花生中黄曲霉素的分析【毕业设计】.doc

1、本科毕业设计（20_届）花生中黄曲霉素的分析所在学院专业班级食品质量与安全学生姓名学号指导教师职称完成日期年月2目录1引言12材料与方法321试剂与材料3211原材料3212试剂3213主要仪器322实验方法3221在常温下花生中黄曲霉素的变化3222湿度对花生中黄曲霉素的影响3223温度对花生中黄曲霉素的影响4224对花生货架期的预测423黄曲霉素的检测方法4231样品处理4232分析检测程序43结果与分析431标准曲线的绘制432常温下花生中黄曲霉素的变化533湿度对花生中黄曲霉素的影响634温度对花生中黄曲霉素的影响735花生货架期的预测84小结85展望9致谢错误未定义书签。参考文献10

2、3摘要黄曲霉毒素是一类有毒致癌化合物,易造成粮油类食品及其制品的污染,而花生作为一种重要的优质食用油原料极易在存储期内受到黄曲霉毒素的污染，给人类健康造成严重威胁，带来食品安全隐患，故寻求一种快速精确的检测方法对其进行定性定量分析是极为重要的。目前国际认定的广泛应用的检测方法很多，相比于各种传统方法，本实验采取了基于免疫学原理的酶联免疫快速检测方法对不同储藏条件下花生中的黄曲霉素进行测定分析，用该方法可以准确、快速的检测出花生中黄曲霉素B1的含量，进而绘制固定储藏条件下花生中黄曲霉毒素含量的变化曲线，寻求该条件下毒素含量的变化规律，以用于花生储藏时间的控制，保证食用的安全性，经实验结果分析，初

3、步预测在常温条件下花生可以贮存612个月，且可以安全食用。关键词黄曲霉素B1；酶联免疫分析法；花生。ABSTRACTAFLATOXINISAKINDOFTOXICCARCINOGENICCOMPOUNDSWHICHEASILYCAUSECONTAMINATIONINGRAINFOODS,WHILEASANIMPORTANTQUALITYEDIBLEOILRAWMATERIALS,PEANUTSEXTREMELYEASILYRECEIVEAFLATOXINCONTAMINATIONINITSSTORAGEPERIOD,BEINGASERIOUSTHREATTOHUMANHEALTHANDBRIN

4、GINGHIDDENTROUBLEINFOODSAFETY,SOSEEKINGARAPIDANDACCURATEDETECTIONMETHODSOFQUALITATIVEANDQUANTITATIVEANALYSISISEXTREMELYIMPORTANTINCURRENT,MANYINTERNATIONALRECOGNITIONTESTINGMETHODSAREWIDELYUSEDANDCOMPAREDWITHTHETRADITIONALMETHODS,WEADOPTENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYFASTDETECTIONMETHODFORAFLATOXININ

5、PEANUTSUNDERDIFFERENTSTORAGECONDITIONS,WHICHISBASEDONIMMUNOLOGYPRINCIPLES,CANACCURATELYANDRAPIDLYDETECTTHECONTENTOFAFLATOXINB1INPEANUTSTHENDRAWTHECURVESOFCHANGINGCONTENTOFAFLATOXININPEANUTSUNDEREACHFIXEDSTORAGECONDITIONANDSEEKTHECHANGERULESOFTOXINSCONTENTTOCONTROLTHESTORAGETIMEOFPEANUTSANDENSURETHEE

6、DIBLESAFETYBYANALYSISINGTHEEXPERIMENTALRESULTS,PRELIMINARYFORECASTTHATPEANUTSCANSTOREFOR612MONTHSANDISSAFETOEATUNDERNORMALTEMPERATURECONDITIONKEYWORDSAFLATOXINB1ENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYPEANUTS11引言黄曲霉毒素（AFLATOXINS,AF）是曲霉属中的黄曲霉和寄生曲霉所产生的一类有毒的次级代谢产物。于1960年研究火鸡X病时首次被发现，在此以后不断地研究表明，这类毒素具有极高的致癌性，对动物有

