虎皮鱼Puntius tetrazona暴发性死亡超微病理学研究【毕业设计】.doc

1、本科毕业设计（20_届）虎皮鱼PUNTIUSTETRAZONA暴发性死亡超微病理学研究所在学院专业班级生物技术学生姓名学号指导教师职称完成日期年月目录1引言12材料与方法221材料与试剂2211实验材料2212实验试剂2213实验仪器及器皿222实验方法2221取材2222制作超薄切片23试验结果331虎皮鱼病症332虎皮鱼组织病原观察333电镜下的虎皮鱼各组织超微病理3331肠3332肌肉5333肝脏6334生殖细胞7335胃8336心脏9337肾脏114实验分析与讨论11致谢错误未定义书签。参考文献13摘要虎皮鱼是一种主要的观赏鱼类，近年来，虎皮鱼的养殖技术在我国得到了迅速发展，并且已经成

2、为观赏鱼养殖业的主导养殖品种。但是它的病害问题一直是影响虎皮鱼养殖业的一个重要因素，根据近年的病害调查，发现虎皮鱼的发病率及死亡率都呈上升趋势，给养殖户造成了很大的危害，并且这种现象发生后没有良好的控制方法。近期，从某养殖场取得的大量暴发性死亡的虎皮鱼，除鳍部轻微充血，尾鳍部分断裂外，无其他明显症状。解剖后，部分死鱼脏器有明显囊肿，光学显微镜下观察无寄生虫感染。本研究拟通过分析暴发性死亡虎皮鱼的超微病理变化，分析死亡原因，为虎皮鱼病害的防治提供理论依据。取濒死虎皮鱼的肠、肌肉、肝脏、生殖组织、胃、心脏、肾脏制作超薄切片，在透射电镜下观察超微病理变化，发现大量病毒感染，各脏器均有明显病变。关键词

3、虎皮鱼；透射电镜；超微病理ABSTRACTPUNTIUSTETRAZONAISAMAJORORNAMENTALFISHINRECENTYEARS,FARMINGPUNTIUSTETRAZONADEVELOPEDRAPIDLYINCHINAANDHASBECOMETHELEADINGAQUACULTURESPECIESOFORNAMENTALFISHESBUTTHEMOSTIMPORTANTFACTORTHATAFFECTITFORFARMINGTHEMISTHEPROBLEMSOFDISEASESOFFISHESACCORDINGTOTHEINVESTIGATIONOFTHEDISEASESO

4、FFISHESINRECENTYEARS,WEFOUNDTHATTHEREISATRENDTHATTHERATEOFILLANDDEATHOCCURSINMOREANDMOREFISHESITBRINGSTHEFARMERSLOTSOFLOSSES，ANDTHEYHAVENOGOODMETHODSTOCONTROLTHISPHENOMENONSOMETIMESAGO,WEOBTAINEDALARGENUMBEROFPUNTIUSTETRAZONATHATTHEYOCCURREDTHESPREADDEATHFROMAFARMWEFOUNDTHATTHEREARENOOTHERCHARACTERI

5、STICSEXCEPTTHATTHEREISCONGESTIONINTHEIRFINSANDPARTSOFFINSWEREFRACTUREDAFTERDISSECTINGTHEM,THEREISNODIFFERENTPHENOMENONFROMTHEHEALTHFISHESEXCEPTFROMSOMEFISHES,ORGANSWERECYSTWITHTHEOPTICALMICROSCOPE,WEDIDNOTFINDTHEORGANSOFTHESEFISHESWEREINFECTEDBYVIRUSINORDERTOFINDOUTTHENOSOGENESIS,THETEMWASUSEDTOOBSE

6、RVETHEPUNTIUSTETRAZONA,STISSUESWECANFINDTHATTHEFISHESWEREINFECTEDBYVIRUSANDTHEORGANSWERECHANGEDOBVIOUSLYBYOBSERVINGSOMEPARTSOFTHEPUNTIUSTETRAZONA,STISSUESINTESTINE,MUSCLE,LIVER,REPRODUCTIVETISSUES,STOMACH,HEART,KIDNEY,WECANANALYSISTHEULTRASTRUCTURALPATHOLOGYOFPUNTIUSTETRAZONA,INORDERTOOFFERBASISONTH

