常见性病实验室检测方法的原理方法和临床意义.ppt

1、,常见性病实验室检测方法的原理、方法和临床意义,病原体淋球菌梅毒螺旋体生殖器疱疹病毒生殖道沙眼衣原体乳头瘤病毒HIV病毒杜克雷噬血杆菌衣原体念珠菌滴虫疥虫阴虱肝炎病毒,病 种淋病梅毒:生殖器疱疹:生殖道沙眼衣原体感染:尖锐湿疣:HIV感染/艾滋病:软下疳:性病性淋巴肉芽肿:念珠菌性阴道炎:滴虫性阴道病:疥疮:阴虱病:肝炎（乙、丙）：,性传播疾病(STD)/性传播感染(STI),梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎生殖器疱疹尖锐湿疣HIV/AIDS,梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿,50-60年代经典性病,80-90年代监测性病,目 前传染法报告病例 监测性病,梅毒淋病沙眼衣原体感染生殖器

2、疱疹尖锐湿疣,我国主要流行的性传播疾病（性病）,沙眼衣原体: 30%50%生殖支原体: 10%40% 其它: 20%30%,梅毒淋病HIV/AIDS,性病实验室检测方法规范化,方法、试剂评估 技术规范临床应用：敏感性、特异性疾病筛查：快速、简便、敏感血液筛查：大通量、高敏感流行病学调查：取材方便、人员培训管理骨干培训技术培训,主要常见性病实验室检测介绍,梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹 阴道滴虫病 细菌性阴道病 生殖器念珠菌病,一、梅 毒,全国梅毒检测技术规范,7,梅毒及其病原体样品的采集和处理病原学检测血清学检测核酸检测实验室生物安全梅毒血清学检测实验室质量管理,常用梅毒检测方法,病原

3、学检测血清学检测,病原学检查,原理：一期、二期梅毒时，取硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等皮损部位组织液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下，光线从聚光器的边缘斜射到涂片上的梅毒螺旋体而发出亮光，从而可根据其特殊形态和运动方式进行检测。方法：病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法,病原学检查的临床意义,病原学方法直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，,梅毒血清学检测分类,(1) 非梅毒

4、螺旋体抗体检测试验（非特异性梅毒抗体）(2) 梅毒螺旋体抗体检测试验（特异性梅毒抗体）两类方法。,非梅毒螺旋体抗体试验,1、原理： 梅毒螺旋体感染人体后，宿主会产生抗类脂抗原的抗体，可检测梅毒患者血中的抗类脂抗原的抗体 2、方法： 快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 性病研究实验室试验 (VDRL)等。,RPR结果,非梅毒螺旋体抗体试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,梅毒螺

5、旋体抗体试验,1、原理：用梅毒螺旋体特异蛋为抗原，检测梅毒患者血中特异性抗梅毒螺旋体抗原的抗体 2、方法： 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 梅毒螺旋体血球凝集试验 (TPHA) 梅毒酶联免疫吸附试验（TP-ELISA） 化学发光试验 梅毒免疫层析法-梅毒快速检测 (TP-RT) FTA-ABS 梅毒IgM抗体检测（TP-IgM） 梅毒螺旋体蛋白印迹试验（TP-WB）等,梅毒螺旋体抗体试验临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA等梅毒螺旋体抗体试验试验仍可阳性，故TPPA等试验阳性不能作为疗效观察的指标。TPPA等阳性不能

6、区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。,非梅毒螺旋体抗体试验结果解释示意图,早期,晚期,一期,二期,早期潜伏,晚期潜伏,三期,治疗前 治疗后,阳性,阴性,梅毒螺旋体抗体试验结果解释示意图,早期,一期,二期,早期潜伏,晚期,晚期潜伏,三期,治疗前 治疗后,阳性,阴性,梅毒血清学试验结果的临床意义总汇,USR TPPA 意义 RPR TP-ELISA VDRL TP-RT _ _ 排除梅毒 一期梅毒的早期 + + 现症梅毒(梅毒孕妇所生 的婴儿除外) + - 生物学假阳性 - + 早期梅毒经治疗后,梅毒血清学检测意义,检测目的:临床诊断、血液筛查、流行病学监测以临床诊

7、断为目的的检测是为了确定梅毒感染的状况。以血液筛查为目的的检测是为了防止梅毒的经血传播。以流行病学监测为目的的检测是为了调查梅毒血清学感染率和发病率。,梅毒血清学检测检测策略及要求,检测策略以临床诊断为目的两种策略 以血液筛查为目的的检测策略 以流行病学监测为目的的三种检测策略检测要点根据目的选择检测方法及检测策略。可采用任何一类梅毒血清学检测方法作为筛查试验。检测试剂要求所有应用于临床的检测试剂均必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、在有效期内的试剂，有批批检合格证的试剂。推荐使用临床质量评估敏感性和特异性高的试剂。,二、淋 病,常用淋病检测方法,直接显微镜检查分离培养淋球菌,直接显微镜检

8、查,原理：男性淋菌性尿道炎患者常有大量黄白色脓性分泌物，其多形核白细胞内可找到革兰染色阴性的双球菌。方法：革兰染色为一传统方法，革兰染色将菌分为二大类，即染成紫色的革兰阳性菌及染成红色的革兰阴性菌。,直接显微镜检查的临床意义,男性淋菌性尿道炎的尿道标本 敏感性及特异性可高达95%99%，具诊断价值。宫颈标本、无症状男性尿拭子及取自直肠的涂片时 敏感性仅4070%。 不推荐直接显微镜检查诊断直肠和咽部淋球菌感染。 亦不能用于疗后判愈。如果在多形核细胞外见到形态典型的革兰阴性双球菌，需做培养进行确证。,淋球菌培养,1原理：淋球菌在适宜的培养基上可生长出特征性的菌落，根据菌落大小、形态、光泽、边缘、

