10种形态相似川茶花品种的分子鉴定【毕业设计】.doc

1、本科毕业设计（20_届）10种形态相似川茶花品种的分子鉴定所在学院专业班级生物技术学生姓名学号指导教师职称完成日期年月目录1引言12材料与方法221样品采集222实验设备223DNA提取224引物筛选与ISSR反应条件33结果与分析331ISSR引物的筛选332扩增产物的多态性433品种鉴定4331氅盔和吊金钟的分子鉴别4332胭脂莲、胭脂鳞、鱼鳞甲的分子鉴别5333泸州大红和泸州二红的分子鉴别7334红佛鼎、似紫冠以及紫金冠的分子鉴别84讨论95小结10致谢错误未定义书签。参考文献10摘要本实验采用ISSR分子标记技术，对重庆南山植物园中花色花型极其相似，从外部形态上难以区分的10个川茶花品

2、种进行了分子鉴定。从23条引物中筛选出了5条谱带清晰、重复性好的引物用于PCR扩增，共得到72条清晰条带，其中64条呈现多态性，多态性比例P为8889。利用5条引物所建立的DNA指纹图谱可以较好地区分出这10个茶花品种，除了似紫冠和紫金冠。实验结果表明ISSR分子标记具有丰富的遗传多样性和稳定性，是一种较好的遗传分子标记，适合用于茶花品种的鉴定。关键词山茶；品种；分子鉴定；ISSRABSTRACTINTHEPRESENTSTUDY,ISSRMARKERSHAVEBEUSEDTOMOLECULARLYIDENTIFIED10SICHUANCAMELLIASPECIESOFBOTANICALGAR

3、DENINNANSHANCHONGQING,WHICHAREVERYSIMILARINCOLORANDPATTENANDINDISTINGUISHABLEFROMTHEEXTERNALMORPHOLOGY5PRIMERSWHICHHAVEDISTINCTANDWELLSEPARATEDBANDSWERESCREENEDFROM23PRIMERSUSEDFORPCRAMPLIFICATIONANDREVEALED72CLEARBANDS,OFWHICH64WEREPOLYMORPHIC,ACCOUNTINGFOR8889THEDNAFINGERPRINTINGESTABLISHEDBYTHESE

4、5PRIMERSCANWELLDISTINGUISHTHE10CAMELLIASPECIESEXCEPTTHESIZIGUANANDZIJINGUANTHERESULTOFEXPERIMENTSHOWTHATISSRHASAEXTENSIVEGENETICDIVERSITYANDSTABILITY,ANDISAGOODGENETICMOLECULARMARKERFORSPECIESIDENTIFICATIONINCAMELLIAKEYWORDSCAMELLIASPECIESMOLECULARIDENTIFICATIONISSR11引言茶花CAMELLIAJAPONICAL为山茶科THEACEA

5、E山茶属CAMELLIA常绿灌木或小乔木，是我国十大名花之一1。川茶花在中国茶花中独具一格，它树姿挺拔秀丽，叶片终年长青，严冬顶霜怒放，既可以盆栽观赏，又可以植于街边路旁美化环境。川茶花开花时，花朵或洁白如云，或红花似火，单瓣清纯委婉，重瓣交叠生姿，平瓣落落大方，曲瓣高歌狂舞，深受人们的喜爱。过去我们把川茶花归属在华东山茶品系中。已故上海著名园艺家黄德邻老先生有一个著名论断“中国茶花起源于青藏高原，后来分南北两支，南支发展为云南山茶，北支发展为四川山茶，此后四川山茶沿长江流域向东发展，又形成了华东山茶。这样就形成了四川山茶、云南山茶和华东山茶三大体系。”也就是说中国的山茶是以川茶为主的长江流域

6、的山茶种，古名为“川茶”或“蜀茶”，它是同我国的“滇茶”同出源于世界的屋脊青藏高原。世界茶花最集中的产地是在中国，千万年来中国这个山茶种逐渐地沿长江，由上游向下游传播开来，直至东海诸岛屿，例如人们看到的舟山茶林。中国山茶种在千百年前已自然形成了多色多型的重瓣种。在四川，我们的祖先早就把它们种植在庭院里，作为高贵的观赏植物，后来又经过前人的长期栽培成为当今世界上最古老的，但又是进化了的名贵中国“川茶”种2。总的来说，川茶花、华东茶花和一些日本茶花都叫日本山茶，但簇叶稍有不同。川茶花的叶片椭圆形，圆满而略呈卵状，光滑而有光泽，叶脉的网状不很明显，叶边呈小锯齿状。日本茶花虽然也呈椭圆形，但叶端有尖顶

