1、小鼠及蛙类基本实验技术Basic Experimental Technique of Mouse and Frog,医学基础实验教学中心洪天国2012年5月,小鼠及蛙类基本实验技术,一、实验目的,学习并掌握小鼠捉拿和各种给药方法 腹腔注射，灌胃给药Intraperitoneal Injection and Intragastric Administration 学习并掌握蛙类捉拿及常用实验技术 坐骨神经干腓肠肌标本制备，坐骨神经干分离Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle SpecimenFree of Sciatic Nerve熟悉机能
2、实验室动物实验规章制度 动物领取，动物处理 Animal Collection and Burial,二、实验材料与动物,试剂 （Agent）0.9%NaCl溶液（生理盐水），任氏液（Ringers）器材 （Equiment）1ml注射器，小鼠灌胃器，蛙类基本手术器械（包括粗剪刀、眼科剪、组织镊、刺蛙针、锌铜弓、玻璃分针、蛙板等），图钉，玻璃平皿，手术线，纱布等。 动物 （Animal）小鼠（每组2只），蟾蜍（每组2只）,1.小鼠捉拿 （Mice Seizure）1）双手捉拿方法,三、实验方法：小鼠实验技术,1,2,3,4,右手抓尾后拉，左手拇指和食指抓住小鼠头颈部皮肤，将其固定于左手大鱼际处
3、；拉直四肢并用左手无名指、小指压紧尾和后肢，右手即可作注射或其它实验操作。,2)单 手 捉 拿 方 法,3,1,2,4,2.小鼠腹腔注射 （Intraperitoneal Injection） 左手固定小鼠，使腹部朝上，右手持注射器，取45角刺入左侧下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜太高，刺入不能太深，以免伤及内脏，推注前应回抽确认。 注射量一般为0.10.2 ml/10g体重。,三、实验方法：小鼠实验技术,3.小鼠灌胃（Intragastric Administration）,1,小白鼠,1,灌胃量一般为 0.10.3ml/10g体重。,2,以左手捉持小鼠，使头部朝上，保持头颈部平直。右手持
4、装有灌胃针头的注射器，自右口角插人口腔，从上腭进入食管。如遇阻力，应退出后重插，不能强力插，以免穿破食管或误入气管。,三、实验方法：小鼠实验技术,三、实验方法：蟾蜍(Toad )的捉拿,用左手将动物贴紧在手掌中，并以左手中指、无名指、小指压住其左腹侧和后肢，拇指和食指分别压住背部、头部和前肢，右手进行操作。 根据实验需要，可用图钉，采取俯卧位或仰卧位固定在蛙板上。,注意:抓取蟾蜍时，禁忌挤压两侧耳部毒腺，以免毒液射入眼中。,枕骨大孔,左手握蟾蜍，食指下压吻端，拇指按压背部，其余三指紧贴腹部。找到枕骨大孔刺入1-2mm，分别捣损脑组织和脊髓。 脑和脊髓完全破坏的标志是：呼吸停止，四肢松软并处于对
5、称位置。,三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备,1.破坏脑脊髓（Damage of Spinal Cord and Brain）,三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备,在骶髂关节水平上1cm处剪断脊柱，去除头、前肢和内脏，保留部分脊柱和下肢。用任氏液小心冲洗坐骨神经及其周围组织上的血液。,2.剪除躯干上部及内脏（Prune of Upper Part of Torso and Viscera）,剪去尾骨,剥去余下组织的皮肤,沿脊柱正中到耻骨联合将标本剪开,标本放到盛有任氏液的烧杯中。,三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备,3.剥皮 （Skinning）,1,2,3,4,4.游离坐骨
6、神经 （Free of Sciatic Nerve） 腓肠肌向上将标本固定于蛙板上，由脊柱仔细将坐骨神经分离至膝关节处，并在脊柱旁结扎。,三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备,5.制成坐骨神经腓肠肌标本（Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle Specimen） 腓肠肌向上将标本固定于蛙板上，由脊柱仔细将坐骨神经分离至膝关节处，并在脊柱旁结扎。6.标本检验 (Specimen Examination)用锌铜弓（任氏液预先湿润）轻轻刺激坐骨神经，腓肠肌收缩即表示标本制备完好。,三、实验方法：蛙类坐骨神经腓肠肌标本制备,视频：蛙类坐骨神经
7、腓肠肌标本制备,四、注意事项,捉拿小鼠时应规范操作，避免被咬。腹腔注射时，针头刺入部位不宜太接近上腹部或太深，以免刺破内脏。针头与腹腔的角度不宜太小，避免刺入皮下。灌胃时，针头沿鼠口角通过食管进入胃内。灌时如很通畅，则表示针头已进入胃内；如动物有呕吐或强烈挣扎，必须拔出后按上述方法重新操作。如进针不顺，决不可硬向里插。,小鼠实验,抓取蟾蜍时，小心毒液。,四、注意事项,蛙类实验,抓取蟾蜍时，小心毒液。分离神经时，应用玻璃分针。保持坐骨神经腓肠肌标本活性（加任氏液、不要用手和器械夹捏）。,四、注意事项,蛙类实验,玻璃分针,机能实验室动物实验规章制度,动物领取：实验开始后，按规定数量在动物房领取，领完动物后及时关闭鼠笼或蛙笼。实验过程中非操作因素导致动物死亡，须经主讲老师批准后方可重新领取，严禁擅自拿取。动物实验：应爱惜实验动物，严禁浪费。动物尸体处理：实验完毕后，动物尸体集中于回收桶，由值日同学负责处理。,开始实验,小鼠及蛙类实验基本技术器械清单,2. 蛙类实验基本技术,1:小鼠灌胃、腹腔注射方法,鼠灌胃器,锌铜弓,