7、着巨大的危害1。在自然界中，黄曲霉的生长要求不高，在有氧条件下，花生和玉米是其最好的繁殖场所，黄曲霉毒素是二氢呋喃香豆的衍生物，到目前为止，已发现黄曲霉毒素至少有黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、Q1等17种结构相似的化合物，黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2是粮油制品中黄曲霉毒素的主要存在形式，其中以黄曲霉毒素B1的毒性和致癌性为最强2，黄曲霉毒素在1993年被世界卫生组织（WHO）癌症研究机构（INTERNATIONALAGENCYOFRESEARCHONCANCER,IARC）认定为I类致癌物质3。图1黄曲霉毒素化学结构FIG1CHEMICALSTRUCTUREOFAFL

8、ATOXIN黄曲霉毒素耐热，其产生的最适温度为1214，相对湿度为8687。黄曲霉菌产毒量在2434之间最高，黄曲霉在48小时内快速生长，当霉菌处于低温、干燥或与其他霉菌竞争时，就会产生黄曲霉毒素4。黄曲霉毒素难溶于水、己烷、乙醚和石油醚，易溶于甲醇、氯仿、乙腈和二甲基甲酰胺等有机溶剂，其分子量为312346，熔点为200300。黄曲霉毒素对光、热和酸稳定，通常热处理对其破坏程度很小，只有在熔点温度下毒素才发生分解。黄曲霉毒素遇碱能够迅速分解，PH为910时可迅速分解成几乎无毒的盐，且此反应可逆，即在酸性条件下又可以复原，纯毒素在高浓度下稳定，而低浓度的纯毒素在紫外辐射下易分解，在自然情况下食

9、品中污染的黄曲霉毒素有很强的稳定性，B1毒素在268269时才可以分解。黄曲霉毒素在紫外线照射下，毒素能发出很强的荧光，其中B1、B2在紫外线下发出紫蓝色荧光，而G1、G2发出黄绿色荧光。黄曲霉毒素在自然界中分布广泛，普遍存在于各种食品和粮食中，特别是花生、大豆、玉米等农产品中，而由于在人体中黄曲霉毒素不易被分解，所以即使是误食了低浓度的黄曲霉毒素，在毒素累积到一定数量后也会引发癌症。黄曲霉毒素对作物的污染始于田间，由于不良储藏条件和过高含水量，作物在收获后会出现霉菌爆发和毒素污染。黄曲霉毒素的污染及其程度受季节和地理因素以及农作物生长、收割、储存等条件影响，潮湿地区更适合于毒素产生。产毒霉菌

10、可以在各种各样的食物中生长，特别是植物性食物，如玉米、花生、棉籽等。一般来说，谷物水分在14以上（花生水分在9以上）最适合黄曲霉的繁殖和生长5。黄曲霉毒素毒性非常强，其毒性相当于10倍的氰化钾，68倍的砒霜，100倍的敌敌畏，对人和动物的肝、肾脏有很大危害，还对动物胚胎有影响，会降低产奶和产蛋量，造成免疫抑制和反复感染，此外乳牛的奶中还会产生黄曲霉毒素B1的代谢产物M1，对不同动物黄曲霉毒素B1、M1、G1可引起各种不同的癌症6。摄入被该毒素污染的食品可诱发人类的原发性肝癌、胃癌及肺癌等，致癌时间最短的仅为24周；接2触黄曲霉毒素后，乙肝病毒携带者引发肝癌的几率是一般人的60倍。食用黄曲霉毒素

11、污染的食品后，可能会出现发热、腹痛、呕吐等症状，严重的在23周内会出现肝脾肿大，肝区疼痛肝功能异常等肝病症状，也可能出现心脏扩大，肺水肿，甚至痉挛，昏迷等严重症状。由于黄曲霉毒素特别是B1毒素是潜在的致癌物质，长期接触低剂量的黄曲霉毒素对人也会有一定影响。据世界粮农组织（FAO）估计，有25的食用作物受到真菌毒素的污染，其中主要的就是黄曲霉毒素。由于在农作物生长、收获、晾干、加工和储藏的任何环节黄曲霉毒素都可以存在，因此极易污染花生、玉米等农产品，并由此直接进入食物链，最终造成淀粉类食品、动物性食品的连锁污染。目前在农产品原料的加工产品中也发现了黄曲霉毒素，由于毒素的存在降低了作物的产量和质量

