甲基茉莉酸对雨生红球藻虾青素积累的影响及其分子机理的研究【开题报告+文献综述+毕业设计】.Doc

1、本科毕业论文系列开题报告生物技术甲基茉莉酸对雨生红球藻虾青素含量的影响及分子机理的研究一、选题的背景与意义雨生红球藻（HAEMATOCOCCUSPLUVIALIS）是一种淡水单细胞绿藻，隶属于绿藻门、团藻目、红球藻科、红球藻属，由于能积累一种经济价值很高的药用次生代谢产物虾青素，近年来已成为国际上藻类学研究的热点之一。在天然虾青素生产来源（甲壳动物的壳、酵母菌、微藻类）中，雨生红球藻中虾青素的含量最高2，大量研究表明雨生红球藻对虾青素的积累速率和生产总量较其它绿藻高，是虾青素生产的主要原料。而且雨生红球藻所含虾青素及其酯类的配比约70的单酯，25的双酯及5的单体与水产养殖动物自身配比极为相似，

2、此外，雨生红球藻中虾青素的结构以3S一3S型为主，与鲑鱼等水产生物体内虾青素结构基本一致，其工厂化生产和优良品系的培育已引起人们广泛关注。虾青素（ASTAXANTHIN）是一种红色的天然类胡萝卜素，是一种优质、高效、安全的着色剂和天然抗氧化剂，能提高动物的免疫力和存活率，增加动物产品的营养价值和色泽外观。虾青素具有清除氧自由基的强大能力，其抗氧化活性是类胡萝卜素的10倍、维生素E的550倍，被誉为“超级维生素E”。人工合成的虾青素价格昂贵（每公斤3000美元），其着色能力和抗氧化能力较天然虾青素低，而且动物体对化学合成的虾青素的吸收能力较弱，人工合成虾青素过程中含非天然的异构体和有害物质污染，

3、因此人们对天然虾青素的兴趣较高。天然虾青素对人体绝对安全，目前主要作为人类的高级保健食品、家畜的饲料添加剂。目前仅鲑鱼饲料一项的年市场容量就超过185亿美元，并以每年8的速率递增；畜禽饲料添加剂的年市场容量也有125亿美元，作为食品添加剂更显示出极大的市场潜力。甲基茉莉酸能够在植物的抗逆反应中诱导植物抗毒素的产生，在细胞工程中是促进次生代谢产物积累的重要诱导因子。前人研究表明，甲基茉莉酸可诱导紫杉醇、长春花碱、银杏内酯和类胡萝卜素等次生代谢产物的产生和积累。但目前甲基茉莉酸对雨生红球藻细胞生长和虾青素积累的影响还未见报道。在虾青素生物合成中，1脱氧D木酮糖5磷酸合成酶1DEOXYDXYLULO

4、SE5PHOSPHATESYNTHASE，DXS催化丙酮酸和G3P缩合生成1脱氧D木酮糖5磷酸，是新近发现的DXP（1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATE）途径的第一个酶，也是第一个限速酶，是虾青素代谢工程的最重要靶点。在番茄果实成熟过程中，DXS的表达量与类胡萝卜素的积累具有很高的一致性。在胡椒DXS的研究中表明，当CHLOROPLAST叶绿体向CHROMOPLAST成色素细胞转变过程中，DXS表现出超量表达，这是因为需要更多的IPP参与类胡萝卜素的生物合成。可以看出，DXS是虾青素等类胡萝卜素合成和积累的关键基因。针对雨生红球藻虾青素在应用上的巨大潜力，通过研究甲基茉莉酸对雨生

5、红球藻细胞生长和虾青素含量的影响，寻找适合虾青素积累的最佳诱导子及其酸浓度，为虾青素的工厂化生产提供技术基础。通过研究甲基茉莉酸对雨生红球藻虾青素合成关键酶基因DXS表达的影响，确定DXS基因表达与虾青素积累的关系，从而在分子水平上阐明雨生红球藻虾青素积累的原因和机理。本项目试图为进一步提高雨生红球藻的培养产量和虾青素含量提供新的技术支持。通过在不同甲基茉莉酸的浓度梯度下虾青素的含量的测定，找出具有最大生产优势的生产虾青素的方法，并进行推广，在今后生产应用上逐渐取代人工合成的虾青素，提高生物吸收效果和其生物利用的安全性。同时它的完成，将为研究虾青素基因的表达、信号传导和调控提供新的实验途径和模

