水产品中产组胺微生物的分离与生物学特性【毕业设计】.doc

1、本科毕业设计（20_届）水产品中产组胺微生物的分离与生物学特性所在学院专业班级食品科学与工程学生姓名学号指导教师职称完成日期年月II目录诚信承诺I目录II摘要IV1前言错误未定义书签。2材料与方法错误未定义书签。21实验材料错误未定义书签。211原料错误未定义书签。212仪器与设备错误未定义书签。213试剂和培养基222测定方法3221鲣鱼成分分析3222高效液相色谱法测定组胺3223J2菌株的生理生化实验423实验方法5231组胺生成菌的分离筛选5232J2菌株生长曲线5233环境因素对J2菌株生长的影响52331温度对J2菌株生长的影响52332PH值对J2菌株生长的影响5234环境因素对

2、J2菌株组胺生成量的影响62341温度对J2菌株组胺生成量的影响62342PH值对J2菌株组胺生成量的影响63结果与分析631鲣鱼成分分析632组胺生成菌的分离筛选633待测菌株产组胺能力测定634J2菌株生长曲线735J2菌株生理生化实验7III36环境因素对J2菌株生长的影响7361温度对J2菌株生长的影响7362PH值对J2菌株生长的影响837环境因素对J2菌株组胺生成量的影响8371温度对J2菌株组胺生成量的影响8372PH值对J2菌株组胺生成量的影响94结论9参考文献10致谢11IV【摘要】鉴别培养基初步筛选共得到10株菌株，并且利用高效液相色谱法检测到其中一株菌株在含10L组氨酸胰

3、酶蛋白大豆肉汤中有组胺产生。对水产品中的组胺生成菌进行生化实验和环境因素对其生长和组胺生成量的影响实验，为生产实践中组胺的控制提供可参考数据。该菌株的最适生长温度和PH分别为30和7。同时，25检测到该菌株组胺最大生成量549UG/ML，PH为5时检测到组胺最大生成量986UG/ML。该菌株初步鉴定为芽孢杆菌BACILLUSSPP。【关键词】水产品；组胺生成菌；生物化学【ABSTRACT】ATOTALOFTENBACTERIALSTRAINSWERESELECTEDFROMTHEPRESCREENINGSTEPUSINGPRELIMINARILYDIFFERENTIALMEDIUM,ANDON

4、EOFTHEPOSITIVEISOLATESWERETRUEHISTAMINEFORMERSWHENCONFIRMEDBYHPLCMETHODINTRYPTICASESOYBROTHSUPPLEMENTEDWITH10LHISTIDINETHEPHYSIOLOGICALANDBIOCHEMICALEXPERIMENTSANDENVIRONMENTALFACTORSONGROWTHANDHISTAMINEFORMATIONOFHISTAMINEFORMINGBACTERIAWERECONDUCTEDTOPROVIDEREFERENCEDATAFORHISTAMINECONTROLINPRODUC

5、TIONTHEOPTIMUMTEMPERATUREANDPHOFGROWTHWERE30AND7,RESPECTIVELYATTHESAMETIME,ITCOULDPRODUCE549UG/MLAND986UG/MLHISTAMINEATOPTIMUMTEMPERATURE25ANDOPTIMUMPH5FINALLY,THESTRAINWASPRELIMINARILYIDENTIFIEDASBACILLUSSPP【KEYWORDS】AQUATICPRODUCTSHISTAMINEFORMINGBACTERIABIOCHEMISTRY11前言自从中国加入世界贸易组织，对外开放制度不断加强，大力发