7、，叶面不光滑，叶脉网状明显，叶边锯齿形。川茶花和华东茶花也有所不同。华东茶花的叶片较薄有光泽，主脉、侧脉及网脉细腻明显，锯齿细尖锐。四川什邡茶花协会老会长、川茶花专家徐永才先生在川茶花品种及其演进一文中对川茶花的特点说得更清楚。他说“茶花在四川立地条件的长期影响下，形成了川茶花的明显特征1、较外地茶花生长缓慢，节间短，着叶密集；2、叶片以椭圆形和卵圆形为主，很少见到外地茶花的“长椭圆形”叶片；3、叶片亮绿色，叶脉不外凸而隐平于叶面，叶缘近似波状，波端仅有微齿，齿长03MM以内；4、文瓣品种多；5、由于原始种源多而形成了花朵组成基数幅度大的多品种群体；6、有色泽鲜艳、复色多的品种。”由于四川盆地

8、常年湿润多雨，相对湿度大，全日照天数不多，川茶花在这种特殊的地理环境的逐代孕育下，形成了山茶花家族中的“川茶”品系，是理所当然的。据统计川茶花共有87个品种，但在长期的发展过程中，由于其品种间的自然或人工杂交，使得很多品种的花色花型、外部形态极其相似，品种间难以区分，这给川茶花品种分类和杂交育种亲本选配等工作带来了很大困难。搞清相似品种间的遗传差异，对茶花品种的鉴别及育种工作具有重要意义。ISSRINTERSIMPLESEQUENCEREPEAT是一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记技术，由ZIETKIEWIEZ等3在1994年创建，它的基本原理是在SSR的3或5端锚定24个碱基做引物，在P

9、CR反应中，锚定引物可引起特定位点退火，导致与锚定引物互补的间隔不太大的重复序列间DNA片段进行PCR扩增。所扩增的INTERSSR区域的多个条带，通过聚丙烯酞胺凝胶电泳得以分辨，扩增谱带多为显性表现。认识到生物个体之间DNA序列差异并以此作为标记的分子技术研究始于1980年，之后随着分子生物学的发展，DNA分子标记技术也得到了迅速发展，目前应用于植物种内遗传多样性研究的DNA分子标记主要有RAPD、AFLP、SSR和ISSR标记等几种4，其中ISSR分子标记技术兼具SSR、RAPD、AFLP等分子标记的优点，与SSR相比，ISSR不需要预先获知序列信息而使成本降低了不少5，且多态性更丰富；与

10、RAPD相比，ISSR重复性高，稳定性好，同时具备RAPD的简便、易操作等特点；与AFLP相比，ISSR更快捷、成本较低、DNA用量小、安全性较高。因此在多种植物的品种鉴定、遗传多样性分析、基因定位、遗传图谱的构建等方面已得到了广泛的应用36。本研究利用ISSR标记对10个形态相似的川茶花品种进行品种间分子鉴定，旨在为相似茶花品种间的快速准确的辨别提供科学有效的方法。22材料与方法21样品采集实验材料均采自重庆南山植物园，共10个品种，分别为氅盔、吊金钟、胭脂莲、胭脂鳞、鱼鳞甲、泸州二红、泸州大红、红佛鼎、似紫冠以及紫金冠。采集嫩叶，用变色硅胶干燥后带回实验室，4冰箱中保存直至提取DNA。实验

11、中选取茶花叶片作为DNA提取材料。从形态上观察到氅盔和吊金钟之间相似程度较高，胭脂莲、胭脂鳞和鱼鳞甲之间相似程度较高，泸州大红和泸州二红之间相似程度较高，红佛鼎、紫金冠以及似紫冠之间相似程度较高（见表1）。因此可将待测的10个川茶花品种从形态上初步分为4组。表1参试茶花品种TABLE1TESTEDCAMELLIACULTIVARS序号CODE品种名CULTIVAR采样地点SAMPLINGSITES起源PARENT12345678910氅盔吊金钟胭脂莲胭脂鳞鱼鳞甲泸州二红泸州大红红佛鼎似紫冠紫金冠重庆南山植物园重庆南山植物园重庆南山植物园重庆南山植物园重庆南山植物园重庆南山植物园重庆南山植物园重