7、EDETERMINATIONOFTHECAUSEOFDEATH,ANDGIVEMORETHEORETICGUIDANCEOFDISEASETOCONTROLTHEMINTHEFUTUREKEYWORDSPUNTIUSTETRAZONTEMULTRASTRUCTURAL11引言我国有着悠久的养殖观赏鱼的历史1。虎皮鱼（PUNTIUSTETRAZONA）属鲤科，又名四间鱼、四间鲫鱼。原产地马来西亚，印尼苏门答腊岛、加里曼丹岛等内陆水域。它是一种饲养较普遍的鱼种。鱼长57厘米，呈纺锤形。身体匀称，色彩鲜艳，以金黄色做底色，头部、腹部、尾部前端贯有四条竖向黑条纹，随光线角度不同会闪现出金属般的光芒。成

8、鱼的背鳍、胸鳍、腹鳍及尾部的边缘都呈现出亮丽的红色，很有观赏价值。作为一种重要的观赏鱼，虎皮鱼的商业价值非常高。随着养殖规模的扩大，虎皮鱼在养殖过程中出现病害的频率也越来越高。目前，对虎皮鱼的病理研究还鲜有报道。近几十年来，有关于鱼类暴发性死亡的研究有黄琪琰等2，3在对鱼类流行病学方面进行了深入透彻的分析；徐伯亥等46在鱼类病原及防治方法上进行了深入的探索；李凯彬,石存斌,李新辉,黄志斌,余德光7对眼斑拟石首鱼暴发性传染病病原进行了初步的研究，列举了流行的鱼类病病毒，如鲑鳟鱼类经IPNV感染后,导致鱼苗、鱼种有较高的死亡率。据研究,IPNV能感染37种硬骨鱼类包括海水鱼和淡水鱼及3种虾类8,引

9、起近乎世界范围的流行,给鱼病的防治带来困难。并且，通过这项研究，初步认定虹彩病毒是眼斑拟石首鱼暴发性传染病的主要致病原；梅广海，王羽，刘加成，刘厚军，王立峰等9总结了对鲫鱼暴发性斜管虫病的诊治技术；2010年第一期的科学养鱼对2009年东平湖网箱养殖鳜鱼暴发性死亡流行情况进行了分析，分析内容包括病鱼的主要症状、可能诱发的病因、以及防治措施。由此可见，鱼类的暴发性疾病及死亡在近些年来时有发生，所以，对其病症的总结，发病原因的探究及预防这些鱼类发病及死亡所采取的措施已成为当今生物科学研究的重要课题之一。但是，在已有的报道中，对发病鱼的超微病理方面的分析与讨论相对而言较少，现已有的相关方面的报道有袁

10、莉民，李恕，丛宁等运用电子显微的技术,对患暴发性流行病鲫鱼的肝、心组织进行超薄切片的观察,发现发病鲫鱼的肝、心组织结构发生了明显的变化,其变化与一些高等动物的相应组织在急性致病因子作用下的病理变化相似；2007年，卓玉琛在其硕士毕业论文中，对欧洲鳗鲡的败血症病理学和组织化学进行研究，探讨了败血症的发生过程和发生原因。患有败血症的欧洲鳗鲡的一些重要器官的超微病理变化表现为心肌纤维呈扭曲状态、部分溶解、局部出现空泡现象，细胞核肿胀、胞质较疏松，出现空隙，肌节结构模糊，线粒体呈空泡化；鳃中大量细胞呈崩解状态，细胞的界线已经消失，仅见崩解后的膜质结构；肝细胞，细胞核的染色质、核膜模糊、膜间隙增大、断裂