6、展对外贸易，特别是发展出口贸易，其中水产品的出口也不断增加。但是水产品的安全问题，一直是制约其出口的主要瓶颈。这主要是由于水产品卫生指标控制不到位及国内外对水产品微生物控制的栅栏技术应用研究缺乏充分的微生物分类鉴定研究证据，从而不能从根本上解决产品卫生安全问题和建立有效的控制方法。组胺是水产品贮藏或加工过程中体内组氨酸经过生物化学过程（部分消化酶分解）和外源性微生物污染后产生的蛋白酶类（蛋白酶主要是脱羧酸酶类）降解鱼肉组织后产生的对产品品质（感官指标）劣化或人体有一定毒害的化学物质1。海产鱼类如鲐鱼、鲣鱼、青鱼、沙丁鱼、竹夹鱼、金枪鱼、秋刀鱼、沙丁鱼、朝鲜方鱼等由于体内含有组氨酸，被组胺无色杆

7、菌，摩根氏变形杆菌等微生物污染后，会产生一定数量的组胺类成分。而组胺是人体引起炎症和过敏性疾病的主要物质，它可使病人支气管收缩和粘液分泌，患者接触变性原后，血清和支气管肺泡灌洗液中可见组胺水平增高24。严重的组胺中毒是由于食用含有一定数量组胺的某些鱼类以及其他动物而引起的过敏性食物中毒。由于组胺产生的事物过敏，甚至中毒的现象屡见不鲜。微生物污染产生组胺的三个条件56（1）存在组胺的前体物质自由组氨酸；（2）存在催化酶组氨酸脱羧酶（主要由微生物产生）；（3）存在发生组氨酸脱羧反应的条件。水产鱼类，尤其是中上层的青皮红肉鱼，体内含有丰富的自由组氨酸。一旦此类鱼或其产品中存在产组胺微生物，在适宜条件

8、下，极易产生组胺。它们广泛存在于未经加工的鱼或其产品（发酵、腌渍、干制和其它鱼肉制品）中。迄今为止，国内对组胺控制研究一直不够深入，大部分仅仅局限于测定组胺含量的层面上，只有少数人对组胺的形成和控制做了研究。有相关文献对水产品中组胺的产生机理，以及影响组胺产生的因素（包括温度、PH值、贮藏时间、含盐度、供氧量以及添加剂）分别做了概述。另外，还有文献报道，不同种类的海鱼在不同发酵温度、不同腐败程度、以及不同NACL含量的条件下，对组胺产生规律做了详细研究，但并未对产组胺菌进行鉴定，并给出相应控制方法。本课题就从微生物角度研究入手，采用现代微生物分离鉴定技术，找到特定水产品中产生组胺的主要微生物，

9、研究它们的生理生化特性、环境因素对其生长和产酶活性的影响。通过分析所得数据，再探讨它们之间的相互关系，制定出相应控制方法，为生产实践中组胺的控制提供技术支持。2材料与方法21实验材料211原料冷冻鲣鱼（捕捞后30速冻，18保藏），浙江舟山企业提供（2010年4月）。此鲣鱼捕捞于中国东海。212仪器与设备ALC2103电子天平ACCULAB有限公司DHG9070AS新型电热恒温鼓风干燥箱宁波江南仪器厂ANKETGL16C离心机上海安亭科学仪器厂WH861漩涡混合器湖州兰月光电仪器设备有限公司2DHG9140电热恒温鼓风干燥箱广东省医疗器械厂XSP2CA普通光学显微镜上海永亨光学仪器制造有限公司L

10、RH190S恒温恒湿培养箱广东省医疗器械厂LDZX40BI立式蒸汽灭菌锅上海申安医疗器械厂SB4200D超声波清洗机宁波新芝生物科技股份有限公司安捷伦LC1100液相色谱仪上海智岩科学仪器有限公司AGLIENTTCC18色谱柱25046MM，5UM上海楚定分析仪器有限公司PHS25型数显PH计上海精密科学仪器有限公司其他仪器量筒、离心管、烧杯、移液管、三角锥形瓶、试管、试剂瓶、滴定管、容量瓶、玻璃棒、培养皿、移液枪、剪刀、酒精灯、镊子、牙签等。213试剂和培养基试剂氢氧化钠分析纯无锡市佳妮化工有限公司氨水分析纯广东省化学试剂工程技术研究开发中心碳酸氢钠分析纯宜兴市第二化学试剂厂高氯酸分析纯上海