6、型。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题（一）研究的基本内容1、甲基茉莉酸对雨生红球藻的生长及虾青素含量的影响；2、雨生红球藻RNA的提取；3、甲基茉莉酸诱导下雨生红球藻DXS基因的表达；4、比较DXS基因表达与虾青素含量积累的关系。二）拟解决的主要问题1、雨生红球藻RNA提取方法的优化；2、建立雨生红球藻虾青素含量的测定方法。三、研究的方法与技术路线四、研究的总体安排与进度200992009121）研究甲基茉莉酸对雨生红球藻细胞生长的影响；2）雨生红球藻RNA提取；20103201061）究甲基茉莉酸对雨生红球藻虾青素积累的影响；2）DXS基因核心片段的克隆；总RNA的的提取反转得到CDNA

7、雨生红球藻生长和虾青素含量的变化雨生红球藻DXS基因的表达研究比较DXS基因表达与虾青素含量积累的关系甲基茉莉酸处理后的雨生红球藻雨生红球藻用信号调控因子甲基茉莉酸处理雨生红球藻20107201091）研究甲基茉莉酸处理下DXS基因的表达；2）研究DXS基因表达与虾青素积累之间的相关性；2010102010121）探讨虾青素积累分子机理；20111201131撰写毕业论文。五、主要参考文献1RICHMONDAHANDBOOKOFMICROALGALCULTUREBIOTECHNOLOGYANDAPPLIEDPHYCOLOGYMIOWA,USABLACKWELLSCIENCELTD,200428

8、12882SHIBATAA,KIBAY,ALATIN,ETALMOLECULARCHARACTERISTICSOFASTAXANTHINANDBETACAROTENEINTHEPHOSPHOLIPIDS,MONOLAYERANDTHEIRDISTRIBUTIONSINTHEPHOSPHOLIPIDSBILAYERJCHEMISTRYPHYSICSLIPIDS,2001,1111223殷明炎,刘建国,张京浦,等雨生红球藻和虾青素研究述评J海洋湖沼通报,1998,253624魏东,藏晓南大规模培养雨生红球藻生产天然虾青素的研究进展和产业化现状J中国海洋药物,2001,5485GUNDLACHH,M

9、ULLERMJ,KUTCHANTM,ETALJASMONICACIDISASIGNALTRANSDUCERINELICITORINDUCEDPLANTCELLCULTURESJPROCNATLACADSCIUSA,1992,89238923926GONGYF,LIAOZH,CHENM,ETALMOLECULARCLONINGANDEXPRESSIONPROFILEANALYSISOFGINKGOBILOBADXSGENEENCODING1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASE,THEFIRSTCOMMITTEDENZYMEOFTHE2CMETHYLDERYTHRITO

10、L4PHOSPHATEPATHWAYJPLANTAMEDICA,2006,723293357KANGSM,MINJY,KIMYD,ETALEFFECTSOFMETHYLJASMONATEANDSALICYLICACIDONTHEPRODUCTIONOFBILOBALIDEANDGINKGOLIDESINCELLCULTURESOFGINKGOBILOBAJINVITROCELLDEVBIOLPLANT,2006,42144498余龙江,朱敏,刘幸福,等MEJA对中国红豆杉胚性细胞紫杉醇生物合成的影响J武汉植物学研究,1999,1743713749朱颖,王丽丽,柴芸彬,等茉莉酸甲酯对杜氏盐藻胡萝

