淋巴细胞亚群检测在儿科的应用免疫.ppt

1、淋巴细胞亚群检测在儿科的应用,朱 镭联系电话：0351-3361059、13593176688,为临床提供更多信息，提高医疗安全防护措施。筛查免疫缺陷疾病及监测药物对免疫功能的影响。指导临床合理用药。,淋巴细胞亚群检测在儿科的应用,反复呼吸道感染的临床概念和处理原则： 免疫功能测定有助于发现原发、继发免疫缺陷病。包括体液免疫、细胞免疫；补体、吞噬功能等检查，也应注意有无顽固湿疹、血小板减少、共济失调、毛细血管扩张等异常。,在特异性免疫反应中，体液免疫和细胞免疫之间既各有其独特的作用，又可以相互配合，共同发挥免疫效应。当细菌、病毒等病原体侵入人体后，首先诱发体液免疫，因为T细胞不能识别入侵的病毒

2、等抗原，只有当病毒或胞内寄生菌侵入宿主细胞，细胞表面出现了来自病毒等病原体的小分子蛋白质抗原，并与细胞表面的受体结合成复合物时，T细胞才能识别，进而引发细胞免疫，使靶细胞裂解，暴露出隐藏其中的病原体，再通过体液免疫将其清除。假若病原体不是胞内寄生物，则只能诱发体液免疫。,体液免疫与细胞免疫的联系：,从作用对象上看，体液免疫清除的是游离在寄主细胞外的抗原及其产生的有毒物质；细胞免疫则摧毁侵入到寄主细胞内的病毒、胞内寄生菌或外来的组织团块、癌变的细胞等。 从作用方式上看，体液免疫是通过效应B细胞（浆细胞）分泌抗体，并与抗原发生特异性结合来清除抗原；细胞免疫则是通过效应T细胞（杀伤T细胞）分泌穿孔素

3、使靶细胞溶解死亡。,体液免疫和细胞免疫的区别：,医学综述2000年第6卷第7期,艾滋病:免疫功能普遍低下是艾滋病患者最明显的特征。艾滋病患者外周血中CD4细胞显著低于正常对照组，而CD8细胞在正常范围内，CD4 /CD8比值下降。 慢性乙型病毒性肝炎:慢性肝炎患者CD3、CD4下降，CD8亦稍有下降，CD4/CD8比值正常，说明慢性肝炎患者T细胞辅助性、杀伤性功能下降，引起病毒清除困难，导致慢性迁延性肝损伤；慢活肝、肝硬化组CD3下降，CD4亦明显下降，CD8增高, CD4 /CD8比值下降，造成患者免疫自稳功能下降，从而引起自身免疫损伤，肝细胞持续性、大量损伤，形成慢活肝、肝硬化；乙肝患者C

4、D8细胞增高，CD4 /CD8下降，导致过度活化的细胞毒性T细胞对肝细胞产生损害作用。因此，对T细胞亚群的检测，有助于慢性肝炎类型的鉴别，有助于了解肝炎病毒复制的程度，了解药物疗效，更好地指导治疗。 此外，在传染性单核细胞增多症、巨细胞病毒感染、流行性出血热、麻疹急性期、水痘、猩红热和一些上呼吸道感染的患者均可表现为CD4细胞下降，CD8细胞升高以及CD4 /CD8比值下降。因此，CD4/CD8比值的倒置被认为是病毒感染性疾病的重要指征。,在细菌性疾病中的研究表明，结核性胸膜炎患者胸水中CD4/CD8比值明显增高，而重症结核病患者外周血中该比值下降。 不同类型麻疯患者的T细胞亚群研究发现，瘤型

5、麻疯患者CD8细胞下降，CD4细胞上升，而结核样型患者CD8细胞则在正常范围。 寄生虫病：Coney等研究了曼氏血吸虫病患者外周血T细胞亚群，发现肝脾大的患者，其CD3和CD4细胞均较正常人显著下降。另外，弓形体病、疟疾、利什曼病等都表现为CD8细胞上升，CD4细胞及CD4 /CD8比值下降。 总之，测定外周血CD3、CD4和CD8细胞亚群的水平可以正确判断机体的细胞免疫功能，为临床提供用药指导和判断预后的可靠指标。,正常人外周血白细胞CD45-SSC及T亚群散点图,患儿男, 5个半月,以“发热、腹泻11天,皮疹7天”为主诉入院。入院后诊断为: (1)腹泻病; (2)发热待查:结缔组织病?(3

6、)营养不良性贫血。入院后给予抗感染、补液,调整肠道微生态,营养支持治疗,腹泻治愈,仍发热,皮疹渐增多,蔓延至上腹部、胸前,皮疹呈棕色或棕黑色。入院第12天对患儿左大腿内侧一皮疹下结节进行活检见:表皮角化,真皮脂肪坏死,炎性细胞浸润,考虑脂膜炎。但疗效不显。体液免疫检查正常; T细胞亚群: CD3+ 2.41%(56%84% ), CD4+ 0.53% (27%51% ), CD8+ 0.50% (15%44% ), CD4+/CD8+ 1.06。追问病史:此患儿生后接种卡介苗部位常有渗液,不久结痂,结痂后不久又出现渗液,如此反复。遂对既往骨髓片及组织片进行抗酸染色,均见大量抗酸杆菌。确诊为原发

