双酶法对乌贼眼中透明质酸提取率的影响【开题报告】.doc

1、毕业论文开题报告食品质量与安全双酶法对乌贼眼中透明质酸提取率的影响一、选题的背景与意义透明质酸是一种由DN乙酰氨基葡萄糖和D葡萄糖醛酸为结构单元的高分子粘多糖，由相同的二糖单体质量复排列而形成的无支链的直链多聚物，相对分子质量在10100万之间，具有独特的分子结构和理化性质，它在有机体内显示出多种重要的生理功能，具有特殊的保水、保湿作用；分子量大的可成膜于皮肤表面，起到强的保湿、润滑作用，分子量小的可渗入真皮层，促进血液循环、改善中间代谢，从而使皮肤光滑、柔嫩，而且透明质酸无致炎性及抗原性，是理想的“粘性手术”材料，对提高眼科、骨科手术效果起重要作用，所以被广泛应用于化妆品、医药等方面。HA广

2、泛分布于各种动物组织中，且不同的动物组织与细菌来源的透明质酸无种属差异。迄今为止，已在结缔组织、脐带、人血清、鸡冠、关节滑液、软骨、眼玻璃体等组织中已分离得到HA。目前，制备透明质酸主要有两种途径一种是从动物组织中提取，一种是从微生物发酵液中提取。国内大多从鸡冠、人脐带、动物眼球等组织中提取透明质酸。动物组织提取法所得的HA一般纯度不够高，而且生产效率低、成本高、原料来源受限制。虽然该法有上述缺点，但它仍然是当今生产医用HA主要的方法。以乌贼眼球为原料提取透明质酸方面的研究在国内未见报道，而乌贼眼睛是一类数量巨大的废弃物，相对于其他鱼眼较大，晶状体所占体积也大。在水产品加工过程中产生大约154

3、0的下脚料，其中鱼眼约占25，所以如何从废弃的乌贼眼球中提取透明质酸，进行科学的综合利用，变废为宝是一件非常有意义的事。本研究以乌贼鱼眼为原料，研究了乌贼眼透明质酸的提取工艺，使乌贼资源得以合理开发利用，从而利于提高其加工的综合效益及经济附加值，变废为宝。二、研究的基本内容与拟解决的主要问题本实验的研究内容包括确定了最佳提取工艺以透明质酸得率为指标，通过单因素和响应面试验考察了酶解时间、PH值、酶解温度、酶用量以及双酶的加酶顺序对HA提取率的影响，并优化了工艺参数。1、福林法对酶活性进行测定2、氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸标准曲线的绘制3、链霉菌蛋白酶水解时酶解温度、时间、PH、酶用量等的确定和优化

4、4、链霉菌蛋白酶和中性蛋白酶进行复合水解拟解决的问题1、酶解条件对HA提取率的影响2、酶解条件的优化三、研究的方法与技术路线1资料检索以“透明质酸”、“提取”、“酶法”、“复合酶法”等为检索词，检索中国期刊全文数据库（19892010）、CNKI数据库（19892010），以“HA”、“HYALURONICACID”、“ABSTRACT”等为关键词检索ELSEVIER期刊SCIENCEDIRECT19892010查找相关文献。2、透明质酸的提取21葡萄糖醛酸含量测定葡萄糖醛酸含量采用BITTERMUIR咔唑法测定，经换算得到样品中HA的含量。22氨基葡萄糖含量测定氨基葡糖含量的测定参照ELSO

5、NMORGAN法测定，以盐酸氨基葡萄糖为标准品23HA提取方法的确定及优化231预处理冷冻乌贼眼里取出玻璃体液体，过滤除杂取滤液备用。232盐溶取2G眼液，加入5倍体积0。2MOL/L氯化钠溶液，搅拌提取4H。233酶解2331双酶水解及条件优化通过参考文献选择最适酶解乌贼眼液提取透明质酸的中性蛋白酶和酶解活性较高、专一性较强的链霉菌蛋白酶为双酶酶解的酶种类。根据文献，在两种酶最适的酶解条件下确定双酶酶解的先后顺序（实验已得先中性后链霉菌较好）。在叶菊芳实验的基础上确定链霉菌蛋白酶的最适酶解时间、温度、PH、加酶量。通过响应面优化，确定最佳酶解条件。技术路线乌贼眼睛玻璃体盐溶酶法提取灭酶离心过

