三种致病弧菌对大黄鱼血液生理生化的影响【开题报告+文献综述+毕业设计】.Doc

1、1本科毕业论文系列开题报告水产养殖三种致病弧菌对大黄鱼血液生理生化的影响一、选题的背景与意义大黄鱼（PSEUDOSCIAENACROCEA）隶属于石首鱼科，为我国特有的海洋鱼类，广泛分布于黄海南部至南海北部海域，现已成为我国养殖量最大的海水鱼类。但是随着大黄鱼养殖业的蓬勃发展，各种病虫害的发生也越来越频繁。近年来浙江、福建等各省网箱养殖的大黄鱼经常发生一种皮肤溃烂病。患病大黄鱼前期症状不明显；中后期主要症状为鱼体表脱鳞、溃疡，吻部充血，有的鱼吻部断裂，烂鳍、烂尾。解剖发现后可见肝脏肿大、有块状斑、略带土黄色；肾肿；肠空，无食物，有少量液体。发病流行时间主要为610月份，78月份为高峰期，发病水

2、温在2228之间，一般死亡率为3040，最高可达80以上。大黄鱼皮肤溃疡病的发生很大程度上制约了大黄鱼养殖业的健康发展，并给养殖户造成了很大的经济损失。许多学者已对网箱养殖大黄鱼溃疡病的病原菌进行了分离鉴定等研究，结果表明引起该病的病原菌主要是溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌及费氏弧菌等。鱼类作为低等脊椎动物，免疫体系虽包括非特异性免疫和特异性免疫，但抗体免疫和特异性细胞免疫远没有高等脊椎动物的复杂，特别在感染各种病原体初期，抗体尚未形成更多地是依赖于先天性的非特异免疫。目前在大黄鱼养殖生产中，细菌性疾病的主要控制方法仍然以抗生素和化学药物使用为主。这些药物虽然具有一定的预防和治疗作用，但是存

3、在着药物残留、产生细菌耐药性、破坏机体功能、破坏微生物菌群平衡等严重的负面影响。在水产品的安全问题日益引起社会关注的今天，如何进行养殖疾病的无公害防治是摆在养殖业者和相关科研人员面前一个急需解决的问题。在药物防治的替代措施中，使用免疫增强剂和疫苗是很有潜力的无公害防治方法。因此，从免疫学角度进行水产养殖病害防治研究，通过提高鱼体非特异性免疫机能从而提高其抗病能力，减少疾病的发生,已成为2水产动物疾病预防与控制研究领域的热点。现阶段关于大黄鱼免疫功能的基础研究较薄弱，而非特异性免疫是鱼类抵御外来病原微生物入侵的第一道防线。因此研究感染病原菌对大黄鱼非特异性免疫功能的影响无论从理论上还是对鱼类的免

4、疫保护均具有重要意义，且为将来各类免疫增强剂的筛选以提高大黄鱼的自身免疫抗病力奠定了基础。有关大黄鱼溃疡病非特异性免疫功能的影响研究很少，仅有的报道也是针对一种病原菌的感染后分析，尚未见有关引起该病症的不同病原菌之间的毒力差异及对大黄鱼免疫功能影响的差异性比较研究。本实验通过人工感染引起大黄鱼溃疡病的多种弧菌后，测定大黄鱼多项非特异性免疫指标的变化，并进行比较研究，对丰富大黄鱼免疫防御机制的理论基础和免疫防治具有重要意义。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题基本内容1人工感染三种致病弧菌对大黄鱼的血液生理变化影响的研究（包括红、白细胞计数、白细胞分类计数及NBT阳性细胞计数）2人工感染三种致病

5、弧菌对大黄鱼的血液生化指标变化影响的研究3人工感染三种致病弧菌对大黄鱼的血淋巴细胞吞噬能力影响研究拟解决的主要问题1大黄鱼非特异性免疫机能指标的确定。2各免疫指标之间相互关系的探索。三、研究的方法与技术路线（一）研究方法以腹腔分别注射副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌和灭菌生理盐水，0D，1D，2D，4D，7D，10D，13D，16D，20D后从4组各取6尾大黄鱼，尾静脉取血后，按以下方法进行相关指标测定。1三种致病弧菌对大黄鱼的血液生理变化影响的研究（包括红、白细胞计数、白细胞分类计数及NBT阳性细胞计数）参考赵维信1992的方法进行红细胞和白细胞计数，参考王军等2001的方法进行白细胞分类计