11、化学试剂总厂所属上海二厂氯化钠分析纯宜兴市第二化学试剂厂葡萄糖分析纯广东省化学试剂工程技术研究开发中心乙酸铵分析纯温州市化学用料厂磷酸氢二钾分析纯上海化学试剂总厂所属上海二厂牛肉浸膏生化试剂上海化学试剂公司酵母膏生化试剂上海酵母厂胰蛋白胨生化试剂北京陆桥商检新技术公司蛋白胨生化试剂国药集团化学试剂有限公司丙酮色谱纯北京益利精细化学品有限公司乙腈色谱纯北京益利精细化学品有限公司丹磺酰氯色谱纯ACROS组胺标准品色谱纯SIGMA1,7二氨基庚烷色谱纯阿拉丁培养基普通营养琼脂培养基蛋白胨10G，牛肉膏3G，氯化钠5G，琼脂15G，蒸馏水1000ML，加热溶化，调PH72，冷却至4050保存备用。初步

12、筛选培养基胰蛋白胨5G，酵母膏5G，L组氨酸2G，NACL5G，琼脂15G，甲酚红02G，蒸1000ML，加热溶化，调PH65，121灭菌15MIN，冷却至4050保存备用。运动性检测培养基蛋白胨5G，牛肉膏25G，酵母25G，葡萄糖1G，琼脂20G，海水500ML，蒸馏水500ML，加热溶化后，调PH70，分装试管，121蒸汽灭菌20MIN，冷却后备用。产酸产气检测培养基蛋白胨10G，酵母3G，葡萄糖5G，组氨酸5G，海水500ML，蒸馏水500ML，调3PH65，分装装有小导管的试管，12L蒸汽灭菌20MIN，冷却后备用。淀粉水解培养基蛋白胨10G，氯化钠5G，牛肉膏5G，可溶性淀粉2G，

13、蒸馏水1000ML，琼脂15G，121蒸汽灭菌20MIN，冷却至4050保存备用。蛋白胨水培养基蛋白胨10G，氯化钠5G，蒸馏水1000ML，调PH75，分装试管，121蒸汽灭菌20MIN冷却后备用。葡萄糖蛋白胨水培养基蛋白胨5G，葡萄糖5G，磷酸氢二钾2G，蒸馏水1000ML，调PH72，分装试管，112蒸汽灭菌20MIN，冷却后备用。明胶液化检测培养基牛肉膏03G，蛋白胨1G，氯化钠05G，明胶15G，蒸馏水100ML，加热溶化后，调调PH72，分装试管，121蒸汽灭菌20MIN，冷却后备用。初步筛选培养基胰蛋白胨5G，酵母膏5G，L组氨酸2G，NACL5G，琼脂15G，甲酚红02G，蒸馏

14、水1000ML，加热溶化，调PH65，121灭菌15MIN，冷却至4050保存备用。L组氨酸胰酪胨大豆肉汤发酵培养基L组氨酸10G，大豆蛋白胨17G，NACL30G，磷酸氢二钾25G，丙酮酸钠100G，葡萄糖25G，蒸馏水1000ML，调PH70，分装试管，121蒸汽灭菌15MIN，冷却后备用。22测定方法221鲣鱼成分分析鲣鱼PH的测定将10G鱼肉组织匀浆与90ML蒸馏水混合，制成较稠的浆液，用一台PH计测定。鲣鱼盐分的测定样品处理按固液比例，取具有代表性样品至少200G，去除不可食部分，用研钵或组织捣碎机捣碎，混匀。取样品5G于30ML瓷坩埚中，在130烘箱中烘干。在电炉上碳化至无烟，放入