11、，胞质疏松，核糖体增多，脂肪滴多且大；脾脏中，淋巴细胞核的异染色质边集化，核膜破裂，红髓区红细胞核固缩、胞质稀疏，肠粘膜的微绒毛排列缺失，不整齐；肾小球毛细血管内皮细胞增厚、破裂，上皮细胞足突融合且微绒毛化现象严重，胞浆内的线粒体呈严重空泡化现象，肾小管胞质中的线粒体空泡化，溶酶体、次级溶酶体、残余小体增多等。在虎皮鱼的养殖过程中，时常发生各种各样的病变甚至死亡。本实验分析了从养殖场中取得的暴发性死亡虎皮鱼样本的超微病理变化，从而为确定发病或死亡虎皮鱼原因奠定基础，也为病害的防治提供理论依据。22材料与方法21材料与试剂211实验材料取发生暴发性死亡虎皮鱼为实验用材料，另取健康虎皮鱼做对照观察

12、。212实验试剂01MPBS、各种不同浓度的酒精、25戊二醛溶液、1锇酸、醋酸铀、柠檬酸铅、EPON812包埋剂等。01MPBS8GNACL、02GKCL、144GNA2HPO4、024GKH2PO4，溶于1000ML蒸馏水中，PH74。25戊二醛取25戊二醛溶液用01MPBS稀释。213实验仪器及器皿解剖刀、镊子、剪刀、解剖针、解剖镜、单面刀片、酒精灯、染色缸、冰箱、电炉、洗净的青霉素空瓶、载玻片、盖玻片、玻璃器皿、SARTORIUS电子天平、切片刀、KDBM电脑生物组织包埋机、KD型轮链式切片机、KDT电脑生物组织摊片机、NIKONECLIPSE80I光学显微镜、RMCPOWERTOMEX

13、L超薄切片机、日立S3400N扫描电子显微镜等。22实验方法221取材观察病鱼的外在病症，后解剖，并在光学显微镜下观察各脏器。取肠、肌肉、肝脏、生殖组织、胃、心脏、肾脏为样本组织。用新的锋利刀片切小，修成1MM1MM1MM的组织块。222制作超薄切片将修好的肠、肌肉、肝脏、生殖组织、胃、心脏、肾脏组织块移至戊二醛锇酸固定液中，4下，于25戊二醛中固定2H，后用1锇酸固定液黑暗下固定1H，冷PBS缓冲液漂洗20MIN，PH74。乙醇梯度脱水15乙醇15MIN，30乙醇15MIN，50乙醇15MIN，70乙醇15MIN，85乙醇15MIN，95乙醇15MIN，100乙醇10MIN（二次）。脱水后的

14、组织块用EPON812环氧树脂包埋，烘箱内烘干，制成包埋块。用超薄切片机将包埋块进行切片，用醋酸铀柠檬酸铅对其进行双染色，于室温下1520MIN透射电镜观察，进行拍照并保存结果。33试验结果31虎皮鱼病症从某养殖场取得的大量暴发性死亡的虎皮鱼，除鳍部轻微充血，尾鳍部分断裂外，无其他明显症状。解剖后，部分死鱼脏器有明显囊肿，光学显微镜下观察无寄生虫感染。（如下图1、图2所示）图1图232虎皮鱼组织病原观察对发病虎皮鱼进行组织病原观察，发现无寄生虫，无细菌感染，但可看到大量病毒。（如图3所示）图333电镜下的虎皮鱼各组织超微病理331肠肠是下消化道重要的组成部分，也是食物消化和吸收的主要部位，是消

15、化吸收系统中重4要的器官之一。肠细胞的结构不完整会直接影响虎皮鱼正常的生理活动。透射电镜下可观察到暴发性死亡虎皮鱼肠细胞线粒体肿胀，嵴断裂，减少，线粒体不同程度的空化；内质网变性，粗面内质网核糖体脱落；细胞核，核大，不规则，偏向一侧；核质固缩趋边化，核仁模糊不确定，或有消失迹象。核被膜凹陷、不规则；线粒体发生变性，形成髓鞘样结构，线粒体固缩，体积缩小，周围形成空隙。这些不同于正常虎皮鱼超微结构的病变会严重影响虎皮鱼各细胞器的生理生化作用及其所参加的整个生命活动。戴瑜来、吕永林、李凯、陶震、王国良10等对正常大黄鱼的体肠内壁细胞进行了研究，即正常大黄鱼的肠内壁细胞，游离面有较为明显的微绒毛,它们