6、数，参考ANDERSON等1992NBT阳性细胞计数。2三种致病弧菌对大黄鱼的血液生化指标变化影响的研究4静置过夜取血清在奥林巴斯OLINPASAV1000生化自动分析仪上完成各项生化指标的测3定。3三种致病弧菌对大黄鱼的血淋巴细胞吞噬能力影响研究参考王军等2001的方法进行大黄鱼吞噬细胞吞噬功能的测定，分别计算吞噬百分比和吞噬指数。4数据处理每项指标取三次平行测试取平均值。采用ONEWAYANOVA分析和独立性T检验的方法进行数据分析处理。（二）技术路线四、研究的总体安排与进度2010年3月2010年6月1实验前的准备工作，文献资料查阅，开题报告和论文综述；2撰写试验计划，仪器、药品的准备和

7、各种实验材料的准备，熟悉基本的实验操作。2010年6月2011年2月1各项试验研究阶段；2翻译外文文献。2011年2月2011年4月1补充相关数据，整理试验结果；2撰写论文初稿；3论文定稿，答辩。五、主要参考文献1金珊,王国良,赵青松,等海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的流行病学研究J水产科三种致病弧菌后对大黄鱼血液生理生化指标的影响人工感染副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈维氏弧菌，设立对照组查阅文献、设计实验；大黄鱼三种致病弧菌的选定、非特异性免疫指标的选定血液生理指标研究（红细胞、白细胞、白细胞分类、NBT阳性细胞计数）血液生化指标研究血淋巴细胞吞噬能力的研究4学,2005,24117192林克冰,周宸,

8、刘家富,等海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的病原菌J台湾海峡,1999,18303423473王军,鄢庆枇,苏永全,等免疫添加物对大黄鱼血液白细胞数量及其吞噬功能的影响J海洋科学,2001,25944464肖克宇,邓时铭,向建国,等水产动物免疫与应用M北京科学出版社,20071391905鄢庆枇,张俊杰,邹文政,等人工感染溶藻弧菌对大黄鱼免疫功能的影响J水产学报,2007,3122512566吴志鹏,王三英三联疫苗对大黄鱼常见细菌性疾病免疫保护的实验研究J厦门大学学报自然科学版,2004,4311151187赵维信鱼类生理学M北京高等教育出版社,19922122158ANDERSONDP,MORITO

9、MOT,GROOTHRNEUTROPHIL,GLASSADHERENT,NITROBLUETETRAZOLIUMASSAYGIVESEARLYINDICATIONOFIMMUNIZATIONEFFECTIVENESSINRAINBOWTROUTJVETIMMUNOLIMMUNOPATHOL,1992,304194299BENLIACK,YAVUZCANHYBLOODPARAMETERSINNILETILAPIAOREOCHROMISNILOTICUSLSPONTANEOUSLYINFECTEDWITHEDWARDSIELLATARDAJAQUACULTRES,2004,351388139010

10、MACKINTOSHJA,VEALDA,BEATTIEAJ,ETALISOLATIONFROMANANTMYRMECIAGULOSAOFTWOINDUCIBLEOGLYCOSYLATEDPROLINERICHANTIBACTERIALPEPTIDESJJBIOLCHEM,1998,27311613961435毕业论文文献综述水产养殖大黄鱼溃疡病及其免疫研究概况摘要近年来浙江、福建等各省网箱养殖的大黄鱼经常发生一种皮肤溃烂病，在很大程度上制约了大黄鱼养殖业的健康发展，并给养殖户造成了很大的经济损失。本文针对大黄鱼溃疡病的病症、流行、病原及抗感染免疫等方面进行文献综述，反映出从大黄鱼免疫学的角度进

11、行水产养殖病害防治研究，已成为水产动物疾病预防与控制研究领域的热点，将为大黄鱼溃疡病的防控及免疫增强剂筛选提供理论基础和实验依据。关键词大黄鱼；溃疡病；非特异性免疫1引言大黄鱼（PSEUDOSCIAENACROCEA）隶属于硬骨鱼纲、鲈形目、石首鱼科、黄鱼属，俗称大黄花鱼、大鲜，广泛分布于黄海南部至南海北部海域，为我国特有的海水鱼类。因其肉质鲜美、营养丰富而备受人们的青睐。自80年代大黄鱼人工育苗技术突破之后，大黄鱼的养殖规模迅速扩大，大黄鱼的人工养殖已成为继鲈鱼、石斑鱼、鲷科鱼类之后的又一新型海水养殖产业。但是随着大黄鱼养殖业的蓬勃发展，各种病虫害的发生愈加频繁。2疾病流行与危害近年来浙江、