15、550600高温炉中灼烧2H，取出放冷后，在坩埚内加入少量水用玻璃棒捣碎并研磨均匀转移入100ML容量瓶中定容至刻度，混匀，过滤，取滤液备用。滴定准确移取制备的样品液适量（含氯化钠50100MG，含量低的样品可采用全量分析），于250ML三角瓶中，加水至约100ML（必要时，加23滴百里香酚蓝指示剂，用01MOL/LHNO3或01MOL/LNAOH滴定至刚显淡蓝色，PH值在65105之间），加05ML10铬酸钾指示剂，用01MOL/L的硝酸银标准液滴定至刚显砖红色为终点，同时做一试剂空白对照。鲣鱼水分含量的测定称量皿称取一定量的样品，记录质量，后将称量皿放入烘箱内，盖子应该打开，斜放在旁边，取

16、出时先改好盖子，用纸条取，放入干燥器内，冷却后称重。干燥温度设定为105，每隔一定时间称量一次，直至最后两次重量之差2MG，基本保证水分蒸发完全。鲣鱼挥发性盐基氮的测定样品处理将鲣鱼除去不可食部分，绞碎搅匀，称约100G，置于锥形瓶中，加100ML水，不时震摇，浸渍30MIN后过滤，滤液置冰箱备用。蒸馏滴定将盛有10ML吸收液及5滴6滴混合指示液的锥形瓶置于冷凝管下端，并使其下端插入吸收液的液面下，准确吸取50ML上述试样滤液于蒸馏器反应室内，加入5ML氧化镁混悬液（10G/L），迅速盖塞，并加水以防漏气，通入蒸汽，进行蒸馏，蒸馏5MIN即停止，吸收液用盐酸标准滴定溶液（0010MOL/L）或

17、硫酸标准滴定溶液滴定，终点至蓝紫色。同时做试剂空白试验。222高效液相色谱法测定组胺4无菌条件下，将待测菌株分别接种于10ML组胺发酵培养基中，并设置空白对照组（不接种细菌），均于35下静置培养24H。发酵液预处理7取各菌株发酵液及空白对照各1ML于5ML离心管中，同时分别取组胺标准使用液0L，50L，100L，200L（浓度10MG/L）也于5ML离心管中，用去离子水定容1ML。再依次加入100L2MOL/L氢氧化钠（标准品不加），20UL内标标准使用液，300UL饱和碳酸氢钠，再加入2ML丹酰氯衍生剂溶液进行衍生，震荡混匀后，随后于40烘箱内放置45MIN，再加入100L氨水，再放置40M

18、IN，最后用乙腈定容至5ML，震荡混匀后，取1ML经滤膜过滤后直接进样。色谱条件流动相A001MOL/L乙酸铵，流动相B乙腈与001MOL/L乙酸铵91混合。流动相A流动相B28，流速10ML/MIN，荧光检测器波长254NM。进样量20L。223J2菌株的生理生化实验革兰氏染色取菌落与生理盐水（一滴绿豆大小）23环，自然风干或者吹风机辅助吹干，进行染色。结晶紫染色1MIN，蒸馏水冲洗干净，吹干；碘液染色1分钟，蒸馏水冲洗干净，周围水珠擦掉，95酒精冲洗，蒸馏水冲洗干净，革兰氏染液染色2MIN，蒸馏水冲洗干净，吹干，将载玻片放于显微镜下观察，滴一滴香柏油，观察结果并记录。接触酶试验将24H培养

19、的斜面菌种，用无菌牙签取少量涂抹于已滴有3过氧化氢的载玻片上，立即观察结果，如有气泡产生则为阳性，不产生气泡则为阴性。氧化酶试验将24H培养的斜面菌种，用无菌牙签取少量菌种取少量涂于无菌滤纸上，然后滴加L盐酸二甲基对苯二胺溶液，1015S内呈红色为阳性，否则为阴性。运动性的检测用接种针取少量菌种，穿刺于运动性检测培养基中，于25培养48H后观察。在接种痕迹周围生长或使整个试管变浑浊的，具有运动性；只在接种痕迹处生长的菌种，不具有运动性。产酸产气试验用接种环取少量菌种接种于产酸产气检测培养基中，于25培养48H后观察，并用PH计测定试管内的PH。试管内小导管有气体的为阳性，否则为阴性。能使培养基