12、庆南山植物园重庆南山植物园重庆南山植物园CJAPONICALCJAPONICALCJAPONICALCJAPONICALCJAPONICALCJAPONICALCJAPONICALCJAPONICALCJAPONICALCJAPONICAL22实验设备磨样机（BIOFASTPREP24）、离心机（EPPENDORF5415R）、电泳仪（DYY6C）、全自动紫外与可见分析FR200A、PCR仪GENEAMPPCRSYETEM9700、水浴锅HH4、微型迷你离心机TOMOSMINISTAR。23DNA提取本实验采用改良CTAB法3,715提取川茶花基因组DNA，首先取变色硅胶干燥好的叶片约005克

13、，加入少量PVP粉和一颗磁珠，置入磨样管中，用磨样机（BIOFASTPREP24）研磨，SPEED40，TIME20S。然后迅速加入65预热的2CTAB提取缓冲液8001000ML，摇匀后转入2ML离心管中，65水浴30分钟。冷却至室温，加等体积氯仿异戊醇（241），混合均匀（缓慢颠倒）1530分钟，室温10000RPM离心1015分钟。接着吸取上层水相至2ML离心管中，加入1/10体积的10CTAB，轻轻摇匀，再加入等体积的氯仿异戊醇（241）抽提，混合均匀后离心。离心后取上层水相至2ML离心管中，加入05体积的5MNACL混匀，再加入等体积20预冷的异丙醇，轻轻摇匀，放置2H或过夜。之后再

14、10000RPM离心10MIN，使DNA附着在离心管管底，弃水相。加75乙醇浸洗23次，用无水乙醇清洗一次，去乙醇，风干。提取出来的DNA沉淀用1TE溶解后放入4冰箱中保存备用，并将各样品中的DNA量稀释到相同浓度。通过1琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测DNA质量。324引物筛选与ISSR反应条件从有关山茶科植物的ISSR研究报道中选取23条引物4,8,16（见表2），由上海生物工程技术服务有限公司合成。表2ISSR引物名称及序列TABLE2THENAMEANDSEQUENCEOFISSRPRIMERS引物序列引物序列IR1AG8CIR13GT8GGIR2CT8GIR14CAG8TIR3AC

15、8TIR15GA8CTIR4AC8GIR16AC8TGIR5AC8CIR17CT8TIR6GA8TIR18CA8AIR7CTC6IR19CAA8GIR8GAA6IR20GGAGA3IR9CAA6IR21CA8GIR10GACA4IR22CT8CIR11GAC8IR23CTGA4IR12GT8C由于ISSR引物对MG2浓度和退火温度要求较高，故参照谈探等人的研究17对MG2浓度和退火温度进行了梯度实验，选定了最佳MG2浓度和各引物的最佳退火温度。经过比较和优化，反应体系确定为20L10BUFFER缓冲液2L，25MMOLL1MGCL216L，5UTAQ酶05L，25MMOLL1DNTP24L，1

16、0MOLL1引物24L，1LDNA模板，101L无菌水。PCR扩增程序为，94预变性5MIN；94变性45S，各种温度退火50S，72延伸15MIN，42个循环；72延伸7MIN，4保存。取8L扩增产物，用含有01EB的15琼脂糖凝胶电泳，于120V电压下电泳15H，电泳结果在凝胶成像系统中观察并拍照记录。3结果与分析31ISSR引物的筛选根据预实验结果从中筛选出了5条扩增带型清晰且重复性好的引物序列（见表3），并且选定了各引物的最佳退火温度。表3ISSR引物序列、退火温度以及扩增带数TABLE3THESEQUENCESANDANNEALINGTEMPERATURESOFTHEFIVESELE

17、CTEDISSRPRIMERS,ANDTHENUMBERSOFBANDSSCOREDINCAMELLIACULTIVARS引物序列（53）退火温度位点总数多态位点总数多态位点百分率IR6GA8T61616159375IR15GA8CT53112119175IR16AC8TG4811414100IR19CAA8G50312108333IR20GGAGA356418147778432扩增产物的多态性5条ISSR引物对10个川茶花样品共扩增出72条250BP到2000BP之间的条带，其中多态性条带64条，多态位点百分率为8889。5条引物中扩增条带数最少的是IR15和IR19，各有12条，扩增条带数