16、排列整齐呈纹状,即纹状缘。他们还对发病大黄鱼的鱼肠内壁吸收细胞特点进行了比较研究，研究表明发病鱼的肠内壁吸收细胞已经破裂消解,几乎没有完整的细胞结构，肌层也失去了原有结构,经研究还发现，病鱼肌纤维散乱,呈现溃疡状态。细菌通过内壁感染组织,此结果与本实验中分析暴发性死亡虎皮鱼的肠细胞超微结构结果相似。图11图12图13图14图11透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肠细胞，线粒体肿胀，嵴断裂，减少，线粒体不同程度的空化（黑色箭头），无法维持线粒体的基本生命活动，以此影响虎皮鱼的正常的代谢活动。图12透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肠细胞，内质网变性，粗面内质网核糖体脱落。线粒体肿胀，趋于空化（黑色箭头）

17、。图13透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肠细胞，核大，不规则，偏向一侧。核质固缩趋5边化（长黑色箭头），核仁模糊不确定，或有消失迹象。核被膜凹陷、不规则（短黑色箭头）。图14透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肠细胞，线粒体发生变性，形成髓鞘样结构（长黑色箭头），线粒体固缩，体积缩小，周围形成空隙（短黑色箭头）。332肌肉健康虎皮鱼的肌肉细胞,排列紧密而规则,有较多的线粒体，内质网排列整齐，胞浆分布均匀。作为一种重要的细胞器，线粒体不仅是细胞的呼吸代谢中心，更是重要的能源中心，它对各种细胞损伤极其敏感，与细胞各种生命活动有着紧密的关系；内质网（ER）是普遍存在于真核细胞中的一种细胞器，细胞处于功能活跃

18、期时，可观察到较丰富的内质网。上述细胞器在虎皮鱼的生命活动中有着重要的作用，但患病或死亡的虎皮鱼细胞中，这些细胞器都或多或少受到损坏，使细胞中各项生命活动都无法进行。透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼的肌肉细胞，可见患病虎皮鱼肌肉细胞肌纤维断裂，局部肌肉纤维溶解为不规则状；线粒体肿大，嵴不规则断裂，细胞结构破坏，其线粒体结构无法维持正常的生命活动；还可见，肌肉细胞肿大，内质网扩张，内质网核糖体脱落，分布不均匀，部分细胞溶解成空泡状结构；还可观察到有电子致密颗粒存在的现象。这些细胞器对生物的生理活动有着决定性的作用，丛宁，袁莉民11在研究罗氏沼虾“白体病”肌肉组织超微病理时得出肌肉细胞线粒体代谢失调

19、会导致生物体能量代谢障碍。因此，线粒体形态结构的改变，直接影响到细胞正常的生命活动。肌肉细胞其他结构的破坏和不完整也直接或间接导致其功能不能维持正常，影响生物的健康。图21图226图23图24图21透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肌肉细胞，可见患病虎皮鱼肌肉细胞肌纤维断裂，局部肌肉纤维溶解为不规则状。图22透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肌肉细胞，可见患病虎皮鱼肌肉细胞中线粒体肿大，嵴不规则断裂，细胞结构破坏，其线粒体结构无法维持正常的生命活动。图23透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肌肉细胞，可见患病虎皮鱼肌肉细胞肿大，内质网扩张，内质网核糖体脱落，分布不均匀，部分细胞溶解成空泡状结构。图24透射电

