某动物身上发生生物医学模型：某些动物特殊的生理结构如兔的胸腔结构按中医分类：阴虚、阳虚、气虚、血虚、肾虚、厥脱症,裸鼠为先天性无胸腺，常用于人体肿瘤移植研究CBA/CIH为先天性B淋巴细胞功能缺陷Beige小鼠为先天性NK细胞功能缺陷SHR为自发性高血压大鼠，适合筛选抗高血压药物,实验动物选择与应用一般幼龄动物对实

17、验因素较为敏感，慢性实验因周期长而通常选用幼龄动物。一般实验都选用成年动物清洁动物是国内科研标准动物，而SPF动物是国际公认的标准动物一般来说，淡水中生活的动物尿液是低渗的，海水中生活的动物尿液是等渗的，陆地上生活的动物尿液是高渗的，特别是沙漠中生活的动物，这种倾向性更明显,猪：皮肤结构与人相似、适合做烧伤实验、人烧伤后的敷盖物以及皮肤病的研究；冠状动脉循环与人类似，食用高胆固醇食物易出现动脉粥样硬化典型病灶猫：刺激性排卵；适合做神经节传导阻滞影响的药物实验及观察药物对循环系统的作用等实验,犬 ：是红绿色盲，不能以红绿作为条件刺激物来进行条件反射实验；有呕吐反射；长期毒性实验中大动物实验常选；

18、易于调教，短期训练即可较好配合实验，适合慢性实验；适宜实验外科学研究；可用压迫膀胱法集尿豚鼠：不能合成维生素C；对人型结核杆菌高度易感，是结核病研究首选动物；也是镇咳药筛选试验的首选动物；气管平滑肌对致痉剂和药物最敏感，常作为支气管扩张药物研究选用动物；,家兔：减压神经独立分支，适合观察减压神经对心脏影响试验；适宜做发热和检查致热源研究；刺激性排卵；常用于制备抗血清；家兔的胸腔中央有一层很薄的纵膈膜将胸腔分为左右两部，互不相通，两肺被肋胸膜隔开，心脏又有心包胸膜隔开；也是心血管疾病研究的较好模型；不宜做利尿或抗利尿药物研究；没呕吐反射；食用高胆固醇高脂肪饲料后易形成动脉粥样硬化及高脂血症模型,

19、大鼠：无胆囊，适合做胆管插管收集胆汁，进行消化功能的研究；常选做长期毒性实验地鼠：中国地鼠易产生真性糖尿病；小鼠：适合于各类唇裂、腭裂研究青蛙和蟾蜍：反射弧实验,遗传工程动物模型,获得遗传工程的基本技术手段:显微注射转基因、基因定位突变技术、基因化学诱变技术。其中显微注射法是将外源目的基因注射到受精卵雄原核内模式生物：果蝇、线虫、小鼠、斑马鱼、酵母，其中小鼠是研究人类基因功能的理想动物基因敲除动物中研究最多最深入的是基因敲除小鼠,小鼠是继人之后第二个完成基因组测序的动物,实验动物疾病,病毒：自然界最小微生物；在PH为7时较稳定；对干燥的抵抗力与病毒的种类及干燥的方法有关；多数能保存于50%的甘

20、油中,确诊病毒可通过检查包涵体等方法来确定。细菌：有球状、杆状和螺旋状；有细胞壁；水是主要成分，固形物主要由C、H、O、N组成，占总重量的75-80%；比重一般大于1；PH值可影响其代谢活动；高温是有效的灭菌方法,实验动物的传染病发展过程分为：潜伏期、前驱期、明显期（发病期）和转归期传染源、传播途径和易感动物，称为传染锁链各类动物应分室饲养，以防交叉感染饲养和兽医人员应每年进行健康检查实验动物的隔离措施主要用于新引入的动物隔离是为了控制传染源，隔离场所应离开动物繁殖区检疫的目的是检查有无潜在性疾病的存在,新引进的动物应有供应商的的实验动物质量合格证书新引进的灵长类动物要特别防止B型疱疹病毒新引