11、卜素含量的影响宁波大学学报,2010，231131710陈兴才,黄伟光,欧阳琴雨生红球藻的培养及虾青素累积条件的探讨J福州大学学报自然科学版,2005,33225926311苗凤萍,李夜光,耿亚红温度对雨生红球藻HAEMATOCOCCUSPLUVIALIS生物量和虾青素产量的影响J武汉植物学研究,2005,231737612蒋霞敏,柳敏海,任凯来化学因子对雨生红球藻诱变株虾青素积累的调控J宁波大学学报理工版,2005,18330631213董庆霖,赵学明,邢向英,等碳和氮代谢被抑制诱导雨生红球藻细胞内虾青素的合J化学工程,2006,34124648,5714LIAOZH,CHENM,GONGY

12、F,ETALISOPRENOIDBIOSYNTHESISINPLANTSPATHWAYS,GENE,REGULATIONANDMETABOLICENGINEERINGJJBIOLSCI,2006,6120921915ROHMERMTHEDISCOVERYOFAMEVALONATEINDEPENDENTPATHWAYFORISOPRENOIDBIOSYNTHESISINBACTERIA,ALGAEANDHIGHERPLANTSJNATPRODREP,1999,1656557416BOUVIERF,DHARLINGUEA,SUIREC,ETALDEDICATEDROLESOFPLASTIDTRAN

13、SKETOLASESDURINGTHEEARLYONSETOFISOPRENOIDBIOSYNTHESISINPEPERFRUITSJPLANTPHYSIOL,1998,1171423143117CHAHEDK,OUDINA,GUIVARCHN,ETAL1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASEFROMPERIWINKLECDNAIDENTIFICATIONANDINDUCEDGENEEXPRESSIONINTERPENOIDINDOLEALKALOIDPRODUCINGCELLSJPLANTPHYSIOLBBIOCHEM,2000,3855956618LOISLM,R

14、ODRGUEZCONCEPCINM,GALLEGO,ETALCAROTENOIDBIOSYNTHESISDURINGTOMATOFRUITDEVELOPMENTREGULATORYROLEOF1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASEJPLANTJ,2000,22650351319王丽丽、龚一富雨生红球藻虾青素合成关键酶基因DXS的克隆及生物信息学分析J广东省研究生学术论坛论文集,2008,14415120陈晓飞,严小军红球藻虾青素含量测定方法的探讨J宁波大学学报理工版,2007,20444144521袁志发,周静芋试验设计与分析M高等教育出版社,20001728822

15、MUELLERMJ,BRODSCHELMW,SPANNAGLESIGNALINGINTHEELICITATIONPROCESSISMEDIATEDTHROUGHTHEOCTADECANOIDPATHWAYLEADINGTOJASMONICACIDJPROCNATLACADSCIUSA,1993,907490749423TAMOGAMIS,RAKWALR,KODAMOPHYTOALEXINPRODUCTIONELICITEDBYEXOGENOUSLYAPPLIEDJASMONICACIDINRICELEAVESORYZASATIVALISUNDERTHECONTROLOFCYTOKININSAN

16、DASCORBICACIDJFEBSLETT,1997,412616424桂连友,刘树生,陈宗懋外源茉莉酸和MEJA诱导植物抗虫作用及其机理J昆虫学报,2004,47450751425杨英,郑辉,何峰不同浓度茉莉酸甲酯对悬浮培养的胀果甘草细胞合成甘草总黄酮的影响J云南植物研究,2008,30558659226王学勇,崔光红,黄璐琦,等诱导子对丹参毛状根中丹参酮类成分积累影响J中国中药杂志,2007,321097697927KOBAYASHIM,SAKAMOTOYSINGLETOXYGENQUENCHINGABILITYOFASTAXANTHINESTERSFROMTHEGREENALGAHAE

17、MATOCOCCUSPLUVIALISJBIOTECHNOLLETT,1999,2126526928金蓉,朱长青,徐昌杰1脱氧木酮糖5磷酸合成酶（DXS）及其编码基因J细胞生物学杂志,2007,29706712毕业论文文献综述生物技术诱导子对雨生红球藻虾青素含量的影响及其分子机理的研究进展摘要虾青素是雨生红球藻细胞内的一种次生代谢产物，具有较高的经济价值。本文主要介绍了雨生红球藻、虾青素的生物学功能以及虾青素在雨生红球藻内积累的分子机理。介绍三种不同诱导子对次生代谢产物的积累的影响。关键词雨生红球藻；虾青素；诱导子1前言雨生红球藻HAEMATOCOCCUSPLUVIALIS是一种单细胞绿藻，属