12、。由于各国分别制订了相应的黄曲霉毒素的标准和法规，从而对贸易会造成一定的影响，例如欧盟多次以黄曲霉毒素超标为由拒绝进口花生及其制品的输入6。在我国建立的标准中，规定了乳及乳制品中黄曲霉素的最高允许量为5G/KG。FDA规定用于人类消费食物中的黄曲霉毒素B1水平为20G/KG，大多数动物饲料中黄曲霉毒素B1水平在20300G/KG之间。联合国有关组织（如WHO、FAO及UNEP等）也多次组织调查并提出了毒素的控制标准7。世界卫生组织在1995年规定食品中黄曲霉毒素B1最高允许浓度为15G/KG，在婴儿食品中不得检出；欧盟国家的规定更加严格，要求人类生活消费品中黄曲霉毒素B1的含量不得超过2G/K

13、G，总量不得超过4G/KG。对黄曲霉毒素的检测方法有很多，其中常用的方法主要有TLC、HPLC、ELISA等。TLC法是过去检测黄曲霉素最常用的方法，至今中外检测机构仍然在用，是我国的一种国标方法。其原理是针对不同样品，选取合适的提取溶剂从样品中将黄曲霉素提取出来，经柱层析净化后，并在薄板上展开以分离，利用其在波长365NM紫外光下产生蓝紫色荧光荧光特性,根据薄层上显示出的荧光斑点的强弱来测定毒素含量8。该方法虽然有设备简单、费用低廉、易于普及的优点，但是操作繁琐、杂质较多且灵敏度较差。HPLC法是在近年来发展起来的一种检测方法，其原理是利用高效液相色谱仪（用ODSC18柱）和柱后衍生系统分离

14、，再用荧光检测器测定。与之配套的柱后衍生系统有我国国标规定的碘衍生化法，也有国外的溴衍生化法，此外还有较为先进的电化学衍生化法和光化学衍生化法。该方法的优点是快速且能够准确的进行定性定量分析，检测限也很低，但其所需设备较为繁琐且检测花费较大。ELISA法是以免疫、酶及生化计数为基础的近年来研究开发出来的一种较为新颖的检测方法，也是我国所用的一种国标方法。ELISA是上世纪70年代出现的一种新的免疫检测技术，其原理是利用抗体抗原之间的特异性免疫学反应，并通过测定酶活力的方法使灵敏度升高。在反应中，样品中所含的黄曲霉毒素B1与抗体特异性反应,多余的抗体与酶标板内的包被抗原结合,再加入酶标记物和底物

15、进行显色反应,与标准比较来测定毒素含量。该方法的特点是灵敏度高,特异性强,检测结果稳定准确,一次性可检测多个样品。另外IAC/SFB法同样也是我国国标方法的一种。其原理是利用黄曲霉素中各种毒素不同的荧光特性，再用光度计测定样品中每种黄曲霉毒素的含量。大致过程是用甲/水提取样品中的毒素并对提取液进行过滤、稀释，滤液在经过含有黄曲霉素特殊抗体的免疫亲和柱的净化过程后，黄曲霉毒素与免疫亲和小柱上的抗体特异性键合，再用蒸馏水除去柱上的杂质，再用甲醇洗脱目标化合物，在专用的荧光光度计中加显色剂测定样品中的黄曲霉素含量9。黄曲霉毒素作为一种剧毒素，存在于世界上大多数食品制品中，造成了极大的安全隐患，花生作