12、福建等各省网箱养殖的大黄鱼经常发生一种皮肤溃烂病。患病大黄鱼前期症状不明显；中后期主要症状为鱼体表脱鳞、溃疡，吻部充血，有的鱼吻部断裂，烂鳍、烂尾。解剖后可见肝脏肿大、有块状斑、略带土黄色；肾肿；肠空，无食物，有少量液体。发病流行时间主要为610月份，78月份为高峰期，发病水温在2228之间，一般死亡率为3040，最高可达80以上。大黄鱼皮肤溃疡病的发生在很大程度上制约了大黄鱼养殖业的健康发展，并给养殖户造成了很大的经济损失。3病原研究网箱养殖大黄鱼的疾病研究于二十世纪末广泛开展起来，许多学者已将大黄鱼溃疡病的病原进行了分离鉴定，研究显示细菌、病毒和寄生虫都会引起该病，且以细菌为主。通过对典型

13、患病大黄鱼病鱼体表和内脏器官分离菌的回归感染试验、形态鉴定、生理生化特性检测等细菌学方法，已鉴定出的大黄鱼细菌性病原有溶藻弧菌（VIBRIOALGINOLYTICUS）、副溶血弧菌（VPARAHAEMOLYTICUS）、哈氏弧菌（VHARVEYI）、鳗弧菌（VANGUILLARUM）、创伤弧6菌（VVULNIFICUS）、河流弧菌（VFLUVIALIS）、腐败假单胞菌（PSEUDOMONASPUTREFACIENS）、嗜水气单胞菌（AEROMONASHYDROPHILA）、肠型斑点气单胞菌（APUNCTATAFINTESTINALIS）、点状气单胞菌（APUNCTATA）、柱状屈挠杆菌（FLE

14、XIBACTERCOLUMNARIS）和爱德华氏菌（EDWARDSIELLA）等1。林克冰等2和鄢庆枇等3分别对宁德市网箱养殖大黄鱼的弧菌病进行了调查，金珊等4和王军等5分别对发生在浙江和闽南地区的大黄鱼弧菌病进行了调查，结果表明在大黄鱼的细菌性疾病中尤以溶藻弧菌、副溶血弧菌等引起的溃疡病最为严重，其发病率和死亡率高，给大黄鱼养殖业带来严重的经济损失；大黄鱼寄生虫病主要有贝尼登虫病、库道虫病、隐核虫病等678；关于大黄鱼病毒性疾病方面，已有研究表明在患病大黄鱼体内至少检测到两种可疑病毒，而且都存在于胞浆中9。陈新华等10也在被感染大黄鱼的脾、肾等组织观察到六边形彩虹病毒颗粒，并通过感染试验证实

15、其为病原。4抗感染免疫YANQP等11的研究表明，在大黄鱼的免疫机制中，非特异性免疫因子，如白细胞和外周血中的抗菌物质在感染初期发挥着重要作用，而特异性免疫因子，包括抗体，在后期发挥着重要作用。如人工感染溶藻弧菌后，大黄鱼能通过红细胞和白细胞增殖、释放抗菌物质、产生特异性抗体等方式提高其对溶藻弧菌的抗感染能力。目前在大黄鱼养殖生产中，细菌性疾病的传统的防治方法是化学消毒剂和抗生素的大量使用，而化学消毒剂和抗生素对环境和人类健康存在威胁，且该类细菌对常规抗生素的耐药性日渐增强。在水产品的安全问题日益引起社会关注的今天，如何进行养殖疾病的无公害防治是摆在养殖户和相关科研人员面前一个急需解决的问题。

16、因此，从免疫学角度进行水产养殖病害防治研究，通过提高鱼体非特异性免疫机能从而提高其抗病能力，减少疾病的发生,已成为水产动物疾病预防与控制研究领域的热点。现阶段关于大黄鱼免疫功能的基础研究较薄弱，而非特异性免疫是鱼类抵御外来病原微生物入侵的第一道防线。因此研究对大黄鱼非特异性免疫功能无论从理论上还是对鱼类的免疫保护均具有重要意义，且为将来各类免疫增强剂的筛选以奠定了基础。近年来国内外的许多学者已经通过对不同的鱼类进行天然或者人工感染病原菌，对其抗感染免疫机理进行了不同角度的研究。YILDIZ等12研究了人工感染荧光假单胞菌（PSEUDOMONASFLUORESCENS）鲤鱼血液学参数的变化，BE