18、绿藻门、团藻目、红球藻科、红球藻属，能生产一种红色的天然类胡萝卜素虾青素（ASTAXANTHIN）。虾青素是一种优质、高效、安全的着色剂和天然抗氧化剂，能提高动物的免疫力和存活率，增加动物产品的营养价值和色泽外观1,2。对人体绝对安全，不仅可以用作水产养殖的饲料添加剂、人的食品添加剂，在药品、化妆品和高级营养保健品等领域也有非常大的应用潜力3,4。目前国际市场供货能力有限，远远不能满足需求，仅合成品价格就高于3000美元/KG，因此，采用各种途径提高雨生红球藻虾青素含量一直是国内外研究的热点。雨生红球藻HAEMATOCOCCUSPLUVIALIS是一种淡水单细胞绿藻，在分类学上属于绿藻门CHL

19、OROPHATA、绿藻纲CHLOROPHYCEAE、团藻目VOLVOCALES、红球藻科HAEMATOCOCCACEAE、红球藻属HAEMATOCOCCUS。细胞为广卵形到广椭圆形，宽1951M，长2863M，其大小与细胞阶段有关。与其他绿藻细胞一样具有色素体和蛋白核，光和色素成分包括叶绿素A、叶绿素B、叶黄素和类胡萝卜素。雨生红球藻具有特殊的生物学性质，其生活周期中主要有两种细胞类型，即进行营养生长的绿色游动细胞和累积虾青素的红色不动孢子。在有利的生长条件下，它以绿色的游动细胞存在，具有2条顶生、等长、约等于体长的鞭毛；而在不利的环境下，细胞生长趋于缓慢，由游动细胞转化为不动孢子，同时大量累

20、积虾青素而使细胞呈现出红色5。它是自然界中天然虾青素含量最高的生物，虾青素的积累量可高达细胞干重的4，是其他生物虾青素合成积累量的一到几个数量级。2虾青素虾青素属于四萜衍生物，在细胞质体中合成，在质体中，新近研究证实了一条独立于细胞质甲羟戊酸MVA途径的萜类合成的新途径，即2C甲基D赤藻糖醇4磷酸（MEP）途径，植物中单萜、二萜和少数倍半萜都由这条途径合成。1脱氧D木酮糖5磷酸合成酶1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASE，DXS是MEP途径的第一个酶，也是第一个关键酶6。超量表达DXS基因可提高単萜化合物、类胡萝卜素、萜类化合物和萜类吲哚生物碱的含量79。目前，王丽

21、丽等采用首次从雨生红球藻中克隆了DXS基因核心片段10，但MEJA对雨生红球藻虾青素合成基因DXS表达的影响还未见报道。21虾青素的生物学功能211抗氧化作用虾青素的分子结构具有比较活泼的电子效应，能向自由基提供电子或吸引自由基的未配对电子，通过吸收自由基多余的能量到分子链中，导致分子降解，阻止其它分子或组织受破坏，同时还可阻止富含脂质的膜迅速降解。可见，虾青素的结构特点使其极易与自由基发生反应而清除自由基，从而起到抗氧化作用。1213LEE等14比较了共轭双键数不同的叶黄素、玉米黄质、番茄红素、异玉米黄素和虾青素5种类胡萝卜素及其衍生物在豆油光氧化作用中淬灭活性氧的作用，发现此作用随共轭双键