20、镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肌肉细胞，可见患病虎皮鱼肌肉细胞中线粒体增多、肿胀，排列紊乱，嵴不规则断裂。还可观察到电子致密颗粒（黑色箭头）。333肝脏肝脏是机体重要器官之一，它具有代谢、合成、分泌、解毒等多种功能，行使这些功能的基本结构单位为肝小叶。对于肝脏超微病理的研究已近四十年，肝脏是电镜技术应用于医学生物学中研究最早的生物器官之一。机体多种疾病，无论是原发性或继发性的，也无论是化学因素、生物因素还是创伤性因素，都会直接或间接地影响到肝脏细胞的亚微结构，所以对肝脏的研究具有重要意义。正常鱼的肝脏细胞,边界清楚，呈多边形。细胞质中含有丰富的细胞器及其它内含物,有数量较多的呈圆形或椭圆形的线粒体,

21、嵴的排列规则且清晰。细胞核位于细胞中央,呈正常圆形。此外，还富含粗面内质网和滑面内质网,它们绕细胞核质排列成环状。经观察发现暴发性死亡虎皮鱼的肝细胞结构被严重破坏,如滑面内质网聚集，肿胀，排列无序；细胞核肿大，核内物质外溢，核仁凸出，核质趋边化，细胞核位于细胞一侧，而不是位于中央；细胞结构不完整，细胞膜破裂，细胞裂解，胞内物质外溢，个别细胞内线粒体肿胀；有明显纤维化现象。7图31图32图33图34图31透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肝脏细胞，滑面内质网聚集，肿胀，排列无序；细胞核肿大，核内物质外溢，核仁凸出（黑色箭头）。图32透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肝脏细胞，可见细胞结构不完整，细胞膜破

22、裂，细胞裂解，胞内物质外溢，个别细胞内线粒体肿胀，嵴增多（黑色箭头）。图33透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肝脏细胞，肝细胞细胞核肿胀变大，核质趋边化，核仁不明显或消失，核周围线粒体肿胀，嵴明显增多，内质网受到损害。图34透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肝脏细胞，可见细胞核增大，位于细胞一侧，不是位于中央；核质分布不均，向边缘富集，有明显纤维化现象。334生殖细胞透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼生殖系统细胞，细胞核变形，核仁不明显或消失，核周围有大量初级溶酶体和次级溶酶体，胞内细胞器溶解成小泡，细胞结构不完整；胞内纤维化现象严重。此前尚无有关虎皮鱼生殖细胞超微病理的报道，相关鱼类的报道也很少。对此唯

23、一的了解是MMANJUSHA等12报道了对虾卵巢组织被病毒侵染后结缔组织坏死，细胞核肿大，而卵母细胞中无肿大细胞核，说明病毒侵染细胞是来自于卵巢结缔组织和卵母细胞病毒释放13。而在本实验中，生殖细胞本身的结构发生了变化，与正常的虎皮鱼生殖细胞超微结构相比，在暴发性死亡虎皮鱼的生殖细胞超微结构中，核质、细胞器都有不同程度的异常，8这使生殖细胞的基本功能不能保证完成，最终导致生殖组织或生殖系统不能完成自生的生理功能，从而影响虎皮鱼正常的生命活动。图41图42图41透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼生殖系统细胞，细胞核变形，核仁不明显或消失，核周围有大量初级溶酶体和次级溶酶体，胞内细胞器溶解成小泡，细胞

24、结构不完整。图42透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼生殖系统细胞，胞内纤维化现象严重，细胞器溶解成小泡，细胞结构严重不完整。335胃胃系消化道主要的组成器官，具有储存食物并进行消化的功能，发生于胃的疾病甚多，对胃病的研究，也深化到超微病理层面。本实验中，透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼的胃部细胞，可见胃细胞空泡化严重；细胞核不规则，核肿大，核质严重不均匀，核电子密度高，核质趋边化，部分细胞器溶解成空泡状；细胞内有大量脂滴聚集，部分线粒体变形，嵴断裂，或消失，有多数细胞器空泡化；粗面内质网扩张，核糖体脱落，细胞结构不完整；核仁边缘有突起，不规则。对鱼类胃部的超微病理研究的报道还很少见，对动物胃部超微病