17、NLIACK等13研究了天然感染迟缓爱德华氏菌（EDWARDSIELLATARDA）尼罗罗非鱼血细胞计数、比容、蛋白含量、离子浓度等血液学参数的变化。孙峰等14研究了嗜水气单胞菌对鲫鱼非特异性免疫功能的影响；RANZANIPAIVA等15研究了人工感染海分枝杆菌（MYCOBACTERIUMMARINUM）罗非鱼的血细胞计数、白细胞分类、蛋白含量的变化。VILLAMILL等16研究了人工感染海弧菌（VIBRIOPELAGIUS）7对大鲮鲆的头肾巨噬细胞产生NO能力的影响。因此鱼类的许多非特异性免疫指标可作为它们健康状况和抗感染免疫能力强弱的标志。关于大黄鱼免疫功能的研究方面，仅鄢庆枇、张俊杰等1

18、7进行了人工感染溶藻弧菌对大黄鱼免疫功能影响的研究。5免疫防治在病原检测方面，鄢庆枇、王军等18建立了针对副溶血弧菌和溶藻弧菌的间接ELISA检测方法，以异硫氰酸荧光素标记的羊抗兔免疫球蛋白为荧光抗体，建立了针对这两种病原菌的间接荧光抗体快速检测法19，大大缩短了检测时间。在免疫增强剂研究方面，简纪常等20用中药投喂大黄鱼，可以增强NBT阳性细胞、溶菌酶和补体的活性。鄢庆枇21、王军22等采用低聚糖益力素等免疫营养物投喂大黄鱼提高了溶菌酶活力、抗菌活力、白细胞数量和吞噬能力。张继泽等23发现共轭亚油酸对大黄鱼溶菌酶和免疫球蛋白IGM有明显的影响。AIQH等24在饲料中添加维生素C可提高大黄鱼的

19、生存率和增长率，同时随着维生素C含量的增加而逐渐提高。在免疫预防方面，吴志鹏等25研究了采用不同方法制备的溶藻弧菌、副溶血弧菌和嗜水气单胞菌三联疫苗及不同的免疫途径对大黄鱼的免疫效果，结果表明福尔马林灭活疫苗注射免疫途径效果最佳。鄢庆枇等26研究了溶藻弧菌脂多糖对大黄鱼的毒性与免疫保护性，证明溶藻弧菌脂多糖对大黄鱼有一定的毒性，注射低剂量的溶藻弧菌脂多糖能使大黄鱼对溶藻弧菌产生一定的免疫力，但其保护率较低。在中草药制剂的研究方面，郑天伦等27进行的大黄鱼弧菌病的中草药防治研究表明石榴皮、地榆、五味子、大黄等4种药物对溶藻弧菌的抑菌作用显著。6展望综上所述，有关大黄鱼疾病防治的研究虽然已经全面展

20、开，但是关于大黄鱼免疫功能的基础研究却很薄弱，特别是大黄鱼抗病原菌感染的免疫反应机理，是探讨其疾病防治对策的重要理论基础，有关大黄鱼溃疡病非特异性免疫功能的影响研究很少，仅有的报道也是针对一种病原菌的感染后分析，尚未见有关引起该病症的不同病原菌之间的毒力差异及对大黄鱼免疫功能影响的差异性比较研究，急需得到深入。参考文献1苏永全,张彩兰,王军,等大黄鱼养殖M北京海洋出版社,2004,1102林克冰,周宸,刘家富,等海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的病原菌J台湾海峡,1999,18303423473鄢庆枇,王军,苏永全,等网箱养殖大黄鱼弧菌病研究J集美大学学报自然科学版,2001,6319119684金珊

21、,王国良,赵青松,等海水网箱养殖大黄鱼弧菌病的流行病学研究J水产科学,2005,24117195王军,苏永全,张朝霞,等闽南地区养殖大黄鱼细菌性疾病的病原生物学研究J厦门大学学报自然科学版,2001,4085916简纪常,吴灶和大黄鱼库道虫病的初步研究J湛江海洋大学学报,2003,23129347苏跃中,游岚网箱饲养的大黄鱼病害防治J水产科技情报,2000,2721791838杨文川,李立伟,石磊,等福建海水养殖鱼类寄生贝尼登虫病原学研究J台湾海峡,2001,2022052099厦门大学,国家海洋局第三海洋研究所大黄鱼养殖病害与性早熟防治技术研究国家863计划项目验收报告10CHENXH,LI

22、NKB,WANGXWOUTBREAKSOFANIRIDOVIUSDISEASEINMARICULTUREDLARGEYELLOWCROAKER,PSEUDOSCIAENACROCEA（RICHARDSON）,INCHINAJJFISHDIS,2003,2661561911YANQP,ZHANGJJ,ZOUWZ,ETALIMMUNERESPONSEOFPSEUDOSCIAENACROCEATOTHEINJECTIONOFVIBRIOALGINOLYTICUSJCHINESEJOURNALOFOCEANOLOGYANDLIMNOLOGY2009,27859112YILDIZHYEFFECTSOFE

