生化试剂参数.ppt

1、生化试剂各机型参数确定,目录,生化试剂主要参数及意义生化试剂其他参数及意义各机型生化分析仪概括介绍各机型参数特点,生化试剂主要参数及意义,生化试剂说明书中各参数（例：脂肪酶）,项目名称方法类型反应方向测定波长测定温度样本体积试剂量分析时间校正方法,生化试剂主要参数及意义,项目名称(test name)：常以项目的英文缩写来设置。方法类型(assay/Method )（适用于仪器的方法）：方法类型主要分为：终点法和动力学法终点法一点终点法：样本与试剂混匀一定时间后读取反应终点吸光度，如血糖氧化酶法、总蛋白双缩脲法、白蛋白溴甲酚绿法等。两点终点法：（又称固定时间法）样本与试剂混匀一定时间后先读取吸

2、光度A1，延迟一定时间后读取吸光度A2，计算吸光度差值与标准比较求得结果。如肌酐苦味酸法等。可消除内源性物质干扰。,生化试剂主要参数及意义,动力学法一级动力学法：（两点速率法）样本与试剂反应不断消耗反应物，反应速度不断减小，吸光度变化不断减小，在特定时间段内进行监测，该时间段内吸光度升高或降低与样本浓度成正比，如同型半胱氨酸、总胆汁酸等。零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测）样本与试剂反应，反应物可匀速生成某个产物，如NADH，在特定波长下吸光度均匀的增大或减小，增大或减小的速度与样本浓度呈正比。如碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶等。,生化试剂主要参数及意义,一级动力学法：（两点速率法）,生化试剂

3、主要参数及意义,零级动力学法：（连续监测法，用于酶活性监测）,生化试剂主要参数及意义,反应方向(response direction)正向反应（UP/INC/+）：吸光度增加。负向反应（DOWN/DEC/-）：吸光度下降。测定温度30、37、25样本体积（sample volum）一般为2-35l ，以0.1l步进。试剂量（regengt volum）一般为20-300l ，以1l步进。不同机型生化分析仪的样本量及试剂量限制不同，样本与试剂可根据比例进行增大或减少。,生化试剂主要参数及意义,测定波长（wavelength）：不同生化分析仪具备不同的波长。可选择单波长或双波长。主波长（main

4、wavelength/primary wavelength ）根据待测物质在特定波长下具有最大吸收峰来选择主波长。副波长（次波长sub wavelength/second wavelength ）可不选择设定。副波长可消除样本溶血，血清浑浊的干扰影响，副波长与主波长越接近越好。检测时吸光度值为主波长的吸光度减去副波长的吸光度。,生化试剂主要参数及意义,分析时间：孵育时间（incubate time）一点终点法的孵育时间是指样本与试剂开始到反应终点的时间；两点终点法是指第一个吸光度反应点开始到第二个吸光度点为止时间。一般为5min。延迟时间（delay time）加入第二反应试剂后到第一个吸光度

5、监测点开始的时间。即样本与反应试剂（第二试剂）混匀开始至第一个吸光度选择点之间的时间。单试剂一般设置为30s，双底物反应或酶类反应一般设置为1-3min。连续监测时间（ continuous monitoring time）在延迟时间后的零级反应开始，监测至少4个点（3个吸光度变化值），一般为1-2min。,生化试剂主要参数及意义,校正方法（Calibration Type）：可采用标准液（校准液）定标方式或理论K值方式获取标准曲线。线性定标（ Linear/AB）：两点定标，标准曲线呈直线。非线性定标（Spline/4AB/polygonal）：多点定标，标准曲线近似于直线。理论K值 （Fa

6、ctor/MB）：多用于连续监测法测定酶活时，无需定标曲线，根据摩尔消光系数计算得到结果。 106 VF= vL,生化试剂主要参数及意义,V：反应体系总体积（ml）；v：样本体积（ml）：摩尔消光系数（cm2/mol）L：比色杯光径（cm）；106：将mol换算为mol,生化试剂其他参数及意义,试剂吸光度上限、下限/试剂吸光度界限(OD Limt) 底物耗尽限额(substrate exhaust limit)试剂吸光度线性范围(Linearity） 试剂线性范围（Technical Limit）前区检查限(Prozone Check Limt) 方程式（Fomular）小数位（Decimal

7、 Places）双份界限（Duplicate Limit）敏感性界限(Sensitivity Limit)第一标准吸光度界限(S1 Abs.limt)反应过程吸光度界限(Absorbance Limit),生化试剂其他参数及意义,试剂吸光度上限、下限/试剂吸光度界限(OD Limt) 常用规定波长及光径下的吸光度值表示。终点法常在0点读数，连续监测法常以反应监测起始点来判读该吸光度值。可用于判断试剂质量。检测试剂空白时，若超过此参数的限值，则提示试剂可能失效。,底物耗尽限额(substrate exhaust limit)连续监测法或两点终点法时设置。根据吸光度上升或下降设定MAX-OD/MI