20、PH改变一个单位或几个单位的，表明能产酸，几乎不改变（基本保持在原始PH65附近）的，表明不能产酸。淀粉水解试验用接种环取少量菌种接种于淀粉培养基，35培养24H，将盖子打开，加入LUGOL，S碘液于平皿中，轻轻旋转平板，使碘液覆盖整个平皿，出现透明水解光圈的，为阳性，否则为阴性。MR试验用接种环取少量菌种接种于葡萄糖蛋白胨培养物内，35培养48H后，加入甲基红试剂2滴，甲基红变红色者为阳性，变黄色者为阴性。VP试验用接种环取少量菌种接种于葡萄糖蛋白胨培养物内，35培养48H后，加入5滴40氢氧化钾，然5后再加入五滴5奈酚溶液，用力震荡，再加入37恒温箱中保温30MIN，培养物呈红色者，为阳性

21、反应，否则为阴性。吲哚实验将菌接种至蛋白胨水培养基中，37下培养48H以上。在培养液中加入乙醚12ML，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入510滴吲哚试剂（加入吲哚试剂后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察），如有吲哚存在，乙醚层呈现玫瑰红色，此为吲哚试剂阳性反应，否则为阴性反应。明胶液化试验用接种针取少量菌种，穿刺于明胶培养基中，于25培养后，由于明胶在此温度下自行液化，先置4冰箱内30MIN，再观察。部分明胶成流动状态者，为阳性，否则为阴性。23实验方法231组胺生成菌的分离筛选无菌条件下，将冷冻（18以下）鲣鱼的鱼鳃或内脏取出后，用灭菌剪刀剪碎，称取100G置于装有

22、900ML无菌生理盐水的三角瓶中，混合均匀。将三角瓶置于35下，过夜培养。将过夜培养的样品依次稀释101，102，103，104，105，106后，取01ML稀释液涂布于初步鉴别培养基平板上，35下，培养24H，如果菌落周围出现红色或紫色晕环，则可能为组胺生成菌株8，在初步鉴别培养基上，纯化两次以上，作为待测菌株，备用于高效液相色谱法测定其产组胺能力的实验。232J2菌株的生长曲线将J2菌液接种至营养肉汤培养基中培养24H，准确测定菌液浓度后，无菌水稀释到104左右，接种到50ML营养肉汤培养基中，30下培养，接种量为1ML。根据其浑浊度，每2H无菌水进行梯度稀释101、102、103、104

23、、105、106、107、108、109、1010，分别取等量不同稀释梯度菌液到培养皿中，加入冷却至5560培养基，置水平位置迅速旋转平皿，使营养琼脂培养基与菌液混合均匀。倒置于30培养箱中培养48H后，菌落计数，并记录实验结果。233环境因素对J2菌株生长的影响加工和贮藏环境条件不但影响组胺产生菌的活性，同时也能够影响组胺酸脱羧酶的活性，这些条件主要包括温度、PH值、贮藏时间、含盐度、供氧量以及添加剂等9。本文主要研究了温度10、PH11这两个因素。2331温度对J2菌株生长的影响将J2菌液接种至营养肉汤培养基中培养24H，培养液在涡旋振荡器上混合均匀，准确测定菌液浓度后，进行系列稀释至10

24、6，将104、105、106稀释梯度的菌液分别进行五组倒平板。将培养基加热溶化，待冷至5560倒入培养基于无菌培养皿中，每个约15ML，置水平位置迅速旋转平皿，使营养琼脂培养基与菌液混合均匀。然后分别将这五组放置于4（冰箱控制温度），20，25，30，35下静置培养36H（每个温度均设置空白对照），菌落计数，并记录实验结果。2332PH值对J2菌株生长的影响制备PH4，5，6，7，8的营养琼脂培养基。无菌操作将J2菌液接种至营养肉汤培养基中培养24H后，将培养液在涡旋振荡器上混合均匀，准确测定菌液浓度后，进行系列稀释至106，将104、105、106稀释梯度的菌液分别进行五组倒平板。将培养基加