23、XPERIMENTALINFECTIONWITHPSEUDOMONASFLUORESCENSONDIFFERENTBLOODPARAMETERSINCARPCYPRINUSCARPIOLJISRJAQUACULTBAMIDGEH,1998,50828513BENLIACK,YAVUZCANHYBLOODPARAMETERSINNILETILAPIAOREOCHROMISNILOTICUSLSPONTANEOUSLYINFECTEDWITHEDWARDSIELLATARDAJAQUACULTRES,2004,351388139014孙峰,张煜,李立德,等感染嗜水气单胞菌对鲫鱼非特异性免疫功能的影

24、响J中国海洋大学学报,2005,35581581815RANZANIPAIVAMJT,ISHIKAWACM,EIRASAC,ETALEFFECTSOFANEXPERIMENTALCHALLENGEWITHMYCOBACTERIUMMARINUMONTHEBLOODPARAMETERSOFNILETILAPIA,OREOCHROMISNILOTICUSLINNAEUS,1757JBRAZARCHBOILTECHNOL,2004,4794595316VILLAMILL,FIGUERASA,ARANGURENR,ETALNONSPECIFICIMMUNERESPONSEOFTURBOT,SCOPHT

25、HALMUSMAXIMUSL,EXPERIMENTALLYINFECTEDWITHAPATHOGENICVIBRIOPELAGIUSJJFISHDIS,2003,2632132917鄢庆枇,张俊杰,邹文政,等人工感染溶藻弧菌对大黄鱼免疫功能的影响J水产学报,2007,31225125618鄢庆枇,王军,苏永全,等大黄鱼病原菌溶藻弧菌的ELISA快速检测研究J海洋科学,2001,2594750919鄢庆枇,苏永全,王军,等大黄鱼弧菌病的荧光抗体快速诊断研究J集美大学学报,2001,6429129520JIANJC,WUZHEFFECTSOFTRADITIONALCHINESEMEDICINEON

26、NONSPECIFICIMMUNITYANDDISEASERESISTANCEOFLARGEYELLOWCROAKER,PSEUDOSCIAENACROCEARICHARDSONJAQUACULTURE,2003,2181921鄢庆枇,苏永全,王军,等口服免疫添加剂对养殖大黄鱼免疫机能影响的初步研究J集美大学学报自然科学版,2001,6313413722王军,鄢庆枇,苏永全,等免疫添加物对大黄鱼血液白细胞数量及其吞噬功能的影响J海洋科学,2001,259444623张继泽,吴天星,王进波共轭亚油酸对大黄鱼免疫功能的影响J水生态学志,2009,23869024AIQH,MAIKS,TANBP,E

27、TALEFFECTSOFDIETARYVIAMINCONSURVIWAL,GROWTH,ANDIMMUNITYOFLARGEYELLOWCROAKER,PSEUDOSCIAENACROCEAJAQUACULTURE2006,26132733625吴志鹏,王三英三联疫苗对大黄鱼常见细菌性疾病免疫保护的实验研究J厦门大学学报自然科学版,2004,43111511826鄢庆枇,苏永全,王军,等溶藻弧菌脂多糖对大黄鱼的毒性与免疫保护性试验J台湾海峡,2003,222016316727郑天伦,王国良,金珊网箱养殖大黄鱼弧菌病的中草药防治J水产科学,2005,242242510本科毕业设计（20_届）三种

28、致病弧菌对大黄鱼血液生理生化的影响11目录引言21材料与方法311实验材料3111实验用鱼3112实验菌株3113试剂3114仪器312实验方法3121各菌株人工感染浓度的确定3122实验分组4123菌悬液的配制42124人工感染4125样品采集4126红细胞和白细胞计数4127白细胞分类计数4128NBT阳性细胞计数5129吞噬细胞吞噬能力测定51210血液生化指标的测定51211数据处理及分析52结果与分析521弧菌感染对大黄鱼红细胞数量的影响522弧菌感染对大黄鱼白细胞数量的影响623弧菌感染对大黄鱼白细胞分类计数的影响724弧菌感染对大黄鱼NBT阳性细胞的影响925弧菌感染对大黄鱼吞噬