22、的增加而增加，并以虾青素的作用为最强。MIKI15以含亚铁离子的血红素蛋白作为自由基产生者，亚油酸为接受者，用硫代巴比妥酸法检测各受试类胡萝卜素、维生素E等的抗氧化性，结果表明虾青素抗脂肪氧化能力最强，比胡萝卜素高10倍，比维生素E高100倍，故又称“超级维生素E”。虾青素还可解除光诱导产生的氧化胁迫，可保护机体免受UVA等带来的伤害1617。212增强机体免疫力此外，虾青素能显著提高动物的免疫能力。小鼠活体实验表明，与叶黄素和类胡萝卜素比较，虾青素能显著促进小鼠在胸腺依赖抗原（TDAG）刺激时产生IGM和IGG。此外，虾青素增强小鼠释放白细胞介素I和肿瘤坏死因子的作用比胡萝卜素和角黄质强得多

23、。有抗原存在时，虾青素也能显著促进脾细胞产生抗体，增强T细胞刺激下人体内白细胞免疫球蛋白的产生1819。裴凌鹏20利用小鼠移植性肿瘤实验观察虾青素对其体内肿瘤细胞生长和免疫器官胸腺、脾脏的影响,并通过ANAE法检测虾青素对T细胞阳性率的影响。结果表明，虾青素对S180肉瘤生长有一定抑制作用,各剂量组均可以提高免疫器官脏器指数,与模型组比具有显著性差异PF0016,14446误差21933141567总和1555652033MEJA对雨生红球藻总虾青素产量的影响研究不同浓度MEJA处理的雨生红球藻总虾青素产量的情况，结果表明图4，雨生红球藻总虾青素产量随着培养时间的延长逐渐增加。当MEJA浓度为

24、1600MOL/L时，总虾青素产量最低，可能是因为藻细胞死亡而不能积累虾青素。而当MEJA浓度分别为0，50，100，200，400，800MOL/L时，雨生红球藻虾青素总量随着时间的延长呈对数增长的趋势。研究不同浓度MEJA处理的雨生红球藻，比较其对数生长期18D的总虾青素产量。结果表明图5，添加MEJA处理组的总虾青素产量均低于对照组，说明MEJA抑制总虾青素产量。当MEJA的处理浓度为0MOL/L时，即对照组的总虾青素产量最高，达到了1466MG/L。单位MOL/L00051015202530350612182430诱导时间/D总虾青素产量/MGL10501002004008001600

25、图4MEJA对雨生红球藻总虾青素产量的影响FIG4THEEFFECTOFMEJAONTHETOTALASTAXANTHINPRODUCTIONOFHAEMATOCOCCUSPLUVIALIS814661000111409601100131301130002040608101214160501002004008001600MEJA质量浓度/MOLL1总虾青素产量/MGL1图5不同质量浓度MEJA诱导条件下雨生红球藻的总虾青素产量18DFIG5THEINDUCEMENTOFDIFFERENTCONCENTRATIONMEJAONTHETOTALASTAXANTHINPRODUCTIONOFHAEM

26、ATOCOCCUSPLUVIALIS18D34MEJA对雨生红球藻虾青素含量的影响根据已经测得的雨生红球藻总虾青素产量和细胞密度，计算得到不同浓度MEJA处理后的雨生红球藻在其对数生长期18D的虾青素含量，代表雨生红球藻的虾青素生物合成能力。研究结果表明图6，雨生红球藻单位细胞虾青素含量随着MEJA浓度的增加呈先升高后降低的趋势。当MEJA的处理浓度为800MOL/L时，雨生红球藻细胞虾青素的合成能力最强，达到了175109MG/CELLS，与对照组比较142109MG/CELLS增加了2324。方差分析如表2所示。142E04139E04137E04170E04164E04175E04782

27、E05000E00400E05800E05120E04160E04200E040501002004008001600MEJA质量浓度（MOL/L）虾青素含量（MG/105CELLS）图6不同质量浓度MEJA诱导条件下雨生红球藻单位细胞的虾青素含量（18D）FIG6THEINDUCEMENTOFDIFFERENTCONCENTRATIONMEJAONTHEUNICELLULARASTAXANTHINCONTENTOFHAEMATOCOCCUSPLUVIALIS18D910000919055314861377216204950005101520250501002004008001600MEJA质量