16、为一种重要的植物油原料，极易受黄曲霉毒素的污染，从而易引发食品安全问题，而目前使用的检测方法因操作复杂、对仪器设备要求高、检测时间长、假阳性率高等，随着时代的发展,已经不能适应当代社会的检3测要求。为了降低和消除黄曲霉素造成的污染，减少经济损失以及保证食品的食用安全性，需要有快速、经济和灵敏的检测方法。近些年来所开发出的免疫学分析方法具有很多突出的优点，例如灵敏度高、分析费用低、重现性好、能在短时间内处理大量样品等10、11。相比于其他已有方法，酶联免疫法以其特有的优势成为最实用的检测方法。由于抗原抗体之间的特异性反应，检测过程中定性、定量分析同时完成，所以不必对呈现阳性结果的样品再做确证试验

17、，简化了处理步骤。由此可以看出酶联免疫法是一个准确性高，安全性、实用性强的检测方法，故在本实验中采取酶联免疫快速测定法对不同储藏条件下的花生样品中的黄曲霉毒素含量进行定性定量分析，从而预测各储藏条件下花生的储藏期限，避免因食用含大量黄曲霉毒素花生引起的食品安全问题。2材料与方法21试剂与材料211原材料花生购买自农贸市场，初步经初步检测为无虫蛀无霉变新鲜花生籽粒甲醇分析级石油醚分析级212试剂黄曲霉毒素B1（AFB1）酶联免疫定量测试盒江苏省苏微微生物研究有限公司包括包被抗体的反应板96孔；A试剂样品稀释液；B试剂AFB1标准溶液（0,01,025,05,1,2NG/ML）；C试剂酶标抗原；D

18、试剂酶标抗原稀释液；E试剂浓缩洗涤液；F试剂显色底物液A；G试剂显色底物液B；H试剂终止液；反应板框架1块。试剂配制（1）A试剂（样品稀释液）先配置PBS缓冲液（PH74）30GNA2HPO412H2O，025GNAH2PO42H2O，87GNACL定容至1000ML。可根据实验需要按比例配制。A试剂取1000ML甲醇，加入900MLPBS缓冲液（PH74），混匀即得样品稀释液。可根据实验需要按比例配制。（2）每瓶C试剂（酶标抗原）中准确加入15MLD试剂（酶标抗原稀释液），充分溶解，配成实验用酶标抗原溶液，28保存。（3）取适量E试剂（浓缩洗涤液）用蒸馏水稀释20倍待用。213主要仪器酶标仪

19、内置45NM滤光片MK3型，热电（上海）仪器有限公司；恒温培养箱（050）DNP9162型，宁波江南仪器厂面包发酵箱FX11型，广州市鑫南方电热设备有限公司；1000L、200L移液枪及配套枪头；电子天平JY2002型，上海方瑞仪器有限公司。22实验方法221在常温下花生中黄曲霉素的变化称取100G花生样品，平铺至三个培养皿中，该过程中要保证样品没有重叠，充分分散平铺，放置在常温下，不定期的测定花生样品中黄曲霉素的含量。222湿度对花生中黄曲霉素的影响在恒温30、湿度分别为60、70、80的三个不同储藏条件下，考察花生在贮存过程中黄曲霉素的含量变化。4223温度对花生中黄曲霉素的影响在固定湿度

20、80、温度为25、30、35的三个不同储藏条件下，考察花生在贮存过程中黄曲霉素的含量变化。224对花生货架期的预测对实验数据进行总结分析，将实验所得花生样品在贮存过程中的黄曲霉毒素含量与国家标准GB27612005相对照，并查阅相关文献，对花生的货架期进行预测。23黄曲霉素的检测方法231样品处理样品去皮粉碎，称取50G于100ML具塞锥形瓶中。加入250ML甲醇水（11）溶液和20ML石油醚（或正己烷），振摇10MIN，过滤于分液漏斗中，静置分层，放出下层甲醇水提取液，此液为样品提取液，根据样品的国家允许量标准GB31711991，用A试剂（样品稀释液）将提取液进行适当稀释，即为待测样液。2