29、细胞吞噬活力的影响1026弧菌感染对血清中糖类、脂类及蛋白质代谢产物含量的影响1127弧菌感染对血清中蛋白质类物质含量的影响1328弧菌感染对血清中酶类物质活性的影响1429弧菌感染对血清中电解质含量的影响163讨论1831弧菌感染对大黄鱼血液红细胞的影响1832弧菌感染对大黄鱼血液白细胞的影响1833弧菌感染对大黄鱼免疫细胞的影响1934弧菌感染对大黄鱼血液生化指标的影响20致谢错误未定义书签。参考文献211摘要本研究将健康大黄鱼分为3个实验组和1个对照组，分别注射02ML的哈氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和灭菌生理盐水，在感染后的0，1，2，4，7，10，13，16，20D分别采样。测定血液

30、中各项生理生化指标，来探讨三种致病弧菌对大黄鱼非特异性免疫机能的影响。结果显示大黄鱼血液生理指标的变化主要发生在感染后的17D。感染初期，各实验组大黄鱼红细胞数量有所下降，白细胞显著上升P005，实验组与对照组差异极显著P005。4D后，实验组红细胞数量升高与对照组差异不显著P005，实验组红细胞数量上升与对照组差异极显著P005；实验组与实验组、之间存在极显著差异P005；同组不同字母表示差异显著P005；实验组与实验组之间存在极显著差异P005；但实验组间存在差异，10D时实验组与实验组、之间差异显著P005。感染4D后，实验组淋巴细胞百分比均有所上升，实验组和上升幅度不大与对照组差异不显

31、著P005，实验组与对照组差异显著P005；同一列不同字母表示差异显著P005。10D时，实验组、与对照组无明显差异，但是实验组与实验组之间存在显著差异P005；实验组和之间却存在显著性差异P005，实验组略有下降与对照组差异不显著P005；实验组与、之间存在极显著差异P005；然而实验组和实验组、实验组、对照组之间都存在显著差异P005，实验组和达到峰值与对照组差异极显著P005，但是实验组和之间PP值存在显著差异P005；而实验组与之间差异极显著P005，实验组急剧下降与对照组差异极显著P005，实验组与对照组相比也显著升高P005，实验组持续上升与对照组差异显著P005，但实验组与实验组

32、之间存在显著差异P005，但与实验组、之间差异极显著P005，但实验组、与实验组之间却存在显著差异P005；感染后第710D内各实验组总胆固醇含量明显升高，其中实验组和显著高于对照组P005，第10D时实验组、与实验组之间存在显著差异P005，实验组与实验组、之间存在显著差异P005；各实验组白蛋白ALB含量也明显升高，实验组、上升较大与对照组差异显著P005，因此实验组与实验组、之间存在极显著差异P005，实验组上升较快与对照组差异显著P005，实验组与实验组、之间存在显著差异P005。感染4D时，各实验组K的含表6大黄鱼溃疡病血清中电解质含量比较TABLE6THECOMPARISONOFS

33、ERUMELECTROLYTECONTENTONULCERDISEASEOFPSEUDOSCIAENACROCEA17时间实验组别钾钠氯镁磷铁钙TIMEGROUPKNACLMGPFECA0D530077A16110721A14400566A181011A343006A1700297A288008A557038A16850325A14900000A181001A350008A1500549A301014A503023A16880679A14700566A180013A341013A1500212A276035A555000A16180115A15200000A200001A357000A1600

34、000A317000A1D352064AB16560453A14350495A123011A387004A900000A264008A324047AB16045304A13950212A122011A365016A1850354B265018A471188A16125219A14250212A111017A355012A1300131C282023A291011B16350311A14100283A113001A375016A950071A290017A2D502124AB16690268A14600424A136013A378017A1400083A290012A640036A1546596

35、8B13500273B129025A350025A1400036A283004A333045B1527014B13050071BC131011A348013A1250071A263022A318071B14770495B12500283C121008A329013A1250070A262007A4D422098A159471031A14167945A108015A364011A1500400AB269029A367004A16430127A14300141A152012B341023A1650154B299017A335081A155701126A13267693A174025B350022A

36、1300200AC273016A388114A19370769B17933896B162009B379022A1167152C313033A7D481147A17625276A153331101A131030A336046A1567231A287051A548276A171851209A148501485A138037A367018A1600141A314015A464043A17315573A15250212A131002A367019A1500283A309013A466065A17515120A15450071A136011A348005A1500424A284008A10D305042

37、A161101027A14600954A162016A332023A1167208A281025A976098B16475856A14750495A173003A372013A3250354B276022A323126A16823226A15200265A168019A380008A1500173A304013A491003A16305799A14700000A168030A350021A1200287A277055A13D511172A184901513A17550626A189006AB369031A14001202A334036A531083A18167605A15833208AB179

