梅毒讲义牛磊.ppt

1、,祝大家工作顺利！,性病实验室检测诊断与临床解释 邹平县人民医院检验科牛磊,内容刚要,问题及背景性病实验室检测性病实验室质量管理,历史上的梅毒患者,历史上的梅毒患者,贝多芬、舒伯特、玛丽塔德、波特莱尔、林肯、福楼拜、莫泊桑、凡高、尼采、王尔德、凯伦、布里森、乔伊斯、希特勒、列宁、斯大林、马丁路德.,肝炎，肺结核，梅毒,梅毒发病报告数列传染病第三位 我国出台防控规划,每小时一个梅毒宝宝？,案例聚焦,性病防治管理办法 -卫生部/ /卫计委,目前我国监测五种性病,梅毒概述,梅毒概述,梅毒分期,获得性梅毒（后天梅毒）,胎传性梅毒（先天梅毒）,早期梅毒病程2年,早期先天梅毒病程2年,1一期梅毒2二期梅毒

2、3早期潜伏梅毒,1三期皮肤黏膜骨骼梅毒 2心血管，神经，晚期潜伏期梅毒,1三期皮肤黏膜骨骼梅毒 2心血管，神经，潜伏期梅毒,一期梅毒,梅毒螺旋体,皮肤或粘膜局部繁殖,淋巴管,附近淋巴结,梅毒病原学检测暗视野显微镜核酸检测,局部无任何症状,潜伏期平均4周入侵局部炎症反应,初疮（硬下疳）,一期梅毒,不治疗4-5周自然消失进去一期潜伏期,14-40天平均4周,二 期 梅 毒,梅毒螺旋体,血液,人体免疫作用,大部分螺旋体被杀死,其余繁殖,6到8周,低热，浅表淋巴结肿大皮肤粘膜疹骨骼，眼睛，神经系统炎症症状,不治疗,症状可自然消失，呈现潜伏状态,二期潜伏梅毒,梅毒血清学检测:特异性抗体检测非特异性抗体检

3、测,梅毒病原学检测暗视野镜检核酸检测,三期梅毒,二期 复发梅毒可反复 出现,2 年后,晚 期梅 毒,侵犯,皮肤粘膜10%,骨骼,心血管系统10%,神经系统15%,（1）梅毒血清学检测:特异性抗体检测非特异性抗体检测（2）病理检测,获得性梅毒的自然病程,感染梅毒 螺旋体,2-4 周,一期梅毒,二期梅毒,1-3月,1-3 月,潜伏梅毒,2到50年,终身潜伏 65%,三期梅毒 35%,各期梅毒取材部位及检测方法,梅毒的免疫性,梅毒疑似病例、确证病例诊断依据,梅毒实验室检测项目及临床意义,梅毒实验室检测项目及临床意义,病原学检测,病原学检测的临床意义,常用梅毒实验室检测方法,血清学检测,非特异,非 梅

4、毒螺旋体特异性抗原实验非 梅毒螺旋体抗体实验抗 心磷脂抗体 实验（反应素）TRUST 、 RPR 、 VDRL试剂组成：卵磷脂，心磷脂，胆固醇,现症患者,特异,梅毒 螺旋体特异性抗原实验梅毒 螺旋体抗体实验抗 螺旋体抗体 实验TP- - RT 、 ELISA 、 CLIA 、 TPPA 、 FTA ABS 、 WB 等试剂组成：梅毒螺旋体或其成分,梅毒患者,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,非特异,快速血浆反应素环状卡片试验 (RPR) 黑,甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 红,性病研究实验室试验 (VDRL) 神经梅毒,实验模拟,窗口期前带现象生物学假阳性血清固定,非梅毒螺旋体抗原血清学试

5、验原理,非梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点,在卡片的一个圆圈内加入50ul血清，同样加入阳性及阴性对照仪器： 水平旋转仪转速？转幅？定性试验 加 试剂量1 滴= = ？ ul水平 旋转仪旋转时间？28用小棒将血清和对照均匀涂开铺散盖满整个圆环的表面，注意不能溢出圈外，试剂室温预温30分钟，将抗原轻轻摇匀，吸取17ul抗原液加到每一个圆圈。,非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点,定性试验（TRUST为例）,（1）反应：将卡片置水平旋转仪上，转速：1002 r/min，转幅2cm，旋转8分钟（2）在亮光下用肉眼观察结果滴度相差两个滴度才有临床意义切勿使用振荡器,非梅毒