25、理的研究，主要以人类、甲壳类动物及鼠类方面为主。这些已知的研究结果均表明，胃细胞的超微结构变化能影响动物的摄食活动。图51图529图53图54图55图56图51透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼胃部细胞，胃细胞空泡化严重。图52透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼胃部细胞，细胞核不规则，核肿大，核质严重不均匀，核电子密度高，核质趋边化，部分细胞器溶解成空泡状。图53透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼胃部细胞，细胞内有大量脂滴聚集，部分线粒体变形，嵴断裂，或消失，有多数细胞器空化。图54透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼胃部细胞，细胞器溶解成小泡，细胞结构不完整。图55透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼胃部细胞，粗面

26、内质网扩张，核糖体脱落，部分细胞器空化，细胞结构不完整。图56透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼胃部细胞，核仁边缘有突起，不规则，和周围核质中有空化小泡。336心脏心肌的超微病变在心肌疾病中占有重要的地位，对了解心肌疾病的发生，发展过程及临床诊治和预后判断均有重要意义。透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼心肌细胞，可见肌原纤维有多处断裂，肌节严重受损，使之变得极不完整,呈带状崩解状态,各收缩带间充满了移位线粒体，线粒体肿胀，多处嵴断裂，呈不规则状排列，部分细胞器空泡化；线粒体内，嵴排列不整齐，线粒体膜破裂，10内含物质外溢，或线粒体空泡化。丛宁,袁莉民，李恕在研究鲫鱼暴发性流行病肝心组织的超微病理变化中

27、，对发病鲫鱼心脏组织的超微病理分析与本实验的结果相似，并指出病鱼的心肌结构变化与其它脊椎动物心肌结构变化相似，都是由CO中毒、一过性心肌缺血和内、外源儿茶酚胺过多等因素引起的，肌原纤维断裂，呈带状崩解，属不可逆性凝固性肌溶解，并以肌原纤维段状凝聚、嵴密型的小线粒体增多、胞核肿胀后向中间游走、染色质边集等为特点；心肌细胞变性的基本表现还包括泡状脂滴的出现，这种现象与部分线粒体的致密变性相关联，心肌细胞里众多的嵴密型的小线粒体，虽然有完整的结构，但其功能可能有些缺陷，不能正常地进行脂肪酸的氧化，从而导致了心肌细胞内脂质的堆积14。图61图62图63图64图61透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼心肌细胞

28、，可见由于肌原纤维有多处断裂，从而而变得非常不完整,呈带状崩解状态。各收缩带间充满了移位的线粒体，线粒体肿胀，多处嵴断裂，呈不规则状排列，部分细胞器空泡化。图62透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼心肌细胞，线粒体内嵴排列不整齐，线粒体膜破裂，内含物质外溢，嵴断裂。图63透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼心肌细胞，肌纤维严重断裂，肌丝排列松散，线粒体裂解，嵴排列混乱，或线粒体空泡化。图64透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼心肌细胞，肌纤维扭曲断裂，肌节受损，间带间充满移位的多嵴线粒体，部分线粒体及其它细胞器呈空泡状或已裂解。11337肾脏电镜技术在肾脏上的应用已越来越普遍和广泛，对肾脏疾病阐明发病机制发挥了

29、重要的作用。同时，电镜对一些光镜认识不清的肾病能起到确定诊断、辅助诊断和分型作用，对肾脏肿瘤的诊断、分型、识别组织来源、判断预后等都起到重要作用。透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肾脏细胞，可见细胞核肿大，核仁凸出，核膜裂解，不规则，核周围有大量空泡状细胞器，胞质内有脂滴，线粒体内嵴排列杂乱，或膜破裂，线粒体内物质外溢。戴瑜来、吕永林、李凯、陶震、王国良在大黄鱼溃疡病的组织病理和超微病理研究中研究了肾小管的超微组织病变，将正常大黄鱼的肾小管与发病鱼的肾小管的超微结构作对比，指出正常的鱼的肾小管由单层上皮细胞构成，游离端有刷状缘，细胞核呈圆形且靠近基底，上皮细胞界限清晰，排列紧凑且整齐。但是病鱼的肾