38、034A362016A1233058A337033A540145A181431218A15033826B198049B389023A1300100A288011A513294A17883224A15900173AB181012AB357014A1250764A292018A16D293027A17453360A15333252A181010A352015A1250321A332035A389085A172801277A154001015A161011A314017A1200200A287023A307126A17027522A14800500A178007A334007A1333115A304

39、021A336088A171232555A154332413A181023A318034A1433208A281054A20D541093A175402456A152332566A170032A338016A1367153A305045A579188A16870846A15500624A173009A315025A1133153A258006A559318A169271299A153501493A158024A312026A1167208A258019A18543117A17657221A15733513A176024A352032A1267351A286011A量变化不显著，NA和CL含量急

40、剧下降，均与对照组差异极显著P001；MG含量发生了变化，实验组显著低于对照组P005，与实验组、之间存在显著差异P005；FE含量持续升高，实验组与对照组差异显著P005，实验组与对照组差异极显著P001，实验组与实验组之间存在显著差异P005。7D后，大黄鱼血清中各电解质含量变化不大，只在10D和13D有12个电解质含量出现个别差异。3讨论31弧菌感染对大黄鱼血液红细胞的影响一般认为，由于疾病的影响，鱼类的红细胞形状、大小及数量均会发生变化，常引起贫血症状的出现。本实验结果与此相似，在感染致病弧菌后的12D内，各实验组的红细胞数量均显著低于对照组，说明在三种致病弧菌感染初期，由于鱼体受到刺

41、激和伤害，大黄鱼红细胞会有一定的损伤，数量会有一定程度的降低。这与天然感染迟缓爱德华氏菌EDWARDSIELLATARDA或者注射分枝杆菌的罗非鱼，都观察到红细胞数量的下降一致108。但与YANQP等20对大黄鱼注射溶藻弧菌后，发现感染初期大黄鱼红细胞数量会有一定程度的增加不一致，笔者认为可能与试验菌株、感染浓度、注射剂量的差异相关，从而导致鱼体应激和免疫反应的时效差异。感染4D后各实验组红细胞数量开始升高，特别是溶藻弧菌感染组极显著高于对照组。反映大黄鱼在经过免疫应激后已通过自身免疫机能机体逐渐恢复，据相关报道鱼类的红细胞还具有吞噬功能，表明红细胞免疫功能在鱼类免疫防御中占有重要地位。32弧

42、菌感染对大黄鱼血液白细胞的影响在鱼类免疫过程中，血液中白细胞数量的多少可直接反映出鱼类非特异性免疫能力的高低21。在脊椎动物防御外来病原体的过程中，常可见到白细胞增殖的现象710。本实验结果表明，各实验组大黄鱼在感染后的17天内白细胞数量变化较为明显，实验组大黄鱼受感染后第1天白细胞数量略低于对照组，但2D后白细胞数量开始急剧上升与对照组差异极显著，这说明染病初期病原菌的侵入刺激了鱼的代偿性应激引起大黄鱼白细胞的增殖；但4D后，白细胞数量开始显著下降，可能是由于大量的菌体抑制血液中白细胞的生成，对白细胞产生损害，从而白细胞数目减少。7D以后，各实验组白细胞数量又有增加的趋势，这可能是由于大黄鱼

43、自身机体通过与病原菌相互作用后其免疫系统逐渐恢复。13D以后各组患病大黄鱼通过自我修复逐渐正常，因此白细胞数量趋于一致，无显著变化。鱼类白细胞数量及形态变化，在一定程度上反映其造血机能及与疾病的相对关系。根据资料表明，当病原入侵时，鱼类由于受到刺激导致造血机能和体液防御机能相对增强，其白细胞数会明显增多，如患败血症和狂游症的鲢2223，但陈福华等24认为当疾病进入后期，患病鱼体能变弱，造血机能和体液防御机能也相应减弱，此时的白细胞数量也随之减少，在本实验结果中也出现了这一趋势。大黄鱼受感染后白细胞数量的变化具有一定的规律性，总体上随时间的延长先升高后降低，具有明显的时间效应。这与孙峰9以及鄢庆

44、枇12等有关鱼类抗感染时非特异性免疫作用的相关研究结果相似。不同菌种之间对大黄鱼的影响也存在差异，就白细胞数量变化而言，试验结果显示哈氏弧菌感染组变化幅度最大，可能与哈氏弧菌菌株的毒性较强有关。白细胞中的粒细胞、单核细胞以及淋巴细胞都与机体的抗感染免疫密切相联，其中的中19性粒细胞和单核细胞具有较强的吞噬作用，而单核细胞渗出血管后进入组织和器官，可进一步分化发育成巨噬细胞而具有最强的吞噬能力，它们是机体非特异性免疫的重要组成部分。因此，测定鱼类血液中白细胞的组成及其吞噬活性，可以反映被测鱼体的免疫状态。本试验对感染后不同天数内各实验组和对照组大黄鱼血液中的白细胞各成分比例及吞噬活性变化进行了检