21、进的犬必须有犬瘟热、传染性肝炎、犬细小病毒等免疫证明灭菌方法有热灭菌法、冷灭菌法和Co60辐照灭菌法消毒不能杀死细菌的芽孢，比灭菌的范围窄湿热高压灭菌：121，15min干热高压灭菌：160 ，45min预真空高压灭菌： 121，3min,低压蒸汽加甲醛灭菌法：70-80，2h 熏蒸消毒法一般为：15ml/m3福尔马林加7.5克高锰酸钾,熏蒸时室温应保持25 ,熏蒸后须静置24-48h,后在通风2-3天80热消毒药水清洗是良好的消毒方法实验动物饲养或实验室进行喷雾消毒后关闭门窗,保持2-3h;门窗、墙壁等用中性洗涤液洗刷，必要时可用2%的热烧碱水洗涤，在高压水冲洗,鼠痘：又称脱脚病，可经皮肤伤

22、口浸入机体，小鼠感染后肝、脾明显肿大，康复后也会通过粪便长期排毒，从而污染环境能够使病毒广泛传播。淋巴细胞性脉络丛脑膜炎：只有持续感染 的小鼠和急性感染的金黄地鼠才会传播病毒；感染该病毒的小鼠，大脑型最为表现为后肢强直性伸展；小鼠感染并康复后终生含高滴度的病毒，可经唾液、鼻分泌物及尿液向外排毒，同时该小鼠可成为无症状的带毒者，并通过子宫和乳汁传给后代，其后代可成为终生带毒者；人感染主要表现为流感症状和脑膜炎,仙台病毒：动物感染后肺部病变明显，鼠肺呈杨梅色，易与浸润性肺癌相混淆；动物体液免疫和细胞免疫功能普遍下降，妊娠大鼠会出现胚胎死亡；诊断主要通过免疫学方法，可采用过滤帽笼盒及剖宫产方法使动物

23、免受感染流行性出血热：自然宿主为小型啮齿类动物，污染尘埃飞沫形成气溶胶吸入感染是其最主要传播途径；兔病毒性出血热在自然条件下空气传播是主要传播方式，其主要预防方式为定期注射组织灭活疫苗,肝炎病毒：鼠肝炎多数呈亚临床或隐形感染，可改变各种免疫参数，ELISA及免疫荧光法可作为特异性诊断；症状可见尿色变深等；嗜神经型常引起中枢神经系统坏死；犬病毒性肝炎传染方式很多，但不能通过呼吸道传播犬瘟热：可通过 消化道、呼吸道传播；主要表现双相热型，即先升高，持续两天后降至正常维持2-3天后再升高；我国广泛使用的疫苗是鸡胚细胞培养弱毒疫苗,犬细小病毒：表现为急性出血性肠炎和非化脓性心肌炎，3-4周龄仔犬多呈急

24、性心肌炎症状，病死率高达80-100%；主要通过直接接触或污染饲料由消化道传播；肠炎型感染后出现腹泻，粪便呈灰黄色液体，最后因心衰和酸中毒而死狂犬病：流行呈连锁性特征，病犬终因局部或全身麻痹而死；犬一旦发病即扑杀，并对周围环境彻底消毒B病毒：恒河猴是自然宿主，幼猴感染后可能由于母源抗体免疫而呈现亚临床症状；可引起人致死性脑感染,沙门氏菌：人畜共患病，实验动物中常见感染为鼠伤寒和肠炎沙门氏菌病；患病动物和带菌者是主要传染源布氏杆菌：可致动物流产多杀性巴氏杆菌：可使动物发生出血性败血症支原体:幼龄动物易感，常定居于动物呼吸道和生殖道；环境中氨浓度过高可促进其生长，继而促进肺炎和中耳炎的发生志贺氏菌：实验动物中主要危害猕猴，对人可引起细菌性痢疾,真菌生长最适温度为37，实验动物皮肤真菌感染的传播方式主要为接触感染，一旦感染后，实验动物须全群淘汰，环境彻底消毒寄生虫成虫寄生的宿主为终末宿主实验动物感染弓形虫后常出现流产或死胎现象兔球虫病主要以肠道传播，3月龄的家兔最易感，可感染人的球虫叫等孢子球虫血液寄生虫主要通过节肢动物作为媒介传播寄生虫感染动物后，常引起血液中嗜酸性粒细胞增多。,