8、N-OD，吸光度超过设定界限时，代表样品酶活非常高，底物消耗太快，所测得结果不能代表真实酶活力。,生化试剂其他参数及意义,试剂吸光度范围(Linearity） 线性度不能超过设定界限，超限时说明吸光度的变化量之间已经不成线性或说明底物不足，检测结果会变低。试剂线性范围（Dynamic Range/Technical Limit）与试剂/样本比值有关，超出范围的样本应增加样本量重测或样本稀释后重测。,生化试剂其他参数及意义,方程式（Fomular）Y=aX+ba为截距，b为斜率。用于校正检测结果，一般a为1.000，b为0.000，,小数位（Decimal Places）主要根据项目参考范围的小

9、数位进行设定，一般0-2位。,前区检查限(Prozone Check Limt) 主要用于免疫比浊法项目，可根据项目要求选YES或NO，比较终点法后两个读数点的差别，如果后一点比前一点的吸光度低，表示已经有抗原过剩，样本应稀释后重测,生化试剂其他参数及意义,双份界限（Duplicate Limit）也称离散性，是同一个标准液两次测定吸光度的差值，表示试剂和仪器的重复性,此值越小表示试剂和仪器的精密度越高,敏感性界限(Sensitivity Limit) 可以检测的最低吸光度值，也就是检测最低浓度的可靠性,第一标准吸光度界限(S1 Abs.limt)通常指零浓度标准品的吸光度界限，在终点法和速率

10、法中计算方式不同,生化试剂其他参数及意义,反应过程吸光度界限(Absorbance Limit)在动力学反应中,由于高浓度（活性）样本使底物耗尽，所测吸光度已不可靠,使高浓度的样本测定值低很多,甚至为负值。为能正确反映测定结果，需设置底物耗尽限(某一特定吸光度)，是在反应时间内反应没有发生底物耗尽时所能达到的最小(反应曲线向下)或最大(反应曲线向上)的吸光度值 ，该吸光度即为吸光度界限。可用于确保高浓度（活性）样本结果的准确性。,淡蓝色字体标注参数设定时一般为机器默认。,各机型生化分析仪概括介绍,AU400,AU640,AU2700,AU480,各机型生化分析仪概括介绍,AU系列,各机型生化分

11、析仪概括介绍,各机型生化分析仪概括介绍,日立系列,各机型生化分析仪概括介绍,Beckman CX5,Beckman LX20,各机型生化分析仪概括介绍,Beckmam系列,各机型参数特点,不同机型分析方法 表示方法 常用选择项 COBAS Asaay Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point end HITACHI Assay code Rate A/2Pont rate/1 Ponit/2 Point endOLYMPUS Method RATE/FIXED/ENDBECKMAN Reaction type RATE1/2/END1/2ABBOTT Reaction

12、 defintion Rate /Flex Rate/End,各机型参数特点,不同机型反应方向 表示方法 可选择项 COBAS INC/DEC INC/DECHITACHI INC/DEC INC/DECOLYMPUS Reaction Slope +/-BECKMAN Reaction Direction Positive/NegativeABBOTT Reaction Mode Up/Down,各机型参数特点,不同机型测定波长 主波长 次波长COBAS Wave(Main/ Sub)HITACHI Wave(Main/ Sub)OLYMPUS Wavelength pri Waveleng

13、th secBECKMAN Primary Wavelength Secondary WavelengthABBOTT Wavelength Primary Wavelenght Secondary 不同机型所具波长数目不同，一般波长分布为 从紫外线到红外线340-800nm。参数设定时可选择与项目要求相近的波长。,各机型参数特点,不同机型反应时间：仪器的一个分析周期中，试剂和样本混合最后一点测定读数时间 常见仪器可以选择的时间COBAS P800 :110、15、22分钟 C501: 310分钟HITACHI ：3、5、8、10、15、22分钟OLYMPUS固定时间： 8.3分钟ABBOTT

14、固定时间：9.6 分钟BECKMAN可达时间：975秒,各机型参数特点,不同机型试剂加入相应时间(分钟) HITACHI R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) P800 R1 R2(1.5) R3(5) R4(9) C501 R1 R2(1.5) R3(5) OLYMPUS R1 R2(3.3) ABBOTT R1 R2(5.1),各机型参数特点,不同机型读点间隔时间及最大读点数 读点间隔(秒) 最大读点数 P800 18 34 C501 8 70 HITACHI 18 35/68 OLYMPUS 18 27/14 ABBOTT 17 33 BECKMAN 非连续性 975秒,各机型生化分析仪概括介绍,各机型试剂死腔量,谢谢！,