18、最多的是IR20，有18条，平均每条引物可扩增144条。33品种鉴定利用筛选出的5条引物分别对供试材料进行PCR扩增，并且建立相应的DNA指纹图谱。得到的指纹图谱结果与我们从形态上观察到的结果一样，即氅盔和吊金钟之间相似程度较高，胭脂莲、胭脂鳞和鱼鳞甲之间相似程度较高，泸州大红和泸州二红之间相似程度较高，红佛鼎、紫金冠以及似紫冠之间相似程度较高。331氅盔和吊金钟的分子鉴别氅盔和吊金钟在川茶花中属早花种类，栽培数量少，观赏价值较大，但两者外部形态非常相似。区别仅为氅盔的花色深，花瓣质薄，花径略小成筒状，叶片平展；吊金钟的花色略浅，质厚，花径略大，成喇叭状。氅盔吊金钟图1氅盔和吊金钟的图片从图2

19、中可以看出，5条引物中的4条（分别为IR6、IR15、IR16、IR19）所建立的指纹图谱均能较好地鉴别出氅盔和吊金钟两个品种。如IR6的扩增结果显示氅盔在1800BP、1600BP、1200BP分别存在三条特殊条带，而吊金钟则在1400BP和450BP处存在两条特殊的条带。其他三条引物的扩增结果也表明氅盔和吊金钟为两个独立品种氅盔在IR161200BP、IR161000BP、IR192000BP和IR191000BP有特殊条带，而吊金钟则在IR151100BP和900BP有特殊条带。这些特殊标记的存在或缺失将氅盔和吊金钟这两个相似品种区分开。从上可见氅盔和吊金钟这两个品种虽然外部形态特征难以

20、区分，花色花型相似，但两者的DNA条带有较大的不同，可以通过以上4个中的任意一个引物将其区别开来，说明它们是两个独立的品种。512M12M（1）（2）12M12M（3）（4）图2供试材料ISSRPCR扩增电泳图谱（第1、2和M分别为氅盔、吊金钟和MAKER。）（1）为引物IR6,（2）为引物IR15,（3）为引物IR16,（4）为引物IR19扩增电泳图）332胭脂莲、胭脂鳞、鱼鳞甲的分子鉴别胭脂莲、胭脂鳞在川茶花中属一般品种，栽培比较普遍。三者在花型上极其相似，区别在于胭脂莲的叶绿色，花色较胭脂鳞浅，花瓣边缘内扣；胭脂鳞的叶色深绿，花色深红，花瓣沿中脉有白色条块；鱼鳞甲的叶色深绿，花色深红。2

21、000BP1800BP1600BP1200BP1400BP450BP1100BP900BP1200BP1000BP2000BP1000BP6胭脂莲胭脂鳞鱼鳞甲图3胭脂莲、胭脂鳞、鱼鳞甲的图片图4是胭脂莲、胭脂鳞、鱼鳞甲三个品种通过引物IR20扩增的ISSR指纹图谱。从图中可见在1100BP处，只有胭脂莲有特殊条带存在，胭脂鳞、鱼鳞甲均无条带存在；而在2000BP、1500BP、1200BP、900BP和800BP处胭脂鳞、鱼鳞甲均有条带存在，只有胭脂莲不存在条带。说明胭脂莲和胭脂鳞、鱼鳞甲区别明显，是不同的品种，而胭脂鳞和鱼鳞甲仅在1400BP处有差异，鱼鳞甲有特殊条带出现，胭脂鳞无条带，可见

22、胭脂鳞和鱼鳞甲遗传差异很小，亲缘关系极近，可以推断两者是同一个品种，鱼鳞甲是胭脂鳞的芽变品种。123M图4引物IR20扩增的ISSR指纹图谱（第1、2、3和M分别为胭脂莲、胭脂鳞、鱼鳞甲和MAKER）引物IR6、IR15和IR16扩增图谱只能将胭脂莲从三者中区分出。在IR6770BP、IR6750BP、IR15400BP和IR16800BP只有胭脂莲不存在条带（见表4）。这三个引物也很好地把胭脂莲从三者中区分出来，这也表明三者中胭脂莲与胭脂鳞、鱼鳞甲二个品种是完全不同的，但后两者的相似程度非常高。1100BP2000BP1500BP1400BP1200BP900BP800BP7表4三个品种的I

23、SSR标记TABLE4ISSRMARKERSINTHREECAMELLIACULTIVARS条带大小BP胭脂莲胭脂鳞鱼鳞甲IR6770IR6750IR15400IR16800IR202000IR201500IR201400IR201200IR201100IR20900IR20800注以“”和“”记录特异条带的有无。333泸州大红和泸州二红的分子鉴别泸州大红和泸州二红均为川茶花中的传统品种，花大花期长，花型和外部形态特征极其相似。其中泸州大红的花色淡红，外轮花瓣皱褶，瓣质较薄，雄蕊明显成束；泸州二红的花色大红，外轮花瓣略平展，瓣质略厚，少量雄蕊散生其间。泸州大红泸州二红图5泸州大红和泸州二红的图