6、滤取上清液加双氧水脱色乙醇沉淀离心收集沉淀溴化十六烷基吡啶络合乙醇沉淀沉淀真空干燥粗多糖四、总体安排与进度2009年9月2010年11月1、实验前的准备工作查找资料，文献综述的撰写，英文参考文献的翻译；2、文献整理，实验方案的确定，完成开题报告2010年12月2011年月1、开展实验；2、优化实验方案中的各条件；3、获得实验过程中的各类数据。2011年3月2011年5月1、整理和补充相关数据，整理实验结果；2、撰写论文初稿。3、论文定稿。五、主要参考文献1EVEREDD，WHELANJ，EDS。THEBIOLOGYOFHYALURONAN，CIBAFOUNDATIONSYMPOSIUM143M

7、。JOHNWILEYSONS，1989615。2张红霞，徐三魁程宝珠等提取法制备透明质酸的研究J郑州工业高等专科学校学报，2002，18（3）63张彬，周武羊眼透明质酸的制备J食品科技，2004，14罗瑞明透明质酸HA的国内外研究现状J。宁夏农学院学报，2001，22（1）62645潘虹梅透明质酸的研究现状综述J四川食品与发酵，2003，1（5）696朱广平，方煜平透明质酸制备方法及应用研究的进展J中国医药工业杂志，1996，2（8），3823847陈忠杰，郭爱玲。透明质酸的应用及生产J。河南化工，2007，24748498张照明，冯强，高玲玲。透明质酸的产需情况及市场分析J。精细与专用化妆品

8、，2007，15924279姚美琴鱿鱼眼透明质酸的提取工艺研究J食品科技，2009，34（5）24124410RICARDOPVIEIRA，CRISTIANAPEDROSA，PAULOA。SMOURAO，ETAL。EXTENSIVEHETEROGENEITYOFPROTEOGLYCANSBEARINGFUCOSEBRANCHEDCHONDROITINSULFATEEXTRACEDFROMTHECONNECTIVETISSUEOFSEACUCUMBERJ。JBIOL。CHEM，1993，3222542262。11郑艾初，陈健等。糙海参酸性粘多糖的提取纯化工艺探讨J。现代食品科技，2007，235

9、6567。12罗红宇，高鹏等。赤魟软骨粘多糖的制备J。中国海洋药物杂志，2005，2441417。13郭玉涛，陈斌，江元汝等。从牛眼玻璃体中分离纯化透明质酸的新方法J。精细化工，2008，25324625014赵玉红，韩琳琳，迟玉杰酶法提取鸡蛋壳膜中透明质酸的研究J。食品研究与开发，2008，29（1）404315汪建，汪清，谢镇酶解条件控制对透明质酸工业化提取的影响J。2010，41（1）202216刘成梅，万茵，涂宗财等。百合多糖脱蛋白方法的研究J。食品科学，2002，231899017沈敏，冯睿，刘贝贝等。碱提菜籽多糖脱蛋白方法的研究J。食品科技，2006，927327518汪江波，薛海

10、燕，邹玉玲，等。调控细胞通透性以提高透明质酸的产量和相对分子质量J。华西药学杂志，2006，215465467。19张可喜。日完成人工合成透明质酸EB/OL。HTTP/JAPAN。PEOPLE。COM。CN/2001/11/25/RIBEN2001112514005。HTML，2005061520张照明，冯强，高玲玲。透明质酸的产需情况及市场分析J。精细与专用化妆品，2007，159242721张谦朋。不同组织来源透明质酸的分离纯化及收率比较J。聊城大学学报，2004，1715153。22洪水声，陈佳，滕利荣等兽疫链球菌变异株产生的透明质酸的纯化及表征J高等学校化学学报；2005，523周海东

11、，倪晋仁，黄文，等。膜技术分离透明质酸发酵液可行性研究J。食品与发酵工业，2005，31114651。24应国清，孟优娣，游文淑大孔离子交换树脂分离纯化玻璃酸的研究J离子交换与吸附，1999，15（4）34935325GERARDA，MORAIMAR。ANEWCHROMATOGRAPHICMETHODFORTHEFRACTIONATIONOFHYALURONICACIDJ。BIOCHEMICALANDBIOPHYSICALRESEARCHCOMMUNICATIONS，1983，112116826郭学平，刘爱华，葛保胜等过氧化氢氧化降解法制备低分子玻璃酸J1998，6811827MIYAZAKIT，YOMOTAC，OKADASULTRASONICDEPOLYMERIZATIONOFHYALURONICACIDJPOLYMDEGRADSTAB，2001，747785。28贺芸透明质酸的降解研究D。南京理工大学；201029覃彩凤低相对分子质量透明质酸的制备研究D。江南大学；2007