费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究【开题报告】.doc

1、毕业论文开题报告食品质量与安全费菜提取液抑菌效果和抗氧化研究一、选题的背景与意义费菜俗称“土人参”，又名土三七、救心菜，属景天科多年生草本植物。费菜主要分布于我国长江以南各地，不论在平原、丘陵地带还是高原山区费菜均能生长。它含有齐墩果酸、谷甾醇、生物碱、景天庚糖、黄酮类、有机酸、维生素E等多种成份，费菜中的这些成份使得它具有抑菌、抗氧化、增强免疫、扩张脑血管、改善冠状动脉循环等途径，达到降血压、防中风、防心脏病降血脂、抗肿瘤等功效，有很高的食用价值和医疗保健功能。随着人们对生活水平的不断提高，对身体保健也越来越重视，近年来世界上掀起了植物药及保健品的开发热潮。通过对费菜提取液抑菌和抗氧化效果的

2、研究，可以提高费菜的使用价值，有助于生产出具有治疗和预防多种疾病的药品和天然保健品，为费菜的综合利用开辟新途径，创造更大的社会效益和经济效益。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题基本内容1研究费菜提取液对大肠杆菌的抑制效果2研究金黄色葡萄球菌的抑制效果3研究枯草芽孢杆菌的抑制效果4测提取液中总黄酮的浓度5研究费菜提取液还原力的测定6研究费菜提取液对羟自由基的清除能力7研究对DPPH自由基的清除率三、研究的方法与技术路线1费菜提取液制取取新鲜费菜叶在70烘干24H，然后用药物粉碎机粉粉碎并过80目筛，得到的叶粉备用，在提取之前将叶粉在105烘干2H左右。称取5G干粉，置于150ML锥形瓶中，按照

3、料液比150加入浓度为70的乙醇，超声提取50MIN，60水浴浸提6H，趁热抽滤，得到滤液。将粗提液用旋转蒸发仪在4550下浓缩至适量后，加入34倍体积的95乙醇以沉淀多糖6H以上，再将粗提液用旋转蒸发仪在4550下浓缩至适量，备用。2抑菌圈法测定抑菌效果提前3天把大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌进行活化，接种斜面上备用。制备营养琼脂培养基,营养肉汤用于细菌的液体培养。把所要用的培养基、培养皿、移液枪头、无菌水等灭菌备用。首先做每个菌不同梯度浓度的菌悬液。然后选择一种浓度的菌液用涂布的方法在培养皿中做好平板。用在酒精灯上烧过的6MM的打孔器在每个平板上打3个孔，正三角形均匀分散放置在平皿

4、中央，每两个孔之间距离30MM以上，每个菌种做三组平行。并用灭菌的镊子夹掉打孔后的琼脂，分别取50L的费菜提取液、硫酸庆大霉素和水注入3个孔内。硫酸庆大霉素做阳性对照，水做阴性对照。最后测每种菌菌落总数，基本保证做抑菌圈时各种菌的浓度一样（106108个/ML）。暗室培养细菌37/24H。测定抑菌圈直径，取平均值。3费菜提取液最低抑菌浓度MIC和最低杀菌浓度（MBC）的测定采用二倍稀释法，以水为溶剂，配制一系列梯度浓度的费菜提取液溶液，将不同梯度浓度的费菜提取液溶液1ML加入到1ML已灭菌的液体培养基中，混合均匀，使培养基中费菜提取液的浓度分别为原提取液的12，14，18，116，132，16

5、4，再在每管中加入01ML的菌液。暗室培养细菌37/24H，每一与对照组（不加菌）比较，是否变浑浊，以不变浑浊管费菜提取液浓度为其最低抑菌浓度MIC，MINIMUMINHIBITORYCONCENTRATION。分别吸取1ML以上管中的液体到40度左右的营养琼脂培养基，测是否长菌。不长菌的最小费菜提取液浓度就是MBC。4测费菜提取液中总黄酮的浓度用芦丁做标准曲线，精密量取芦丁取液010ML、020ML、030ML、040ML、050ML、060ML，费菜提取液05ML、10ML、15ML、2ML、25ML分置25ML量瓶中，各加水至6ML；分别加5NANO2溶液1ML，摇匀，放置6MIN；分别

6、加10ALN033溶液1ML，摇匀，放置6MIN；然后分别加4NAOH溶液1OML，并分别加水至刻度，摇匀，静置15MIN，在510NM测定吸收度，以芦丁浓度CMGML对吸光度A作标准曲线，费菜提取液吸光度根据标准曲线算出浓度。5还原力测定取25ML不同浓度的费菜提取液于试管中，依次加人25ML02MOLLPBSPH66、5ML1K3FECN6溶液，于5O保温20MIN后快速冷却，再加入25ML10三氯乙酸溶液，3000RMIN离心10MIN，取上清液25ML，依次加入25ML蒸馏水、05ML01FEC1，溶液，充分混匀，静置10MIN，测定吸光值（以蒸馏水为参比溶液，吸光度值越高还原力越强，

7、作成曲线。6羟自由基清除率测定按照SMIRNOF1989的方法，利用H2O2与FESO4混合产生OH，在体系内加入水杨酸捕捉OH并产生有色物质，该物质在510NM处有最大吸收。于10ML容量瓶中依次加入2MMOLLFESO42ML，6MMOLLH2O22ML，6MMOLL水杨酸一乙醇6ML，于37水浴中保温15MIN后取出，以蒸馏水为参比，510NM下测其吸光度A。，然后再加入04ML被测定样品，摇匀，37水浴中保温15MIN后取出，以蒸馏水为参比，510NM下测其吸光度AX。考虑到色素本身的吸光度值，做了对照试验于25ML容量瓶中依次加入2MMOLLFESO42ML，蒸馏水5ML，6MMOL