25、热溶化，待冷至5560倒入培养基于无菌培养皿中，每个约倒15ML，置水平位置迅速旋转平皿，使营养琼脂培养基与菌液混合均匀，置30培养箱中培养36H，菌落计数，并记录实验结果。6234环境因素对J2菌株组胺生成量的影响2341温度对J2菌株组胺生成量的影响将J2菌液混匀后等量接种于装有含10组胺酸胰酶蛋白大豆肉汤培养基12的试管中，并置于4，20，25，30，35下静置培养36H（每个温度均设置空白对照），测定培养液中组胺的含量，其中4为将试管放在冰箱中培养，其余温度用培养箱控制，此时PH为74。测定组胺含量的方法见225。2342PH值对J2菌株组胺生成量的影响首先将含1L组氨酸胰酶蛋白大豆肉

26、汤培养基的PH调至4，5，6，7，813，然后将J2菌液混匀后等量接种于装有5ML培养基的试管中，35下静置培养36H（每个PH均设置空白对照），测定培养液中组胺的含量。测定组胺方法见225。3结果与分析31鲣鱼成分分析对鲣鱼PH值、盐分、水分含量和挥发性盐基氮（TVBN）含量分别进行了测定，测定结果见表31。表31鲣鱼成分分析结果含盐量（）PH水分含量（）TVBN（MG/KG）103257859311814203458464541856303557960272055平均值03458061371908标准差00150032278129一般在低温有氧条件下，鱼类挥发性盐基氮的量达到30MG/10

27、0G，即认为是变质的标志。由实验结果可知，此原料新鲜可用。盐分的测定可为微生物生长条件的研究提供一定依据。金枪鱼类的肉质大部分都是呈酸性的14，其PH保持在580左右，原因是贮藏在较低温度下，鱼肉内90以上的水分已冻结，肌球蛋白的ATP酶与微生物的作用受到抑制，但也一定程度上表明鱼体冻藏前的新鲜程度15。32组胺生成菌的分离筛选经过初步鉴别培养基的筛选，从腮中筛选出微生物并编号为X1、X2、X3、X4、X5，从内脏中筛选出微生物并编号为J1、J2、J3、J4、J5，共10株菌。33待测菌株产组胺能力测定利用高效液相色谱法16，对筛选出的待测菌株X1X5，J1J5进行产组胺能力的测定，测定结果见

28、表32。表3210株菌的产组胺能力测定结果菌株X1X2X3X4X5J1J2J3J4J5空白空白加标组胺注“一”表示未检测到组胺，“”表示检测组胺量较少，“”表示检测组胺量较多。由上表可知，只有J2菌株检测到少量组胺，但由于生理生化反应显示J1、J2、J3、J4可能为同一株菌属，所以分析实验结果产生原因可能是菌株培养时间较短，以致产生的组胺量较少，从而影响了高效样品成分7液相的实验结果。选择J2作为后面研究的菌株。34J2菌株生长曲线根据J2菌液的浓度每2H进行稀释倒平板，放置30培养箱中培养48H后1718，菌落计数，实验结果见图31。图31J2的生长曲线实验结果表明，J2在营养琼脂培养基中培

29、养，04H时生长速率非常慢，这个时期为迟缓期；416H生长速率最快，菌体量呈典型的对数增长，这一阶段即为它的指数生长期；1624H菌体量随时间延长基本保持平衡，即处于正生长与负生长相等的动态平衡中，在18H菌体量达到最大值，LG细胞数（个/ML）为1286。这一阶段为它的稳定期。35J2菌株生理生化反应对J2菌株进行生化特性鉴定，共检测13项生化指标，试验结果见表33。表33J2菌株生理生化试验结果生理生化试验形态革兰氏染色淀粉水解运动性MRVP吲哚接触酶氧化酶明胶产气产酸芽孢染色J2菌株结果杆状注“”为阴性，“”为阳性。分析通过形态观察、生长特征、生理生化指标测定，初步判定J2菌株为芽孢杆菌