45、测。结果显示，白细胞中包含有淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞以及嗜酸性粒细胞，偶尔发现嗜碱性粒细胞。正常大黄鱼中性粒细胞最多，其次是淋巴细胞和单核细胞，嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞极少。在感染后的14D内大黄鱼血液中白细胞各成分比例变化较为明显，12D内各实验组淋巴细胞百分比呈显著下降趋势，2D后各实验组淋巴细胞百分比有所升高，7D以后，各实验组淋巴细胞的比例逐渐恢复变化不明显。这与前述感染初期实验组白细胞总数减少的趋势相一致，其中主要是淋巴细胞减少所致。由于鱼类淋巴细胞也像高等脊椎动物那样能被抗原激活而产生相应的抗体和淋巴因子，而感染初期鱼体内抗体尚未产生，因此淋巴细胞数量较低。淋巴细胞减少现象

46、在许多鱼类的应激反应中都有出现2526，情况比较复杂。单核细胞存在于所有脊椎动物中，环境污染和疾病感染都能引起鱼类血液中单核细胞数目显著增加，本实验结果与之相符。单核细胞比例在感染后的14D内均呈上升趋势，12D内上升幅度最大，说明大黄鱼受感染过程中能引起单核细胞的增殖。鱼类中性粒细胞具有活跃的吞噬和杀伤功能，RANZANIPAIVAMJT等10的研究表明尼罗罗非鱼在受分枝杆菌MYCOBACTERIUMMARINUM感染后的1D白细胞就开始增加，其主要是中性粒细胞增殖所致。本实验在感染后的14D内却出现不同程度的下降，没有随着白细胞数量的增加而同步增加，与鄢庆枇等12研究结果相同，鄢庆枇等认为

47、可能是由于粒细胞具有趋化性和吞噬作用，所采用的腹腔注射会导致大量的粒细胞因趋化作用而在病原菌聚集的腹腔聚集，从而引起外周血中粒细胞数量下降，同时吞噬作用也会引起部分粒细胞死亡，进一步导致外周血中粒细胞数量的下降。笔者认为除上述原因外还可能与鱼种差异、不同菌种、计数方法等有关。嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞由于本身存在数量很少，实验中其数量变化波动不大，仅在2D时溶藻弧菌感染组的嗜酸性粒细胞显著高于对照组。嗜酸性粒细胞的功能目前了解较少，但它具有吞噬功能是明确的，在急性组织损伤或病原感染时，病灶部位常有大量的嗜酸性粒细胞聚集，它能非特异性地吞噬病原和伤亡的自身组织。笔者也发现患病鱼体血液中曾出现大量

48、的嗜酸性粒细胞聚集。33弧菌感染对大黄鱼免疫细胞的影响在鱼类血细胞中，吞噬细胞、中性粒细胞、巨噬细胞都具有吞噬异物的能力，是鱼类非特异性免疫系统中的主要指标之一，它们在吞噬过程中可产生活性氧，对于入侵的病原体有很大的杀伤力，可独立或与其它溶酶体酶类协同地发挥作用27。NBT是研究这类细胞数量和吞噬能力的极好指示剂，在活性氧产生过程中，胞质中的葡萄糖6磷酸被氧化，所脱下的氢被NBT所接受，因此细胞可将渗入的NBT由淡黄色还原为棕黑色或深蓝色，这个反应已成为鱼体健康状况或者免疫增强剂效果评定的有效参考指标28。本实验中NBT阳性细胞就是这三种细胞的总称17，因此NBT阳性细胞可综合反映鱼类血液中吞噬细胞、中性粒细胞、巨噬细胞的水平和功能，它们的数量以及吞噬能力的高低可直接反映鱼类非特异性免疫能力的大小。SHARIFFM等29用嗜水气单胞菌AEROMONASHYDROPHILA感染爪哇鲤鱼后提高了吞噬细胞的20NBT反应活性。本实验结果也表明，各实验组大黄鱼外周血的NBT阳性细胞数量在感染后的24D极显著升高，尤其是哈氏弧菌感染组中NBT阳性细胞数目在短时间内出现了明显增加，这与白细胞数量变化趋势类似，说明感染初期病原菌已经进入了鱼体的血液