21、32分析检测程序（1）试剂平衡将测试盒在室温中放置15MIN以上，平衡至室温。（2）小孔编号根据实验需要截取相应反应孔放置反应板框架上。设1号孔为仪器调零孔，27号为AFB1标准对照孔，其余为样品孔。（3）洗涤每孔加入250L左右洗涤液且不得溢出，放置1MIN后，甩掉洗涤液，于吸水纸上拍干，重复洗板一次。（4）反应组成1号孔中加入50LA试剂（样品稀释液），27号孔中分别加入50L系列B试剂（AFB1的标准溶液），其余孔中加入相应的待测样液。1号孔再加入50LD试剂（酶标抗原稀释液），其余各孔均再加入50LC试剂（酶标抗原溶液）。轻轻震摇，混匀各孔中的反应物。（5）反应37恒温培养箱对反应板进

22、行30MIN孵育。（6）洗涤取出反应板，用力甩掉反应液，拍干。向每孔中加入250L左右洗涤液，且洗涤液不得溢出，放置2MIN后，用力甩掉洗涤液，在吸水纸上拍干，再重复洗涤4次。（7）显色每孔中分别加入F试剂和G试剂各50L，摇匀后将反应板放入37恒温培养箱中进行15MIN显色。（8）终止与仪器测定每孔中分别加入50LH试剂，摇匀后用酶标仪在450NM波长处对各孔的吸光度A值进行测定。（9）样品定量计算AFB1含量NG/GDCV/M式中C待测样液中AFB1含量（NG/ML）V样品提取液体积（ML）M样品质量（G）D样品稀释倍数（花生样品D4）3结果与分析31标准曲线的绘制将系列AFB1标准溶液（

23、0,01，025,05,1,2NG/ML）测得的吸光度A值，绘制成标准曲线。横坐标为标准液浓度的常用对数值（LGC），纵坐标为各标准孔A值与0NG/ML标准液孔的A值的比值（A标准5液/A0NG/ML）。其结果如图2所示。图2黄曲霉毒素B1标准曲线FIG2STANDARDCCURVEOFAFLATOXINB1从图2可以看出，黄曲霉毒素吸光值比值与黄曲霉毒素浓度的常用对数呈相关性，其关系式可表达为Y45565X17036，经计算，其相关系数R09994，故得知黄曲霉毒素吸光值比值与其浓度对数呈现良好的相关性，此曲线可信度较高可以使用。通过图2所得曲线，对购置的花生样品进行初始黄曲霉毒素含量的测定

24、，测得其毒素含量为0832NG/G，参照国标GB27612005中所规定的花生中黄曲霉素的限量指标20G/KG，得知所购置的花生中黄曲霉毒素含量没有超过国家标准，可以作为实验样品进行使用。32常温下花生中黄曲霉素的变化花生样品通过常温（1825、湿度为60左右）下放置，其黄曲霉毒素含量变化如表一及图3所示。表1常温下花生中黄曲霉素的含量TABLE1THECONTENTOFAFLATOXININPEANUTSUNDERNORMALTEMPERATURECONDITION图3常温下黄曲霉素的含量变化FIG3AFLATOXINCONTENTCHANGESUNDERNORMALTEMPERATUREC

25、ONDITION贮存天数（D）01530456075吸光度（A）170116841536128110130883毒素浓度（NG/ML）004160043700668013902300502AFB1含量（NG/G）0832087313362776599110044Y45565X17036R099946由表1及图3可以看出，在常温下贮存下，随着时间的推移花生中黄曲霉素的含量也在不断增加，大约在贮存的前30天内，黄曲霉素的含量增长的速度较为缓慢，随后在大约40天左右出现了黄曲霉素含量的快速增长点，此后毒素含量保持在一个较快的增长速度。在此贮存期间，样品中黄曲霉素的含量大约增长了9NG/G，实验中所达