30、小管上皮细胞却发生了形变，还发现刷状缘纤毛排列紊乱，断裂，部分胞核溶解后消失。与此同时，细胞内的颗粒变性现象明显，溶酶体增多，一些内源或外源性的物质在溶酶体内得到贮积，细胞里有不同程度的空泡10等。图71图72图71透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肾脏细胞，可见细胞核肿大，核仁凸出，核膜裂解，不规则，核周围有大量空泡状细胞器。图72透射电镜下观察暴发性死亡虎皮鱼肾脏细胞，胞质内有脂滴，线粒体内嵴排列杂乱，或膜破裂，线粒体内物质外溢，部分细胞器空泡化。4实验分析与讨论关于虎皮鱼的超微病理方面的分析、虎皮鱼的病理特征及其致病因素等还鲜有报道。但关于鱼类的这三方面的相关研究，并不少见。影响鱼类健康的因

31、素有许多陈雅芳等15研究表明，宿主的体质及免疫系统可能会被水体细菌的胞外蛋白酶破坏，BALEBONA等16对溶藻弧菌致病性的研究结果表明,溶藻弧菌的胞外产物在感染鱼体时会发挥巨大的作用，其胞外产物能引起组织的损伤,促进细菌的侵染。鄢庆枇等17的研究表明，菌体内的脂多糖在鱼体内达到一定浓度的时可以使组织严重损害，以加快细菌的蔓延扩散并发展为全身性的病症。吴淑勤，李新辉，潘厚军，等报道感染后的鳜鱼，病毒主要在脾脏18。在以往的报道中，以分析感染鱼类的致病因子，造成鱼病害的物理因素，及其相应的防12治措施等居多，对于鱼病变的超微结构分析还很少，本实验以暴发性死亡的虎皮鱼为材料，解剖、切片后观察各组织

32、中的超微变化，并进行分析。透射电镜下发现暴发性死亡的虎皮鱼同正常虎皮鱼的超微结构有明显不同，主要集中在以下几个方面暴发性死亡虎皮鱼肠细胞线粒体肿胀，嵴断裂，线粒体不同程度的空化；肌肉细胞肌纤维断裂，局部肌肉纤维溶解为不规则状；还可观察到有电子致密颗粒存在的现象；肝细胞结构破坏严重,细胞核肿大，核内物质外溢，核仁凸出，核质趋边化，细胞核位于细胞一侧，而不是位于中央。胞内有明显纤维化现象；生殖系统细胞，细胞核变形，核仁不明显或消失，核周围有大量初级溶酶体和次级溶酶体，胞内细胞器溶解成小泡，细胞结构不完整；胃部细胞，细胞器空泡化严重，细胞内有大量脂滴聚集，部分线粒体变形，嵴断裂，或消失；粗面内质网扩

33、张，核糖体脱落；心肌细胞，可见肌原纤维部分断裂，肌节严重受损，变得非常不完整,并且呈带状崩解状,各收缩带间充满了移位的线粒体，线粒体发生肿胀，多处嵴断裂，呈不规则状排列，部分细胞器空泡化；肾脏细胞，可见细胞核肿大，核仁凸出，核膜裂解，不规则，核周围有大量空泡化的细胞器，胞质内有脂滴，线粒体内嵴排列杂乱，或膜破裂，线粒体内物质外溢。细胞膜是维持细胞结构和功能的重要结构，细胞膜上具有受体和催化作用的酶，是细胞与外界环境的屏障，担负细胞内外物质运输、代谢等功能。细胞膜的溶解破坏可能会导致细胞缺少生化反应所必需的酶，也会破坏胞膜上钠、钾泵的功能，从而影响ATP酶分解ATP释放主动运输所需的能量，同时也