30、BACILLUSSPP。36环境因素对J2菌株生长的影响361温度对J2菌株生长的影响准确测定J2菌液浓度后，将菌液梯度稀释后，取等量倒平板，分别放置在4（冰箱控制温度），20，25，30，35下静置培养36H（每个温度均设置空白对照），菌落计数，实验结果见图32。由图32可以看出，435温度范围内，J2菌株均可以生长，且随着温度的升高，菌株生长繁殖越快，其最适生长温度为3035，最大生物量达到1267LOGCFU/ML，35生物量有所减少。8图32温度对J2生长的影响362PH值对J2菌株生长的影响制备PH4，5，6，7，8的营养琼脂培养基。准确测定J2菌液浓度后，取等量稀释菌液分别与不同P

31、H值的培养基倒平板，放置在30培养箱中培养36H，菌落计数，实验结果见图33。图33PH值对J2生长的影响由图33可以看出，J2菌株在PH48范围内均可以生长，最适生长PH范围为68，中性环境中生长最好，而且J2在碱性环境中的生长状况好于酸性环境。37环境因素对J2菌株组胺生成量的影响371温度对J2菌株组胺生成量的影响将J2菌液混匀后，取等量接种于装有含10组胺酸胰酶蛋白大豆肉汤培养基的试管中，并置4，20，25，30，35下静置培养36H（每个温度均设置空白对照），测定培养液中组胺的含量，测定方法见222。图34温度对J2菌株产组胺的影响9其中4时，组胺含量为0，表示冷藏状态下没有组胺产生

32、。由图34可以看出，J2在2035温度范围内，组氨酸脱羧酶都有较强活性，且在25时活性最强，检测到组胺最大生成量为549UG/ML,后随着温度的升高活性减弱。根据图32分析可知，30菌株生长繁殖最快，但组氨酸脱羧酶活性25后逐渐减弱。372PH值对J2菌株组胺生成量的影响首先将含10L组氨酸胰酶蛋白大豆肉汤培养基的PH调至4，5，6，7，8。然后将J2菌液混匀后等量接种于装有5ML培养基的试管中，35下静置培养36H（每个PH均设置空白对照），测定培养液中组胺的含量。测定组胺方法见222。表35PH值对J2菌株产组胺的影响由图35可以看出，J2菌株在PH48范围内均有组胺生成，且在PH为5时，

33、有组胺最大生成量986UG/ML，后随着PH值的增大，组胺生成量逐渐减少。由PH值对组胺生成菌的影响实验可知，PH为7时，J2菌株繁殖量最多，但由于PH影响组氨酸脱羧酶的活性，故组胺产量较少。4结论本实验对组胺生成菌J2的形态特征、环境因素对其生长和组胺生成量的影响、生长特征、生理生化指标等进行了研究。通过形态观察、生理生化指标测定，初步确定J2菌株为芽孢杆菌BACILLUSSPP。J2菌株的最适生长温度为30，PH为7左右。并且该实验还分别证实了J2菌株组氨酸脱羧酶活性的最适温度为25，PH为5。要想更精确地确定J2的系统发育地位，还需要对它的16SRDNA寡核苷酸序列进行分析。10参考文献

34、1ARAIT,IKEUCHIY,KISHIMOTOY,ETALCONTAMINATIONOFHISTAMINEFORMINGBACTERIAINRAWFISH,PROCESSEDFISHANDICEWATERFORFISHSTORAGEONMARKETJANNUALREPORTTOKYOMETROPILITANINSTITUTEOFPUBLICHEALTH,2007,582452462宋京玲一起食用日本鲭鱼引起的组胺食物中毒报告J职业与健康，2005,2122272283徐金德一起秋刀鱼引起组胺食物中毒事件的调查J海峡预防医学杂志,2004,105414TSAIY,HSIEHH,ETALHIS