8、L水杨酸一乙醇6ML，于37水浴中保温15MIN，然后加入04ML被测定样品，摇匀，于37水浴中保温15MIN后取出，以蒸馏水为参比，510NM下测其吸光度清除率计算公式为清除率A0AXAX0/A0式中AO为空白对照液的吸光度；AX为加入色素溶液后的吸光度；AXO为不加显色剂H202色素溶液本底的吸光度。7对DPPH自由基清除率的测定取不同浓度费菜提取液2ML及浓度为2104MOL/L的DPPH溶液2ML先后加入同一具塞试管中，避光30MIN后以样品提取溶剂为空白调零测定其吸光度AI；测定2ML浓度为2104MOL/L的DPPH溶液与2ML无水乙醇混合液的吸光度AE；再测定2ML黄酮提取液与2

9、M1无水乙醇混合液的吸光度AJ，重复5次，求其平均值。根据下列公式计算沙枣黄酮提取液对DPPH的抑制率，即抑制率1AIAJ/AE100,做标准曲线。四、研究的总体安排与进度201010201011查阅文献，设计初步实验方案；201011200812实验设计，开题报告；201102201104实验操作；201104201105数据处理，撰写论文。五、主要参考文献1袁婷,钟学稳常见中草药的体外抑菌试验J试验研究,2009,923242郑瑞生,封辉植物中抗氧化活性成分研究进展J中国震学通提2010，26985903张连琴自由基与疾病J天津医科大学学报,1997,3285884陈月明,王水明植物提取物

10、的抗菌作用J饲料研究,2010,538395吴万传,杜小凤,王伟中等植物源抑菌活性成分研究进展J淮阴工学院学报,2004,13328356曲中堂,项昭保,赵志强等橄榄总黄酮抑茵作用研究J中国酿造,2010,462637刘卫今,葛婷,刘胜贵等羊耳菊黄酮类化合物的提取与抑菌作用J湖北农业科学,2010,49（2）4264298ENZOATOSI,EDMUNDORE,MARTAEORTEGAFOODPRESERVATIVEBASEDONPROPOLISBACTERIOSTATICACTIVITYOFPROPOLISPOLYPHENOLSANDFLAVONOIDSUPONESCHERICHIACOLI

11、FOODCHEMISTRY2007,104102510299徐金瑞,郭志成,罗燕琴等番石榴叶对食品中几种常见细菌的抑菌作用J食品研究与开发,2010,31（3）17317510李翠芳,王芳,麻浩等新疆紫草毛状根提取物的抑菌活性研究J河北农业大学学报,2010,33（3）929611严汉彬,林岚岚,丁力行等肉桂提取物抗菌及抗氧化的研究J中国调味品,2010,7,35414412魏朝良黄酮类化合物及清除自由基机制的探讨J中成药,2005,2223924113SIEUNLEE,HYUNJINHWANG,JUNGSUNHAETALSCREENINGOFMEDICINALPLANTEXTRACTSFOR

12、ANTIOXIDANTACTIVITYJLIFESCIENCES,2003,7316717914赵军黄酮类化合物的抗氧化机制J华北煤炭医学院学报,2003,5（3）30630715张桂芝,耿莎,杨海燕等植物抗氧化成分的研究进展J食品科学，2007,281255155316陈蕉，黎云祥，陈光登，等两种岩白菜属植物根茎黄酮和多糖的提取及抗氧化活性研究J食品工业科技,2009,3039810117樊金玲,丁霄霖沙棘籽提取物抗氧化活性与酚类组成的研究J天然产物研究与开发,2OO6,1852953418李海云,王秀丽,潘英明等罗汉果不同溶剂提取物抗氧化及清除活性氧自由基作用J广西植物,200828569

13、870219张改平,朱华泽,杨建雄等甘草提取物的体外抗氧化活性J生物加工过程,2010,83535720吴新安,花日茂,岳永德等植物源抗菌、杀菌活性物质研究进展J安徽农业大学学报,2002,29324524921张燕宁,雷敏,孙伟等56种植物对植物病原菌的生物活性J农药,2010,49429029222任顺成,范永超,李翠翠等30种中草药提取物对食品细菌的影响J安徽农业科学,2010,38147529755623王锋鹏生物碱化学M北京化工出版社,2008151924张培成黄酮化学M北京化学工业出版社,200927338225谢明勇,聂少平天然产物活性多糖结构与功能研究进展J中国食品学报,2010,10211126谢笔钧银杏叶提取物黄酮的热加工与保健饮料生产技术J农村实用技术与信息,2005,152927张英,沈建福,俞卓裕等竹叶黄酮作为抗衰老护肤因子的应用基础研究J林产化学与工业,2004,2419510028李崇高,黄建初,黄泳梅等魔芋多糖仿生食品工艺的研究J西南大学学报自然科学版,2008,30111912529岳宗翠,周广田岩藻多糖啤酒生产工艺的研究J中国酿造,2010,114815030张丽莉,信维平枸杞多糖风味酱油的工艺研究J中国调味品,2009,1347577