液相色谱分析分离甲地孕酮中2β-甲基化杂质【文献综述】.doc

1、毕业 论文文献综述 应用化学 液相色谱分析分离甲地孕酮中 2 -甲基化杂质 在现今的 医药原料药的生产过程中，伴随着主产物通常会有许多副产物的生成，也就是医药原料药中的杂质，这些杂质在药物中并无治疗作用，或者还影响药物的稳定性和疗效，甚至还会对人体健康有害。所以必须 把这些副产物控制在安全范围内 ，所以 需要对药物中微量杂质进行分离提纯。 现阶段药物中杂质的检测分离方法有很多种，由于 药物中的一些杂质 ， 如反应的中间体 ， 副产物 ， 分解产物等 ， 和药物的结构相近 ， 与某些试剂的反应也相同或相似 ， 必需分离后再检查 。又因为 色谱 法可以利用药物与杂质的吸附或分配性质的差异 ，可 将

2、它们分离 并 检测 ，所以 广泛应用于药物的杂质检 测 中 。通常常见的色谱方法有： 薄层色谱法 ， 纸色谱法 ， 高效液相色谱法 等。我们主要运用高效液相色谱法来分离甲地孕酮中 2 -甲基化杂质。 高效液相色谱法 （ High Performance Liquid Chromatography HPLC） 又称 “ 高压液相色谱 ” 、 “ 高速液相色谱 ” 、 “ 高分离度液相色谱 ” 、 “ 近代柱色谱 ” 等。高效液相色谱是色谱法 的一个重要分支，以 液体 为 流动相 ，采用高压输液系统，将具有不同 极性 的 单一溶剂 或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的 色谱柱 ，在

3、柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 其分离原理是： 溶于流动相中的各组分经过固定相时，由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。 按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法 、 离子色谱法及 空间 排阻色谱法。 高效液相色谱法是 20 世纪 70 年代迅速发展起来的一种高效、快速的新型分析分离技术 。 高效液相色谱因其独特的优点已经广泛应用于药物的含量测定、组成分析、物质分离、质量控制等方面 。 在药典的所有分析方法中它是发展最快的一种

4、分析方法 。 高效液相色谱法有“三高一广一快”的特点： 高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，1 必须对载液加高压。 高效：分离效能高。可 选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。 高灵敏度：紫外检测器可达 0.01ng，进样量在 uL 数量级。 应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。 分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15 30 分钟，有些样品甚至在 5 分钟内即可完成，一般小于 1 小时。

5、 此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也 有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有“柱外效应”。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。 高效液相色谱法（ HPLC）的出现不过三十多年的时间，但这种分离分析技术的发展十分迅猛，目前应用也十分广泛。其仪器结构和流程也多种多样，典型的高效液相色谱仪结构一般都具备贮液器、高压泵（ 驱动流动相和样品通过色谱分离柱和检测系统 ）、梯度洗提装置（用双泵）、进样 器（

6、将待分析样品引入色谱系统 ）、色谱柱（ 分离样品中的各个物质 ）、检测器（ 将被分析组在柱流出液中浓度的变化转化为光学或电学信号 ）、恒温器、记录仪等主要部件。 高效液相色谱法一般步骤为： 高压泵将贮液罐的流动相经进样器送入色谱柱中，然后从检测器的出口流出，这时整个系统就被流动相充满。当欲分离样品从进样器进入时，流经进样器的流动相将其带入色谱柱中进行分离，分离后不同组分依先后顺序进入检测器，记录仪将进入检测器的信号记录下来，得到液相色谱图。 我们的高效液相色谱法研究可以试着向以下方面发展： 一、 进一步的缩短分析时间，提 高分离效率。应用先进的检测仪器和方法，对流动相、固定相进行调节或改变，采

7、用梯度洗脱、柱切换技术等。梯度洗脱的高效液相色谱法 ,能分析较宽极性范围的样品 ,较等度洗脱具有很大的优势。 二、 实现多成分分析，加快冲洗柱效率。高效毛细管电泳在分高极性化学成分方面有较大优势，在分析大量的复方制剂方面显示了较高的能力。由于毛细管几乎不会出现高效液相色谱分析中常出现的柱床污染现象，而且用过的毛细管柱只需很短的时间进行2 冲洗后，即可以进行第二个样品的分析，快速高效且分辨率很高。 三、 进一步向自动化、智能化及联用技术上发展。新近提出的智能 多柱高效液相色谱系统利用切换技术的模块式分离性能，把样品分块的切换进不同性质的色谱柱 ,再用合适的流动相洗脱。全过程采用智能化控制。自动化

8、和智能化的高效液相色谱法能够得到进一步的广泛运用。运用更加方便，快捷和高效。 高效液相色谱法不仅分离效能高，而且可以准确地测定各组分的峰面积，在药 物分析 方面的应用日益增多。 （ 1） 在药物鉴别中的应用 在 HPLC 法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数，可用于药物的鉴别。如中国药典收载的药物头孢羟氨苄的鉴别项下规定：在含量测定项下记录的色谱图中，供试品 主峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致。头抱拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用 HPLC 法进行鉴别。 （ 2）在杂质检查中的应用 HPLC 分离效能高，灵敏，在药物的杂质检查中

9、应用广泛。主要用于药物中有关物质的检查。“有关物质”是指药物中存在的合成原料、中间体、副产物、降解产物等物质，这些物质的结构和性质与药物相似，含量很低，只有采用色谱的方法才能将其分离并检测。若杂质是已知的，又有杂质的对照品，可用杂质对照品做对照进行检查。若杂质是未知的，可以采用主成分自身对 照法或峰面积归一化法进行检查。 （ 3）在含量测定中的应用 用高效液相色谱法侧定含量可以消除药物中的杂质，制剂中的附加剂及共存的药物对测定的干扰。中药材及其制剂组成复杂，基中不少有效成分的含量测定也越来越多地采用了高效液相色谱法。 此外，高效液相色谱法还在手性分离，药物浓度检测中都有广泛的应用。 正是 由于

10、高效液相色谱集经典液相色谱和气相色谱的优势于一身，无论柱效、选择性还是分析程度都达到或超过了它们，近年来对高效液相色谱的不足之处进行了不断地改进，使这项技术日臻完善，使得近年来对高效液相色谱法监测中药的 研究逐渐增多。高效液相色谱法正是以其稳定、可靠、高效的特点成为 医 药研究的最重要的分析方法 之一 。 参考文献 3 1王志祥，莫芬珠，余国琼，制备型液相色谱分离技术进展 J，化工时刊， 1997,11（ 5）： 12-17. 2魏莉，张焜，方岩雄，等。制备型高效液相色谱技术的研究进展 J，广东化工， 2005,11:5-7. 3李瑞萍，黄骏雄，高效制备液相色谱柱技术的研究进展 J，化学进展，

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