35、TAMINELEVELANDSPECIESIDENTIFICATIONOFBILLFISHMEATSIMPLICATEDINTWOFOODBORNEPOISONINGSJFOODCHEMISTRY,2007,1044136613715KOBAYASHI,T,KIMURA,B,FUJII,T,2000DIFFERENTIATIONOFTETRAGENOCOCCUSPOPULATIONSOCCURRINGINPRODUCTSANDMANUFACTURINGPROCESSOFPUFFERFISHOVARIESFERMENTEDWITHRICEBRANINTJFOODMICROBIOLOGY56,21

36、12186SATOM,TAOZ,SHIOZAKIK,ETALASIMPLEANDRAPIDMETHODFORFISHHISTAMINEANALYSISBYPAPERELECTROPHORESISJFISHERIESSCIENCE,2006,728898927DADKOVE,KRZEKM,PELIKNOVTDETERMINATIONOFBIOGENICAMINESINFOODSUSINGULTRAPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYUPLCJFOODCHEMISTRY，2009（116）,3653708CHANGSC，KUNGHF，CHENHC，ETA1DETERMIN

37、ATIONOFHISTAMINEANDBACTERIALISOLATIONINSWORDFISHFILLETSXIPHIASGLADIUSIMPLICATEDINAFOODBORNEPOISONINGJFOODCONTROL,2008,1916219谢超,王阳光,邓尚贵水产品中组胺产生机制及影响因素研究概述J肉类研究,2009,4747810陶志华,佐藤实金枪鱼肉中组胺菌的分离及其理化性质分析J生物技术,2009,195,414311HERNANDEZHERRERO,MM,ROIGSAGUES,AX,RODRIGUEZJEREZ,JJ,MORAVENTURA,MT,1999HALOTORELA

38、NTANDHALOPHILICHISTAMINEFORMINGBACTERIAISOLATEDDURINGTHERIPENINGOFSALTEDANCHOVIESENGRAULISENCRASICHOLUSJFOODPROT62,50951412CHANGSC,KUNGHF,CHENHC,ETALDETERMINATIONOFHISTAMINEANDBACTERIALISOLATIONINSWORDFISHFILLETSXIPHIASGLADIUSIMPLICATEDINAFOODBORNEPOISONINGJFOODCONTROL,2008,19162113ARAIT,IKEUCHIY,KI

39、SHIMOTOY,ETALCONTAMINATIONOFHISTAMINEFORMINGBACTERIAINRAWFISH,PROCESSEDFISHANDICEWATERFORFISHSTORAGEONMARKETJ,ANNUALREPORT,TOKYOMETROPOLITANINSTITUTEOFPUBLICHEALTH,2007,45824525014赖小玲,何志权,陈华絮,等几种还产品储藏期间组胺含量及其品质的变化J食品科学,2007,112833333615PHUVASATES,SUYEFFECTSOFELECTROLYZEDOXIDIZINGWATERANDICETREATMENT

40、SONREDUCINGHISTAMINEPRODUCINGBACTERIAONFISHSKINANDFOODCONTACTSURFACEJFOODCONTROL2010,21328629116KUDAT,MIYAWAKIMREDUCTIONOFHISTAMINEINFISHSAUCESBYRICEBRANNUKAJFOODCONTROL,2010,21211322132617EMBORGJ,LAURSENB,DALGAARDPSIGNIFICANTHISTAMINEFORMATIONINTUNATHUNNUSALBACARESAT2CEFFECTOFVACUUMANDMODIFIEDATMOSPHEREPACKAGINGONPSYCHROTOLERANTBACTERIAJINTERNATIONALJOURNALOFFOODMICROBIOLOGY,2005,101326327918PARAMASIVAMS,THANGARADJOUT,KANNANLEFFECTOFNATURALPRESERVATIVESONTHEGROWTHOFHISTAMINEPRODUCINGBACTERIAJJOURNALOFENIRONMENTALBIOLOGY,2007,282271274