26、到的最大毒素含量为10G/KG，参照国标GB27612005，此含量低于国家标准，故该贮存期内的花生符合国家标准，暂无食用上的安全隐患。同时在感官上可以观察到，贮存期间花生表面并未有霉菌附着，而花生籽粒也较为干燥，并未呈现湿软的状态。33湿度对花生中黄曲霉素的影响将花生在恒定温度30、湿度为60、70、80的条件下放置，其所含黄曲霉毒素的含量变化分别如图4、图5、图6所示。图430、湿度60条件下黄曲霉素的含量变化FIG4AFLATOXINCONTENTCHANGESUNDER30、HUMIDITY60CONDITIONS图530、湿度70条件下黄曲霉素的含量变化FIG5AFLATOXINCO

27、NTENTCHANGESUNDER30、HUMIDITY70CONDITIONS图630、湿度80条件下黄曲霉素的含量变化FIG6AFLATOXINCONTENTCHANGESUNDER30、HUMIDITY80CONDITIONS7从图4中可以看出，随着贮存时间的延长，花生样品中黄曲霉毒素含量也在不断增加，在贮存前期毒素含量增长速度较为缓慢，从第六天开始毒素呈现较快的增长，经过10天左右的贮存其样品中毒素含量未超过国标GB27612005中所规定的20G/KG的限量，故在此期间花生没有食用安全隐患，可以食用。从图5中可以看出，随着贮存时间的延长，花生样品中黄曲霉毒素含量也在不断增加，在贮存的

28、前7天内，毒素含量增加较平稳，在第7天突然有了较快速度的增加，并在贮存的第9天时花生中的黄曲霉毒素含量已超过国标GB27612005规定的20G/KG的限量，故在30、湿度70的条件下花生贮存1周时间后便会有大量毒素积累，不可食用。从图6中可以看出，随着贮存时间的延长，花生样品中黄曲霉毒素含量大体上呈不断增加的趋势，在贮存的前3天内毒素含量增加速度较缓，在第34天中出现了含量小幅度的下降与回升，在第4天开始，含量突然大幅度的增加，最终在贮存的第5天时超过国标GB27612005中所规定的20G/KG的限量，故在30、湿度80的条件下花生仅可贮存几天，为避免摄入大量毒素，该条件贮存的花生最好不要

29、食用。综合图4、图5、图6可以看出，在恒定温度30的条件下，湿度对花生中黄曲霉素的含量有一定的影响，总体上看，随着湿度的增加，黄曲霉素的增长速度也在不断增加，湿度越高花生中毒素积累越快，特别是在湿度80时，黄曲霉毒素的积累速度非常快，黄曲霉素的含量最高。而在感官上可以看到，在30、湿度60条件下花生贮存时表面并未有霉菌附着，而在湿度70条件下，花生在贮存前期并未观察到有霉菌的生长，但在贮存的第五天左右花生表面开始长有霉菌，且随着贮存时间越长霉菌越多，但在湿度80的条件下花生在贮存的第二天开始，就已经有大量的霉菌开始生长，附着于样品表面。综合以上感官分析，故可以看出，虽然在某些贮存条件下样品表面

30、没有霉菌覆盖，似于新鲜花生，但其实花生中毒素的含量已经较高，所以有时不能够仅凭感官来评定花生是否新鲜可以食用。34温度对花生中黄曲霉素的影响将花生在恒定湿度80、温度为25、30、35的条件下放置，其所含黄曲霉毒素的含量变化分别如图7、图4、图9所示。图725、湿度80条件下黄曲霉素的含量变化FIG7AFLATOXINCONTENTCHANGESUNDER25、HUMIDITY80CONDITIONS8图835、湿度80条件下黄曲霉素的含量变化FIG8AFLATOXINCONTENTCHANGESUNDER35、HUMIDITY80CONDITIONS从图7中可以看出，随着贮存时间的延长，花生

31、中黄曲霉毒素的含量也在不断增加。在贮存的前5天中，黄曲霉毒素含量平稳增加，在第57天内毒素含量出现了小幅度的下降和回升，从第7天开始毒素含量呈现较快速度的增加，最终达到62NG/G，已超过国标GB27612005中所规定的毒素限量，故在25、湿度80条件下花生贮存大约一周后便存在安全隐患，不可食用。从图8中可以看出，随着贮存时间的延长，花生中黄曲霉毒素的含量也在不断增加。在贮存的前3天内，毒素含量增加较为缓慢，始终保持在较低水平，在第34天内毒素含量也出现了较小幅度的下降与回升，从第4天开始毒素含量呈现较快的增加，最终达到70NG/G，已超过国标GB27612005中所规定的毒素限量20G/K