9、颜色等情况，可以作为淋球菌的鉴定依据之一。2、方法特点：敏感性 81100%。 特异性 100% ,淋球菌培养,培养条件 ： 35 36，含5%10% CO2，湿润（70%湿度）的环境。 CO2环境可由CO2培养箱、CO2产气袋及烛缸提供。使用烛缸时，应使用白色、无芳香味的无毒性蜡烛。在烛缸底部放些浸水棉球以保持一定的湿度。培养时间：2448小时,淋球菌的初步鉴定,初步鉴定淋球菌的依据菌落特征氧化酶试验革兰染色,淋球菌培养的临床意义,培养法为诊断淋病的金标准.用于女性感染者、亚临床感染者、以及来自直肠和咽部的感染的确诊试验。,生殖道沙眼衣原体感染,生殖道沙眼衣原体感染简介,50年代,80年代,

10、梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿,梅毒淋病软下疳性病性淋巴肉芽肿非淋菌性尿道炎生殖器疱疹尖锐湿疣HIV/AIDS,2007年后,梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染生殖器疱疹尖锐湿疣HIV/AIDS,常用生殖道衣原体感染检测方法,抗原检测 酶联免疫吸附试验（ELISA） 免疫层析快速检测核酸检测,酶联免疫吸附试验,1、原理：于衣原体特异性单克隆抗体形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测衣原体抗原。2、方法特点 敏感性：7997 特异性: 9799试验结果阴性时，不能完全排除沙眼衣原体感染，有可能是沙眼衣原体数量不足或标本采集不当的缘故,结果判读客观性强，适宜于大样本沙眼衣原体感染的检测。在沙眼衣原体高

11、流行率的人群临床和健康体检；低流行率（小于5%）的人群中应用时，结果解释应慎重。,酶联免疫吸附试验临床意义,抗原快速检测,1、 原理：利用免疫层析法原理，采用胶体金标记的沙眼衣原体抗体滤纸条或卡，快速检测标本中的沙眼衣原体抗原。2、方法特点简易，方便，快速，尤其适用于基层单位标本中需要足够数量的沙眼衣原体抗原，否则有假阴性结果,抗原快速检测临床意义,该方法主要适用于女性患者宫颈标本的检测，敏感性较低。该法快速、简便，无需特殊仪器，因此，较适合基层实验室开展。,核酸扩增检测,1、原理：核酸扩增技术是通过扩增沙眼衣原体的多拷贝基因（如隐蔽性质粒、染色体和RNA）检测病原体。2、方法包括聚合酶链反应

12、（PCR）、连接酶链反应（LCR）、等温链置换扩增技术（SDA）、转录介导扩增技术（TMA）等。目前国内广泛使用的有实时荧光PCR。,核酸扩增检测临床意义,核酸扩增检测具有很高的敏感性和特异性，世界卫生组织已推荐为扩大的生殖道沙眼衣原体感染实验室诊断的“金标准”。核酸扩增检测不仅可用于宫颈、尿道标本中沙眼衣原体的检测，也可用于男女性尿液标本的检测。 开展核酸检测的实验室应通过有关部门考核取得开展临床核酸检测技术资格证。,方法评价,核酸检测 是目前为止最好的检测方法但存在检测敏感性 上的局限性ELISA抗原检测 严格按操作说明进行操作是非常好的检测方法 高通量，自动化快速抗原检测 操作时间短，单

13、人份操作，但敏感性极低,生殖器疱疹,常用生殖器疱疹检测方法,抗原检测抗体检测,抗原检测,1、原理：将HSV特异性单克隆抗体包被在酶标板微孔壁上，捕获标本中的HSV抗原，形成抗原抗体复合物，继而与酶标记的二抗结合，通过酶联显色反应检测HSV。2、方法：ELISA为目前临床上HSV抗原检测的常用方法之一,抗原检测临床意义,生殖器疱疹感染的临床表现变化多样，临床诊断的准确性不足50%70%，通过实验室检测手段可确证HSV感染,抗体检测,原理：将HSV特异性抗原包被在酶标板微孔底上，捕获标本中的HSV抗体，形成抗原抗体复合物，通过酶联显色反应检测HSV抗体。方法：有检测IgG 和IgM 两种ELISA

14、方法,抗体检测临床意义,检测抗HSV抗体的血清学试验可用于证实既往HSV感染、回顾性诊断原发性感染，对恢复期或复发性生殖器疱疹的诊断意义不大。HSV型特异性血清学抗体检测是发现亚临床无症状生殖器HSV感染者的手段之一。,显微镜检查：生理盐水湿片法（幻灯）染色法 特点:简便、快速、价廉 敏感性只有38%82%滴虫培养是诊断滴虫病的金标准,敏感性达95%,阴道滴虫病,细菌性阴道病,均质稀薄的白色阴道分泌物pH4.5胺臭味试验阳性线索细胞阳性符合上述4项中3项为阳性可诊断BV,Amsel综合临床体征指标,生殖器念珠菌病,直接涂片 镜下见念珠菌略带绿色折光的假菌丝和成群的卵圆形孢子或芽生孢子，直径约35m。假菌丝节间有明显的狭窄部，芽孢往往集中于菌丝分隔处，偶尔可见到分隔的真菌丝。培养（菌种鉴定）,谢 谢!,