28、浓度MOL/L相对光密度值表2不同质量浓度MEJA处理雨生红球藻虾青素含量的方差分析（18D）TABLE2THEVARIANCEANALYSISOFTHEASTAXANTHINCONTENTOFHAEMATOCOCCUSPLUVIALISTREATEDWITHDIFFERENTCONCENTRATIONOFMEJA18D离差来源离差平方和自由度均方F比因素193E086322E09FA454F0016,14446误差992E0914709E10总和292E082035MEJA诱导下雨生红球藻虾青素含量和DXS基因表达量的关系通过研究不同浓度MEJA诱导下雨生红球藻DXS基因的表达情况，结果表明

29、图7，雨生红球藻DXS基因表达随着MEJA浓度的增加，呈先增加后降低的趋势，当MEJA的处理浓度为800MOL/L时，雨生红球藻DXS基因的表达最强。图7不同质量浓度MEJA诱导下雨生红球藻细胞DXS基因的表达水平FIG7THEINDUCEMENTOFDIFFERENTCONCENTRATIONMEJAONTHEDXSGENEEXPRESSIONLEVELOFHAEMATOCOCCUSPLUVIALIS通过不同浓度MEJA诱导下的雨生红球藻虾青素含量和DXS基因表达量之间相关性的比较，结果表明，雨生红球藻虾青素含量随着DXS基因表达水平增强而提高；同样，雨生红球藻虾青素含量随着DXS基因表达水

30、平减弱而降低，两者呈现正相关系。通过回归分析发现，MEJA处理的雨生红球藻虾青素含量和DXS基因表达量呈线性相关，回归方程为Y5105X9105式中Y为虾青素含量，X为DXS基因表达量，该方程的相关系数R0981。由此可以得出结论，DXS基因表达水平可以较准确反映雨生红球藻的虾青素含量，从而可以得出DXS基因是雨生红球藻虾青素合成过程中的一个关键酶基因。104讨论外源性茉莉酸类化合物能刺激植物次生代谢物的生物合成2223，可引起植物次生代谢产物的迅速积累，其作用具有广泛性，能诱导包括萜类、黄酮类、生物碱类等化合物的积累。桂连友等24应用外源MEJA处理烟草NICOTIANATABACUM可诱导

31、烟草从头合成烟碱，使整株烟草的烟碱含量提高210倍。杨英等25以胀果甘草GLYCYRRHIZAINFLATEBAT悬浮细胞为材料，在对数期第11D添加200MOL/LMEJA时，黄酮含量和产量最大，达1127MG/G和9018MG/L，分别为对照的360和339倍。王学勇等26研究发现，丹参SALVIAMILTIORRHIZA毛状根经MEJA处理后2，6，9D后其隐丹参酮的含量分别是对照的22，85，238倍。本研究表明，添加了MEJA的处理组均抑制了雨生红球藻细胞的生长，可能是由于MEJA营造了一个不适合雨生红球藻生长繁殖的胁迫条件，导致细胞密度降低。但MEJA能够促进雨生红球藻单位细胞虾青

32、素的合成。经200800MOL/LMEJA处理后，雨生红球藻内的虾青素含量均有不同程度的提高，其中，当MEJA浓度为800MOL/L时，单位细胞虾青素含量最高，达175109MG/CELLS，相比对照组（142109MG/CELLS）增加2324。与前人在其它植物和藻类中的研究结果一致。DXS是MEP途径上的第一个酶，也是第一个关键酶，其作用是催化丙酮酸和G3P生成1脱氧D木酮糖5磷酸，该步骤是植物萜类合成的第一步限速步骤2728。GONG等6研究表明，用甲基茉莉酸处理银杏细胞后，银杏内酯含量与银杏DXS的表达水平成正比，表明由DXS催化的酶促反应是银杏内酯生物合成的重要调节步骤，DXS是实现

33、银杏内酯代谢工程的重要候选功能基因。本研究结果也表明，雨生红球藻虾青素含量与DXS基因表达量成正比，与其它植物报道结果一致。5小结1）MEJA处理不利于雨生红球藻的生长。通过方差分析表明，不同浓度MEJA处理的雨生红球藻细胞的生长有极显著差异P001。当MEJA的处理浓度为0MOL/L时，雨生红球藻细胞密度最高，达到了10290105CELLS/ML。2）MEJA处理降低雨生红球藻的总虾青素产量。添加了MEJA处理组的总虾青素产量均低于对照组。当MEJA的处理浓度为0MOL/L时，即对照组，总虾青素产量最高，达1466MG/L。3）MEJA处理下，雨生红球藻虾青素含量呈先升高后降低的趋势。通过