32、G，故在35、湿度80条件下贮存的花生在一周之内就积累了大量毒素，为保证食用的安全性，该调间下贮存的花生不可食用。综合图4、图7、图8三幅图可以看出，在相同的湿度80的条件下，贮存温度对花生中黄曲霉素有一定的影响，三种温度下黄曲霉素含量的变化趋势基本相同，所产生的毒素含量都比较多，均在一周左右超过了国标限量，但在30的条件下毒素含量最高，由此可知在湿度80条件下贮存的花生存在着较大的安全隐患，不可食用。而从感官上可以看出，在以上三个条件下贮存的花生表面在贮存前期就开始出现霉菌，且随着贮存时间的延长霉菌生长的越多，故在这些贮存条件下花生中霉菌大量生长，而在贮存后期霉菌所产的毒素含量大量积累，已远

33、远超过了国标限量。35花生货架期的预测综合以上几幅图可知，温度和湿度两个因素在花生贮存期间内对其黄曲霉毒素含量有很大影响，特别是在温度30的条件下，湿度为80时对花生中黄曲霉素含量影响较大，花生中所积累的毒素含量较多，已明显超过国标GB27612005中所规定的花生中黄曲霉毒素含量的最大限量20G/KG，而其安全贮存时间仅不到1周，由此可以得出结论花生在此贮存条件下货架期较短，若要延长花生的货架期就要避开类似的贮存条件，使湿度控制在80条件下，温度也保持在30以下。而在常温条件下贮存的花生可以有较长的货架期，综合文献预测其货架期大约可以维持在612个月。4小结根据实验设计所设定的几个花生样品的

34、储藏条件，对样品进行分批培养，并对花生中黄曲霉毒素含量进行定点测定，根据结果显示，温度和湿度对花生都有很大影响，将所得数据整理并结合国标GB27612005可以看出，花生中黄曲霉毒素含量在温度为2535、湿度为80左右的外界条件下较高，毒素积累较9快。而在常温条件下培养的花生样品经过长期的定点测定可以看出，在将近3个月的培养过程中，花生样品中的黄曲霉毒素含量有所增长，前期总体增长较缓，后期毒素含量增加较快但没有超过国标所规定的限量标准，故相对来说有较长的保存期。因为实验的条件以及其他因素的制约，没有对花生样品进行较长时间的培养，根据实验所得数据以及相关文献的查阅对花生的货架期进行预测。实验数据

35、显示，在温度2535、湿度80时黄曲霉素开始大量积累，在该储藏条件下花生的货架期相对较短，仅在一周之内花生中就有大浓度的黄曲霉毒素存在；而在常温下，即20、湿度60左右的条件下，花生可以有相对较长的货架期，推测花生大概可以保存612个月。5展望花生作为一种非常重要的植物油原料作物，在自然生长、收获、加工、存储过程中，极易受到黄曲霉毒素的污染，而黄曲霉毒素作为一种霉菌剧毒物，被国际肿瘤机构（IARC）指名为一类致癌物质，主要导致肝脏病变，引起肝癌12，根据国标GB27612005，花生中的毒素总含量不得超过20G/KG13,而黄曲霉毒素的半致死量为05MG/公斤体重，它极易污染花生一类的高油含量

36、作物14。在对黄曲霉毒素含量的测定上，基于以往所利用的一些检测方法上，新进研发出来的以免疫学原理为基础的快速酶联免疫检测方法，而这种方法也被作为现在对黄曲霉毒素检测的官方方法15，已有30多年的历史16。ELISA方法不但可以进行定性测定，也可以进行定量测定17，ELISA方法尤其特有的优势，如高特异性、灵敏性、方法简便等，但也有一些缺陷，与类似结构的化合物有一定程度的交叉反应，若要提高检测方法的准确性，可以采取检测手段的联合使用的方法18，如黄曲霉素免疫亲和微柱及免疫亲和纯化与仪器联用检测技术19。随着检测方法研究的深入，将有更多快速、灵敏、准确的检测方法出现，我们可以根据检测对象以及灵敏度

