鱼类嗅觉基因的Southern杂交分析研究【开题报告】.doc

1、毕业论文开题报告生物工程鱼类嗅觉基因的SOUTHERN杂交分析研究一、选题的背景与意义鱼类的嗅觉器官是其重要的化学感受器之一，由鼻孔、鼻腔和位于鼻腔内的嗅囊构成，鱼类嗅觉器官的进化与发展也经历了一个由低级到高级、由简单到复杂的过程。鱼类的嗅觉器官在鱼类的生活中，诸如摄食、御敌、生殖和集群等行为上发挥着重要的作用。本研究主要利用SOUTHERN印迹杂交技术检测本实验室已经鉴定出9个家族的嗅觉受体基因（OR）在基因组中分布情况，同时预测嗅觉基因在基因组的拷贝数，旨在为了解大黄鱼的嗅觉分子生理提供理论基础。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题研究的基本内容1、从大黄鱼内脏或肌肉组织中提取DNA，并电

2、泳检测DNA的浓度；2、用两种酶（HINDIII和ECOLII）酶切目的DNA；3、地高辛标记的探针制备；4、探针与目的DNA的SOUTHERNBLOT杂交；5、杂交膜的洗脱和显色。拟解决的问题1、大黄鱼DNA的提取；2、地高辛标记探针的制备；3、电转法转膜的效率；4、杂交膜的洗脱与显色的控制。三、研究的方法与技术路线（一）研究方法1DNA的提取和回收从大黄鱼的肝脏或肌肉组织中提取适量基因组DNA；2随机引物法标记探针分别用两种酶（ECOLI1,HIND3）酶切大黄鱼基因组DNA，电泳胶回收目的DNA片段，制作地高辛标记探针；3电转法转膜采用电转法将目的DNA片段转移到尼龙膜上（80V，50M

3、IN）；4SOUTHERNBLOT膜烘干（120,30MIN）后，先用预杂交液进行预杂交，再用DIG标记探针杂交过夜；5杂交膜的洗脱和显色杂交完毕，经洗膜后，再用抗体与DIG标记探针杂交，再次用WASHINGBUFFER洗膜后，即可加入显色剂，将被显色剂充分浸透的杂交膜装入一封闭的袋子中，并置于暗室显色过夜。显色完全后，查看膜上的条带从而获得相应家族基因的拷贝数，最后将膜烘干并拍照。这样用9种不同的DIG标记探针就可以获得大黄鱼嗅觉基因系统9大家族基因的拷贝数。（二）技术路线四、研究的总体安排与进度201011201012实验前1毕业论文选题。2进行文献查阅和资料收集。3制定具体研究计划和试验

4、方案。4开题答辩与综述。20101220111实验中1试验相关试剂准备。2数据和材料整理、分析。2011120115实验后1完成2篇外文翻译。2论文撰写、提交并答辩。五、主要参考文献电转法转膜探针杂交BLOTINGAGROSE电泳大黄鱼基因组DNA提取DIG标记探针制备酶切效率检测与浓缩基因组DNA酶切洗膜后，显色剂显色洗膜后，抗体与DIG标记探针杂交烘干，拍照1陈星玉,中国鲤科鱼类嗅觉器官的研究J动物分类学报,1988,1321821942孟庆闻,殷名称鳐类和银鲛类嗅觉器官的研究J水产学报,1981,532092143孟庆闻,殷名称鲨类嗅觉器官的研究C鱼类学论文集,北京科学出版社,19812

5、012094孟庆闻,苏锦祥,李婉端鱼类比较解剖C鱼类学论文集,北京科学出版社,19873273345陈星玉中国鲤科鱼类嗅觉器官的研究J动物分类学报,1988,1321821946郑文莲鳞科鱼类的嗅觉器官及其在分类上的意义J热带海洋,1987,611117FISHELSONCOMPARATIVEMORPHOLOGYANDCYTOLOGYOFTHOLFACTORYORGANSINMORAYEELSWITHREMARKSONTHEIRFORAGINGBEHAVIORJANATOMICALRECORD,1995,24344034128王艺磊,张子平,郑微云黑鲷嗅上皮的超微结构J台湾海峡,1994,13

6、21291329EVANSRE,ZIELINSKIB,HARATJDEVELOPMENTANDREGENERATIONOFTHEOLFACTORYORGANINRAINBOWTROUTJCHEMORECEPTIONINFISHES,1982,1537410MMTHEWSJA,KFIEKALJANMBIOEHEMJ1988,169202511SDANM,EDUARDEJBIOCHEMBIOPHYSMETHODSJ1997,3515315912顾红雅,翟礼嘉植物分子生物学实验手册M北京北京高等教育出版社,1988134213杨克强,王跃进,张今今等鱼类嗅觉系统研究J农业生物技术学报,2005,13

7、329429814黄培堂分子克隆实验指南M北京科学出版社,200248751515HAUPTC,TOLNEREA,HEINEMANNU,ETA1BRAINRESJ2006,18123223816SOUTHERNEMDETECTIONOFSPECIFICSEQUENCESAMONGDNAFRAGMENTSSEPARATEDBYGELELECTROPHORESISJMO1BIO1,1975,9850351717ENGLERBLUMG,MEIERM,FRANKJ,ETA1REDUCTIONOFBACKGROUNDPROBLEMSINNONRADIOACTIVENORTHERNANDSOUTHERNB

8、LOTANALYSESENABLESHIGHERSENSITIVITYTHANPBASEDHYBRIDIZITIONJANALYTBIOEHEM,1993,21023524418刘垣,郑文杰,赵卫东等转基因油菜地高辛标记DNA探针杂交检测方法的建立J口岸卫生控制,2005,104101219陆小平,周文军,小岛峰雄地高辛标记探针在SOUTHERN杂交分析中的技术要点J生物学通报,2003,381525320闫新甫,李润植,苗泽伟等转基因植物M北京科学出版社,200315419321祝梅香,邹星,沈沽等转人组织蛋白酶K基因小鼠的SOUTHERN杂交鉴定J中国比较医学杂志,2005,151404222刘成武,张西臣,李建华等犬贾第虫端粒重复序列的SOUTHERN印迹杂交分析J中国病原生物学杂志,2008,3318318523杨克强,王跃进,张今今等用限制性酶切和SOUTHERN杂交对葡萄无核基因分子标记的分析J,农业生物技术学报,2005,13329429824马小波,王芙蓉,张传云等多位点整合的转基因棉花后代分子鉴定J棉花学报,2008,20191325陈昆松,李方,徐昌杰等改良CTAB法用于多年生植物组织基因组DNA的大量提取J遗传,2004,26452953126陈德富,陈喜文现代分子生物学原理与技术M北京科学出版社,2006158165