34、方差分析表明，不同浓度MEJA的处理对雨生红球藻虾青素含量的影响有极显著差异P001。当MEJA的处理浓度为800MOL/L时，虾青素含量最高，达到了175104MG/105CELLS，与对照组比较（142104MG/105CELLS）增加2324。4）通过不同浓度MEJA诱导下的雨生红球藻虾青素含量和DXS基因表达量之间相关性的比较，结果表明，雨生红球藻虾青素含量随着DXS基因表达水平增强而提高；同样，雨生红球藻虾青素含量随着DXS基因表达水平减弱而降低，两者呈现正相关系。由此可以得出结论，DXS基因表达水平可以较准确反映雨生红球藻的虾青素含量，从而可以得出DXS基因是雨生红球藻虾青素合成过

35、程中的一个关键酶基因。11参考文献1RICHMONDAHANDBOOKOFMICROALGALCULTUREBIOTECHNOLOGYANDAPPLIEDPHYCOLOGYMIOWA,USABLACKWELLSCIENCELTD,20042812882SHIBATAA,KIBAY,ALATIN,ETALMOLECULARCHARACTERISTICSOFASTAXANTHINANDBETACAROTENEINTHEPHOSPHOLIPIDS,MONOLAYERANDTHEIRDISTRIBUTIONSINTHEPHOSPHOLIPIDSBILAYERJCHEMISTRYPHYSICSLIPID

36、S,2001,1111223殷明炎,刘建国,张京浦,等雨生红球藻和虾青素研究述评J海洋湖沼通报,1998,253624魏东,藏晓南大规模培养雨生红球藻生产天然虾青素的研究进展和产业化现状J中国海洋药物,2001,5485GUNDLACHH,MULLERMJ,KUTCHANTM,ETALJASMONICACIDISASIGNALTRANSDUCERINELICITORINDUCEDPLANTCELLCULTURESJPROCNATLACADSCIUSA,1992,89238923926GONGYF,LIAOZH,CHENM,ETALMOLECULARCLONINGANDEXPRESSIONPRO

37、FILEANALYSISOFGINKGOBILOBADXSGENEENCODING1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASE,THEFIRSTCOMMITTEDENZYMEOFTHE2CMETHYLDERYTHRITOL4PHOSPHATEPATHWAYJPLANTAMEDICA,2006,723293357KANGSM,MINJY,KIMYD,ETALEFFECTSOFMETHYLJASMONATEANDSALICYLICACIDONTHEPRODUCTIONOFBILOBALIDEANDGINKGOLIDESINCELLCULTURESOFGINKGOBILOBAJ

38、INVITROCELLDEVBIOLPLANT,2006,42144498余龙江,朱敏,刘幸福,等MEJA对中国红豆杉胚性细胞紫杉醇生物合成的影响J武汉植物学研究,1999,1743713749朱颖,王丽丽,柴芸彬,等茉莉酸甲酯对杜氏盐藻胡萝卜素含量的影响宁波大学学报,2010，231131710陈兴才,黄伟光,欧阳琴雨生红球藻的培养及虾青素累积条件的探讨J福州大学学报自然科学版,2005,33225926311苗凤萍,李夜光,耿亚红温度对雨生红球藻HAEMATOCOCCUSPLUVIALIS生物量和虾青素产量的影响J武汉植物学研究,2005,231737612蒋霞敏,柳敏海,任凯来化学因子对