7、性T细胞免疫缺陷病合并卡介苗接种后播散性结核病、结核性结节性脂膜炎。后因经济困难家长要求出院随访结果出院2 d后死亡。,原发性免疫缺陷病的早期识别和干预: 2001年11月,美国疾病控制和预防中心在乔治亚洲首府Atland召开了一个专题研讨会。会议最终就PID(primary immunodeficiency,原发性免疫缺陷病)的相关问题达成了四点框架:公共卫生评估:运用传统公共卫生学方法评价PID对社会健康的影响;以人群为基础的干预:建立、贯彻和评价针对新生儿筛查实验和早期识别原发性免疫缺陷病的方案,以便能早期诊断和治疗PID患者;筛查和诊断手段的评估:以保证PID患者对治疗的顺应性和提高生

8、活质量;交流:加强医疗保健者与公众之间的交流,以促进及时、恰当地对PID进行诊断和干预。,目前以人群为基础的新生儿筛查(newborn screening, NBS)主要应用于遗传性疾病,但尚未开展有关PID的NBS。SCID是一种严重的联合免疫缺陷,患儿在出生后处于无症状期的时间很短,如果不进行有效的免疫重建,往往在婴儿期死亡。免疫重建的时间与预后的关系密切,如果在出生3个月内进行造血干细胞移植存活率接近95%,如果在出生3个月后进行移植则存活率降至76%。这是将SCID纳入NBS的重要原因。SCID的免疫表型特点主要为严重的T淋巴细胞减少，流式细胞仪分析T细胞亚群(包括CD3+、CD4+和

9、CD8+)、B细胞(CD19+) 和NK细胞(CD16+/CD56+)比例是主要的实验室检查,可对大多数患儿作出诊断。,通过流式细胞仪对肾移植术后受者外周血T细胞亚群进行动态监测，结果显示肾移植术后发生排斥反应时，CD3 , CD4细胞及CD4 /CD8比值均升高，经激素冲击治疗有效的患者CD3, CD4细胞及CD4 /CD8比值逐渐下降，而CD3 , CD4细胞及CD4 /CD8比值居高不降者说明激素冲击治疗无效。,SARS患者T淋巴细胞亚群变化的初步研究(中西医救治专题 陈文莉),SARS患者早期出现CD3+，CD4+，CD8+明显降低，且CD4+/CD8+比值下降甚至倒置，提示SARS患

10、者早期即存在免疫抑制现象，这一现象提醒我们早期使用免疫抑制作用的治疗方法应当慎重，用药时间不宜长，应避免用超大剂量激素（如甲基强的松龙（MP）0.5g/d）冲击疗法。,胸腺肽1对严重感染患儿的临床疗效及免疫功能的影响 中国临床药学杂志 CHINESEJObTINALOFCLINICALPHARMACY 2004年第13卷第3期,目的：探讨儿童严重病毒感染和细菌感染中，胸腺肽a1对提高细胞免疫的功能，以及改善预后的作用。方法：临床表现有多脏器受累的感染病例11例，在原先治疗方案不变下，加用胸腺肽a1，观察用药后患儿的临床疗效，并采用流式细胞仪检测用药前后T淋巴细胞亚群水平。结果：11例患儿经治疗

11、后感染症状均有明显的改善，T细胞亚群均有不同程度的改变，降低的CD4+T细胞明显上升，增高的CD8+T细胞明显降低，CD4CD8比值趋于正常。观察期间未见有明显的药物不良反应。结论：胸腺肽a1对T淋巴细胞亚群的异常具有双向调节作用。,(1)低碘组(LI):摄碘量(CD3+CD8+)%,常可以用CD4/CD8的比值来体现,但目前尚无这一比值的正常值范围。一般而言CD4/ CD8比值应1,也就是说CD3+CD4+T细胞数应CD3+CD8+T细胞数。当发生比值倒置应注意判别是由于CD3+CD4+T细胞减少还是由于CD3+CD8+T细胞增多所致。,判断各项指标的高低:,流式细胞仪获得的结果是外周淋巴细

12、胞群中各种细胞组分所占的比例,这种比例的变化是相互影响的。一个细胞组分的增高或降低必然造成其他组分降低或增高。因此当发生异常时必须明确是哪一细胞组分所引起的变化。由于整个细胞群中主要有3种细胞:T、B和NK细胞。通常根据其中2种相同变化趋势来判定淋巴细胞亚群百分比的变化是由另一种独立变化趋势的细胞亚群所引起。,临床免疫学是一门较新的临床专业,目前在各国、各地区根据本地的实际情况,形成了不同类型的组合方式,如血液-免疫、风湿-免疫、肾脏-免疫、过敏-免疫等不同类型,其出发点是借助传统专业的优势培育临床免疫专业的发展，而儿童免疫功能评价更缺少系统的文献资料。细胞免疫功能检测是儿童临床免疫功能评价的一项主要指标。 儿童免疫功能评价的目的是定位免疫受损环节并评价严重性,包括临床和实验室评价2个方面。临床评价应详细了解相关病史,尤其是感染相关的问题，通过对病史的了解，结合体格检查可初步定位免疫受损环节，进一步的实验室评价帮助确定免疫受损环节。,谢谢!,