24、片泸州大红和泸州二红可以用引物IR20明显地区分开来。从图6可见泸州二红在2000BP和1400BP、1200BP、850BP处有4条明显的特殊条带，而泸州大红没有，因而可以判断两者为不同的品种。812M图6引物IR20扩增的ISSR指纹图谱（第1、2和M分别为泸州大红、泸州二红和MAKER）334红佛鼎、似紫冠以及紫金冠的分子鉴别红佛鼎、似紫冠及紫金冠三者中，红佛鼎的花色略浅，外轮花瓣较平展，叶尖向一边歪；紫金冠的花色略深，外轮大，花瓣略反卷，叶尖下弯，树形开张，枝软而下垂；似紫冠的花和紫金冠相似，树形紧凑，枝质直立。红佛鼎紫金冠图7红佛鼎和紫金冠的图片红佛鼎、似紫冠以及紫金冠在形态上极难区

25、分，即使通过ISSR分子标记也不易判断三者是否为不同品种。利用5条引物对三个品种进行PCR扩增后所得的特征图谱也很相似，其中4条引物均未能显示出三者的差异，只有引物IR20在1900BP左右处所得的条带将红佛鼎与似紫冠及紫金冠区分开（见图8），然而后两个品种利用全部引物扩增所得的指纹图谱都是一样的，没有特异性条带，这表明似紫冠和紫金冠极可能为一个品种，其形态上的微小差异可能是不同地区间环境作用的结果，但也有可能是所用的5条引物还不足以将两者区分开。2000BP1400BP1200BP850BP9123M图8引物IR20扩增的ISSR指纹图谱（第1、2、3和M分别为红佛鼎、似紫冠、紫金冠和MAK

26、ER）4讨论本实验利用ISSR分子标记技术对10个川茶花品种进行了分子鉴定，得到了较高的多态性，很好的将10个品种区分开来了，除了似紫冠和紫金冠二者的相似性极高，难以区分。在茶花分子标记研究方面，宾晓芸等12利用ISSR标记技术分析了金花茶CNITIDISSIMACHI的遗传多样性，用12条引物检测到105个位点，其中79个为多态性位点，占7524；王晓锋等13用RAPD技术对10个温州特色茶花品种的遗传多样性进行了研究，得到105个清晰扩增位点，其中多态性位点87个，多态位点百分率为8286；罗晓莹等18用RAPD检测方法，比较了猪血木、圆籽荷和杜鹃红山茶3个山茶科珍惜濒危物种的遗传多样性，

27、分别获得206305条RAPD谱带，多态位点百分率分别为5180、8026和3883；邓白罗等19用RAPD标记对山茶属红山茶组植物进行了分类研究；申屠文月等20用RAPD分子标记技术对3个山茶花变异品种做了形态鉴定，扩增出29条带，其中15条具有多态性，多态位点百分率为517。可以看到，过去关于茶花的分子鉴定大多是用的RAPD标记法，但是RAPD具有随机引物短10BP、退火温度低、容易导致非特异性扩增、重演性低等缺点，而我们也可以看到RAPD分子标记技术的多态性并不高。ISSR标记法与其相比具有重复性高、稳定性好等优点，它在其他植物中的应用也让我们看到了其较高的多态性，如刘本英等21用ISS

28、R标记法对134份云南茶树资源进行了遗传多样性和亲缘关系分析，18条引物共获得475条稳定的谱带，其中多态性谱带470条占989；王亨洪等22利用ISSR技术对四川、重庆等地12份重要的野生大茶树资源的遗传多态性进行了分析，7条引物共产生146条扩增带，其中多态性条带139条占952；SUSHMA等23用ISSR分析九里香的遗传多样性，得到152个条带，其中136条是多态的，占8974。而本实验的结果也表现出了ISSR分子标记技术具有较高的多态性且简便易操作。由此可以得出ISSR分子标记技术比RAPD标记更适合用于植物遗传多样性和亲缘关系分析等方面，在今后茶花的分子鉴定研究中也可以多用ISSR