39、雨生红球藻诱变株虾青素积累的调控J宁波大学学报理工版,2005,18330631213董庆霖,赵学明,邢向英,等碳和氮代谢被抑制诱导雨生红球藻细胞内虾青素的合J化学工程,2006,34124648,5714LIAOZH,CHENM,GONGYF,ETALISOPRENOIDBIOSYNTHESISINPLANTSPATHWAYS,GENE,REGULATIONANDMETABOLICENGINEERINGJJBIOLSCI,2006,6120921915ROHMERMTHEDISCOVERYOFAMEVALONATEINDEPENDENTPATHWAYFORISOPRENOIDBIOSYNTH

40、ESISINBACTERIA,ALGAEANDHIGHERPLANTSJNATPRODREP,1999,1656557416BOUVIERF,DHARLINGUEA,SUIREC,ETALDEDICATEDROLESOFPLASTIDTRANSKETOLASESDURINGTHEEARLYONSETOFISOPRENOIDBIOSYNTHESISINPEPERFRUITSJPLANTA,1998,1171423143117CHAHEDK,OUDINA,GUIVARCHN,ETAL1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASEFROMPERIWINKLECDNAIDENTIF

41、ICATIONANDINDUCEDGENEEXPRESSIONINTERPENOIDINDOLEALKALOIDPRODUCINGCELLSJPLANTPHYSIOL12BIOCHEM,2000,3855956618LOISLM,RODRGUEZCONCEPCINM,GALLEGO,ETALCAROTENOIDBIOSYNTHESISDURINGTOMATOFRUITDEVELOPMENTREGULATORYROLEOF1DEOXYDXYLULOSE5PHOSPHATESYNTHASEJPLANTJ,2000,22650351319王丽丽、龚一富雨生红球藻虾青素合成关键酶基因DXS的克隆及生物

42、信息学分析J广东省研究生学术论坛论文集,2008,14415120陈晓飞,严小军红球藻虾青素含量测定方法的探讨J宁波大学学报理工版,2007,20444144521袁志发,周静芋试验设计与分析M高等教育出版社,20001728822MUELLERMJ,BRODSCHELMW,SPANNAGLESIGNALINGINTHEELICITATIONPROCESSISMEDIATEDTHROUGHTHEOCTADECANOIDPATHWAYLEADINGTOJASMONICACIDJPROCNATLACADSCIUSA,1993,907490749423TAMOGAMIS,RAKWALR,KODAMO

43、PHYTOALEXINPRODUCTIONELICITEDBYEXOGENOUSLYAPPLIEDJASMONICACIDINRICELEAVESORYZASATIVALISUNDERTHECONTROLOFCYTOKININSANDASCORBICACIDJFEBSLETT,1997,412616424桂连友,刘树生,陈宗懋外源茉莉酸和MEJA诱导植物抗虫作用及其机理J昆虫学报,2004,47450751425杨英,郑辉,何峰不同浓度茉莉酸甲酯对悬浮培养的胀果甘草细胞合成甘草总黄酮的影响J云南植物研究,2008,30558659226王学勇,崔光红,黄璐琦,等诱导子对丹参毛状根中丹参酮类成分

44、积累影响J中国中药杂志,2007,321097697927KOBAYASHIM,SAKAMOTOYSINGLETOXYGENQUENCHINGABILITYOFASTAXANTHINESTERSFROMTHEGREENALGAHAEMATOCOCCUSPLUVIALISJBIOTECHNOLLETT,1999,2126526928金蓉,朱长青,徐昌杰1脱氧木酮糖5磷酸合成酶（DXS）及其编码基因J细胞生物学杂志,2007,2970671229MAKIOK,YOSHIROKANDYASUNOBUTLIGHTINDEPENDENT,ASTAXANTHINPRODUCTIONBYTHEGREENMICROALGAHAEMATOCOCCUSPLUVIALISUNDERSALTSTRESSJBIOTECHNOLOGYLETTERS,199750750930LETICIASANCHEZESTUDILLO,YOLANDAFREILEPELEGRIN,RENATARIVERAMADRID,ETALREGULATIONOFTWOPHOTOSYNTHETICPIGMENTRELATEDGENESDURINGSTRESSINDUCEDPIGMENTFORMATIONINTHEGREENALGA,DUNALIELLASALINAJBIOTECHNOLLETT,2006,28787791