34、会影响细胞吞噬、代谢等其它功能；细胞核是细胞的控制中心，在细胞的代谢、生长、分化中起着重要作用，细胞核一旦发生病变，有可能会导致整个细胞的凋亡或生物体的死亡；线粒体是细胞结构中重要的细胞器之一，线粒体的形状大小与外界环境有关，其中嵴的数量多少与器官、组织的功能有关，心肌细胞发生病理变化时，线粒体嵴形成管状髓鞘样结构。同时线粒体是细胞能量供给的重要细胞器，线粒体膜和基质内含有大量酶，包括大量生物氧化酶系，形成腺苷三磷酸（ATP）19。因此当线粒体发生肿胀、嵴断裂甚至呈空泡状等病理变化时，ATP产生受到抑制，细胞得不到其能量的提供，也就不能进行正常的生理生命活动；内质网是产生蛋白质（包括酶）的重要

35、场所20，粗面内质网上覆盖有核糖体，病变的粗面内质网上的核糖体脱落，影响蛋白质合成等细胞正常的生理功能；通过对暴发性死亡虎皮鱼的超微病理研究和对死亡虎皮鱼各器官组织细胞超微结构进行分析，为更深入探求暴发性死亡虎皮鱼的病因或死因奠定基础，也为以虎皮鱼为代表的观赏鱼类疾病的防治及养殖提供一些理论依据。要对虎皮鱼死因进行更深入的分析，还需要更进一步的研究工作。13参考文献1王玉堂观赏渔业的发展概况J中国水产,2006,60115172黄琪琰,范丽萍,郑德崇异育银卿溶血性腹水病的组织显微病理研究水产学报,1991,1532122183黄琪琰,金丽华,吴建农,等主要淡水养殖鱼类暴发性流行病的流行特点及防

36、治方法鱼类病害研究,1992,132144徐伯亥,殷战,陈燕乐,等鲢鳙鱼流行性传染病的流行病学和细菌病因的初步研究鱼类病害研究,1991,132145姜礼燔暴发性出血病病因及防治措施探讨水产科技情报,1991,1861621646李连祥鲢、鳙暴发性鱼病的病因及防治鱼类病害研究，1992,14126287李凯彬，石存斌，李新辉，黄志斌，余德光眼斑拟石首鱼暴发性传染病病原初步研究J中国水产科学,2002,90156598STACEYRGORE，DVMNUTRITIONALSUPPORTOFFISHJJOURNALOFEXOTICPETMEDICINE，200642642689梅广海，王羽，刘加成，

37、刘厚军，王立峰，路夕平城郊垂钓鱼池鲫鱼暴发性传染病病原初步研究J中国水产科学,2002,901565910戴瑜来、吕永林、李凯、陶震、王国良大黄鱼溃疡病的组织病理和超微病理研究J海洋生物学,2010,290517417911丛宁,袁莉民罗氏沼虾“白体病”肌肉组织的超微病理变化J水产养殖,2005,263323412MMANJUSHA,RESMYVARGHESE,ROSAMMAPHILIP,AMOHANDASETALPATHOLOGICALCHANGESINFENNEROPENAEUSINDICUSEXPERIMENTALLYINFECTEDWITHWHITESPOTVIRUSANDVIRUSM

38、ORPHOGENESISJOURNALOFINVERTEBRATEPATHOLOGYJ200910222523213邹清,秦骥,朱小明锯缘青蟹一种球状病毒的分离和组织病理观察J厦门大学学报自然科学版,2007,46614丛宁,李恕，袁莉民鲫鱼暴发性流行病肝心组织的超微病理变化J江苏农学院学报,1994,153707315陈雅芳，王军，苏永全，等养殖石斑鱼溃疡病病原哈维氏弧菌胞外产物的研究J海洋科学,2006,3010303416GREGORYALEWBART，MS，VMD，DIPACZMBACTERIAANDORNAMETALFISHJSEMINARSINAVIANANDEXOTICPETMEDICINE，20011485617鄢庆枇，苏永全，王军，等溶藻弧菌脂多糖对大黄鱼的毒性与免疫保护性试验J台湾海峡，2003，22216316718吴淑勤，李新辉，潘厚军，等鳜鱼暴发性传染病病原研究J水产学报,1997，21增刊566019武忠粥超微病理学基础M北京北京人民卫生出版社，1990202220史景泉，陈意生，卞修武超微病理学。化学工业出版社，20053147