29、分子标记法。ISSR分子标记技术呈孟德尔遗传，为显性标记。其在茶花品种间的扩增位点多态性主要是由品种间的差异引起的，因此，ISSR可有效地反映品种间的亲缘关系，可作为亲缘关系较近的茶花品种间的有效分析手段，也适用于分析茶花品种间的遗传多样性。该技术的发展将为茶花种苗真伪鉴别和杂交育种亲本选配带来实质性的好处，可在一定程度上提升茶花相关产业的发展。另外，ISSR分子标记也存在着不足，如在扩增条带有无的判读上受人为主观因素影响较大，不同的人的判读结果不一定一致，如何减少人为因素的影响，使其尽可能的公正客观是其改进的方向。1900BP105小结本实验结果表明该10种山茶品种之间具有较高的遗传相似性，

30、5条ISSR引物所建立的DNA指纹图谱可以较好地区分出大多数相似品种。本实验体现了ISSR分子标记具有多态性高的优点，这也证明在茶花品种间遗传多样性分析中，ISSR分子标记技术是一种有效的手段。参考文献1张宏达,任善湘中国植物志第四十九卷第三分册M北京科学出版社,1998842游慕贤中国山茶中的川茶花品系J花木盆景花卉园艺,2009,2673ZIETKIEWIEZE,RAFALSKIA,LABUDADGENOMEFINGERPRINTINGBYSIMPLESEQUENCEREPEATSSRANCHOREDPOLYMERASECHAINREACTIONAMPLIFICATIONJGENOMICS

31、,1994,2021761834倪穗,李纪元,王强20个茶花品种遗传关系的ISSR分析J林业科学研究,2009,2256236295IANDGODWIN,ELISABETHABAITKEN,LAWRENCEWSMITHAPPLICATIONOFINTERSIMPLESEQUENCEREPEATISSRMARKERSTOPLANTGENETICSJELECTROPHORESIS,1997,18152415286王建波ISSR分子标记及其在值物遗传学研究中的应用J遗传,2002,2456136167DOYLEJJ,DOYLEJLARAPIDDNAISOLATIONPROCEDUREFORSMALL

32、QUANTITIESOFFRESHLEAFTISSUEJPHYTOCHBULL,1987,1911158李恩香,贾文杰,蒋满英等龙百合DNA的提取及ISSRPCR体系的建立J安徽农业科学,2008,36341490714908,149119倪穗,田敏,李纪元等红山茶总DNA提取及ITSPCR扩增条件优化研究J浙江林业科技,2007,272161910李延龙,张明,曹秀敏等ISSR分子标记技术在金叶女贞品种鉴定中的应用J安徽农学通报,2008,14223939,3411冷言峰,马云芳,何桥等几个槐树植物的ISSR鉴定J西南师范大学学报自然科学版,2007,326838612宾晓云,唐绍清,周俊亚

33、等金花茶遗传多样性的ISSR分析J武汉植物学研究,2005,231202613王晓锋,陈根金,郑红玉等基于DNA分子标记技术研究的10个特色茶花品种遗传差异分析J中国农学通报,2009,251918218514刘晓燕,鲁顺保,江玉梅等华东黄杉ISSR引物反应体系的优化与筛选J江西农业大学学报,2007,2961021102515季鹏章,汪云刚,张俊等茶组植物亲缘关系的ISSR分析J西南农业学报,2009,223,58458816罗晓莹,庄雪影,杨跃生杜鹃红山茶遗传多样性的ISSR分析J热带亚热带植物学报,2007,1529310017谈探,金则新,李钧敏等山茶ISSR扩增条件的优化J福建林业科

34、技,2007,342242718罗晓莹,唐光大,许涵等山茶科3种中国特有濒危植物的遗传多样性研究J生物多样性,2005,13211212119邓白罗,谭晓风,漆龙霖等山茶属红山茶组植物的RAPD分析及分类研究J林业科学,2006,425364220申屠文月,陈析丰,马伯军3个山茶花变异品种的形态鉴定和RAPD分析J浙江师范大学学报,2006,29331732121刘本英,王平盛,季鹏章等云南特有茶组植物遗传多样性的ISS研究J云南农业大学学报,2008,23330230822王亨洪,索化夷,杨坚等川渝地区重要野生大茶树遗传多样性的ISSR分析J茶叶科学,2009,29216817223SUSHMAVERMA,TSRANAGENETICDIVERSITYWITHINANDAMONGTHEWILDPOPULATIONSOFMURRAYAKOENIGIILSPRENG,ASREVEALEDBYISSRNALYSISJBIOCHEMICALSYSTEMATICSANDECOLOGY,201116