37、的要求，选择最佳的检测方法，对样品中的黄曲霉毒素进行检测，保证食品安全20，而运用ELISA的快速检测方法在目前以及未来仍有广阔的发展空间以及应用前景。10参考文献1张俊亭,陈国光,李治祥等玉米和花生中黄曲霉素B1酶联免疫快速分析方法J农业环境保护,1998,1741701732ANTONIOFM,RENATARC,MYMASOCCURRENCEOFAFLATOXINSB1,B2,G1,G2INCOOKEDFOODCOMPONENTSOFWHOLEMEALSMARKETEDINFASTFOODOUTLETSOFTHECITYOFSAOPAULO,SP,BRAZILJFOODADDITCONTA

38、M,2001,54453ELISABETEYS,MARIOA,FABIAY,ETALEVALUATIONOFFUMONISINAFLATOXINCOOCCURRENCEINBRAZILIANCORNHYBRIDSBYELISAJFOODADDITCONTAM,2001,1887197294高大威粮食和饲料中的黄曲霉毒素J黑龙江粮食,2003,245465李荣启,范自营,张红云等粮食中黄曲霉毒素污染J粮食与油脂,2006,817196潘葳,庞广昌,张昀黄曲霉毒素与食品安全J食品研究与开发,2004,25611137胥革非粮食发热与霉变J粮油储藏与检验,2001,130388JJAIMEZ,ETA

39、LAPPLICATIONOFTHEASSAYOFAFLATOXINSBYLIQUIDCHROMMATOGRAGHYWITHFLUORESCENCEDETECTIONINFOODANALYSISMJOURNALOFCHROMATOGRAPHYA,20008821109马涛黄曲霉素分析方法简介与比较J科学之友,2007,214815010MORGANMRA,MENERNEYR,MATHEWJA,ETALJSCIFOODAGRI,19833459359811MORGANMRA,MENERNEYR,CHANHSPROCEEDINGSOFTHEVCHMEETINGONMYCOTOXINSINANIMAL

40、ANDHUMANHEALTHMOSSMOEDSURRYUNIVERSITYPRESS,1985808412INTERNATIONALAGENCYFORRESEARCHONCANCERIARCMONOGRAPHONTHEEVALUATIONOFCARCINOGENICRISKTOHUMANSIARCLYON,FRANCE,1993VOL5613BERG,THOWTOESTABLISHINTERNATIONALLIMITSFORMYCOTOXINSINFOODANDFEEDFOODCONTROL2003,14,21922414NANUALEE,SHUOWANG,ROBINDALLAN,ETALAR

41、APIDAFLATOXINB1ELISADEVELOPMENTANDVALIDATIONWITHREDUCEDMATRIXEFFECTSFORPEANUTS,CORN,PISTACHIO,ANDSOYBEANSJJAGRICFOODCHEM2004,52,2746275515DILARANILUFER,DILEKBOYACIOGLUCOMPARATIVESTUDYOFTHREEDIFFERENTMETHODSFORTHEDETERMINATIONOFAFATOXINSINTAHINIJJAGRICFOODCHEM2002,50,3375337916杨利国,胡少昶,魏平华,等酶免疫测定技术M南京南京大学出版社,199817邱伟芬酶联免疫吸附分析及其在食品安全检测中的应用J粮食与饲料工业,20043444518商博东,张维,朱韦静酶联免疫吸附法在食品安全分析中的应用J中国卫生检验杂志,2005,15111406140719刘江单克隆抗体在真菌毒素检测中的应用进展J国外医学卫生分册,1995,222909420刘亚凤,杨冀州,苗丽饲料中黄曲霉毒素检测技术综述J河南畜牧兽医,2006,2711112