6、螺旋体抗原血清学试验操作要点,非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点,1.根据需要确定稀释度，1:1（原血）,1:2,1:4顺延，在反应板的每个圆环上加上1滴50ul0.9%的生理盐水，勿将盐水涂开2在第一个圆环内加入50ul血清，用加样枪来回吸放5-6次（避免气泡形成），然后将混合液50ul加入第二个圆环，重复操作至需要稀释度,最后一个圆环中50ul混合液弃去3.从最高稀释度开始，将不同稀释度的标本均匀涂布整个圈内，不同患者血样的混合棒不能混用，4.在每个圆圈内加入恢复至室温的轻轻混匀的抗原17ul,非梅毒螺旋体抗原血清学试验操作要点,*定量试验-定量试验血清稀释不需要使用试管,定量试验原倍血清

7、滴度为1:1,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验临床意义,隐性梅毒一般滴度1:8但不排除1 :8,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,TPPA 阳性TRUST 原倍阴性需稀释排除前带反应,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,非梅毒螺旋体抗原血清学试验特点,梅毒螺旋体抗原血清学检测,特异,梅毒免疫层析法快速检测 (RT) TP重组抗原,梅毒酶联免疫吸附试验（ （ELISA） ） TP重组抗原,发光免疫分析法（ （CLIA） ） TP重组抗原,梅毒螺旋体颗粒凝集试验 (TPPA) 金标准 TP,荧光螺旋体抗体吸收试验（ （FTA-ABS） ） TP,

8、梅毒螺旋体蛋白印迹试验（ （WB） ） TP,梅毒IgM抗体检测 抗体检测（ （IgM） ） 早期TP先天TP神经TP,梅毒螺旋体抗原血清学试验原理,TPPA,TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性和特异性 试剂抗原：nichols株精制菌体成分 TPPA是目前WHO公认的梅毒抗原血清学试验的“金标准”，常用于新方法、新试剂的参照标准,FTA-ABS试验,以完整形态的Nichol 梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter 株螺旋体制备而成）处理过的患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FITC）标记的抗人免疫球蛋白

9、，与血清梅毒螺旋体抗体结合。在荧光显微镜下，螺旋体显示苹果绿色的荧光，即为阳性反应。梅毒螺旋体表面抗原、类属抗原与非致病性密螺旋体间有交叉反应，吸收剂可排除影响。FTA-ABS试验是检测梅毒的经典“金标准”试验。唯一排除了其他螺旋体干扰的实验操作繁琐，成本高，不适用于常规实验室,TPELISA试验原理,TPELISA试验是用重组梅毒螺旋体抗原包被固相板条，加上梅毒血清和单克隆抗体酶标记物，形成抗原抗体复合物与酶标记物结合，用酶联检测仪判定试验阳性反应。本法可用于大样本血清检测。试剂抗原： TP基因重组抗原TP17、47、15、42.5分区抗原 不能区分IgG与IgM抗体，导致它们检测敏感性增加

10、。化学发光法的临床应用基本同ELISA,TP-RT 试 验 原 理,以硝酸纤维素膜为载体，将重组的梅毒螺旋体抗原固定在膜上，待检标本（如血清）与标记的特异性抗原结合并沿着固相载体迁移，并显示出有色条带。本法快速、简便；可疑结果可用TPPA或其他方法进行重复试验。,梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义,梅毒螺旋体抗原血清试验的临床意义,梅毒螺旋体抗原血清学实验特点,梅毒螺旋体抗原血清学实验特点,HIV感染者的梅毒血清学检测在HIV感染的早期，机体免疫力尚正常，由于激活了B细胞使反应性增强，梅毒非特异性抗体滴度往往增高，甚至出现假阳性反应。在HIV感染的晚期，由于机体免疫力明显下降，梅毒患者的非特异性

11、抗体可呈阴性（假阴性）。感染HIV的梅毒患者治疗后非梅毒螺旋体试验滴度下降比较慢。,梅毒螺旋体抗原血清学检测,梅毒血清学试验结果解释 （梅毒临床诊断参考依据）,先天（胎传）梅毒的实验室诊断依据,梅毒 IgM抗体（ TP- IgM）,梅毒实验室检测方法,梅毒实验室检测策略,过去: 必须RPR 初筛试验 TPPA 确证试验现在 : 可选 TP- - RT 初筛实验 RPR 确证实验,非梅毒螺旋体抗原血清学试验,梅毒螺旋体抗原血清学试验,排除试验假阳性确证梅毒螺旋体现症感染,排除治愈的既往感染者确证梅毒螺旋体现症感染,策略1 ：采用非梅毒螺旋体抗原血清实验初筛,淋球菌的实验室检测,淋球菌概述菌株保存,2004年 2013年全省梅毒、淋病报告例数,我国的淋病去哪儿了？,淋病实验室诊断,淋病实验室诊断策略,淋球菌种保存, 淋球菌培养基每2天传代 脱脂牛奶 -25 2月，-70 1年 液氮 长期 冻干 长期 填写菌株资料表 山东省淋球菌省级耐药检测点 山东省皮肤病性病防治研究所,衣原体的实验室检测,概述方法学比较,生殖道沙眼衣原体感染特点,生殖道沙眼衣原体检测,谢谢,