超声波提取扁玉螺多糖技术研究【毕业论文】.doc

1、毕业论文 文客久久网 本科 毕业论文 (设计 ) 题 目： 超声 波 提取扁玉螺多糖 技术 研究 学 院： 学生姓名： 专 业： 食品质量与安全 班 级： 指导教师： 起 止 日期： 毕业论文 文客久久网 目录 摘要 . 2 Abstract . 3 1 前言 . 4 1.1 扁玉螺概述 . 4 1.2 多糖概述 . 4 1.3 提取方法 . 4 1.4 多糖测定方法 . 5 2. 实验试剂与仪器 . 5 2.1 实验材料 . 5 2.2 主要仪器 . 5 2.3 主要试剂 . 6 3.实验方法 . 6 3.1 扁玉螺干粉的制作 . 6 3.2 苯酚溶液的制备 . 6 3.3 扁玉螺多糖含量的

2、测定 . 6 3.4 葡萄糖标准曲线的制作 . 7 3.5 结果计算及公式 . 7 3.6 扁玉螺多糖显色稳定性实验 . 8 3.7 单因素试验 . 8 3.8 正交实验 . 8 4 实验结果与讨论 . 8 4.1 葡萄糖标准曲线的绘制 . 8 4.2 苯酚 -硫酸比色法最大吸收峰的选择 . 9 4.3 稳定性实验 . 10 4.4 溶剂对萃取率的影响 . 10 4.5 温度对萃取率的影响 . 11 4.6 料液比对萃取率的影响 . 11 4.7 提取时间对萃取率的影响 . 12 4.8 正交实验结果 . 13 5.总结 . 14 参考文献 . 14 毕业论文 文客久久网 致谢 . 错误 !未

3、定义书签。 毕业论文 文客久久网 超声波提取扁玉螺多糖技术研究 摘要 本文主要研究利用超声波提取法对扁玉螺多糖的提取，并对提取条件进行优化。利用硫酸 -苯酚显色法，与葡萄糖标准曲线进行比照，计算多糖量。在对提取条件进行单因素（例如温度，料液比，萃取剂，时间等）的实验数据分析基础上，再进行正交实验以得到优化因素 。 提取扁玉螺多糖 最优条件为以水为提取溶剂， 料液比（ W/V）为 1/25， 提取温度为60 ， 提取 2h， 其多糖提取量为 37.02mg/g。 关键词 扁玉螺；多糖 ； 超声波提取 毕业论文 文客久久网 The research of Ultrasonic extraction

4、 technology of the polysaccharide of Neverita didyma Abstract Ultrasonic extraction method of Neverita didyma polysaccharide extraction was studied in this paper, and the extraction conditions were optimized. The polysaccharide contents were calculated by sulfuric acid-phenol colorimetric method, an

5、d comparing with the standard curve of glucose. In the condition of extracting the single factors (such as temperature, ratio of material to liquid, extraction time, etc.) were studied on the basis of analysis of the experimental data, and orthogonal experiments were carried out to get the optimized

6、 technology. Finally the optimal conditions were that extraction solvent was water, solid to liquid ratio is 1:25, the extraction time was 2h,the extraction temperature of 60 .And the polysaccharide extracted from Neverita didyma is 37.02mg / g. Keyword Neverita didyma;Polysaccharide;Ultrasonic extr

7、action; 毕业论文 文客久久网 1 前言 1.1 扁玉螺概述 扁玉螺 (Neverita didyma)为我 国海沿海重要的腹足类经济产品之一。通常在潮间带到水深 4050m 处的软质海泥中生活，以猎取其他贝类为食 1-2。贝壳主要为半球形状，表面较为光滑，能看到明显的生长纹。 1.2 多糖概述 多糖作为动植物体中重要的不可缺少的组成部分，它参与了几乎所有的新陈代谢活动。而更多的是它对生命活动的起到的至关重要的作用。这是因为在多糖链上携带着生物信息。它在细胞表面的分子识别过程中起着决定性作用。从发现多糖开始，科学家们的目光就已经被它给深深吸引。对于多糖研究也不断的了解和加深，越来越多的多

8、糖种类及其带来的巨大作用与好处更为科学家们所惊叹。糖生物化学已成为生命科学研究领域的新前沿 ， 糖链也被称为是生命科学中的第三条链 12。 从多糖的来源我们可以分为：植物性多糖和动物性多糖。目前对于多糖的研究大多是针对于植物性多糖。 动物多糖存在和分布极为广泛，几乎存在于所有动物组织器官中。 Murry3在对海洋生物天然产物的研究中发现许多海洋动物含有种类和数量不同的具有生物活性多糖，如棘皮动物（刺参）、软体动物（贝类）、甲壳类动物（虾、蟹等）及鱼类（鲨鱼）等的某些组织都有多糖的存在。对于动物多糖的研究起步较晚，但近年来已逐步 受到重视。 1.2.1 多糖作用 多糖是一种免疫调节剂 (激活机体

9、免疫反应 )，但也有少数多糖具直接杀死癌细胞作用或两者俱存 ，能 治疗 因 机体免疫功能受到严重损伤的癌症和爱滋病，治疗多种免疫缺损疾病和某些细菌 ， 病毒引起的疾病。多糖还具有明显的抗病毒、抗感染、降血糖、降胆固醇、降血脂以及最近发现的刺激神经细胞生长作用。 1.2.2 应用前景 多糖的应用大致可分为 2 类：一类是在医药领域，利用多糖的独特理化性质，如易形成凝胶、高渗透压、高粘度和吸水性，制备医药材料、药物缓释剂、血浆代用品等；或利用多糖的抗原性、抗肿瘤等生 物功能或活性制备疫苗或新药。另一类是在保健食品领域，活性多糖作为功能性因子调节或增强人体免疫功能或起到抗肿瘤、抗突变、抗病毒、抗凝血

10、、抗溃疡、抗氧化、降血糖、降血脂等保健作用。 目前对于多糖的应用，大都是看重了其抗肿瘤、抗突变、抗病毒等的作用。由于现在的人群，在自身以及外界环境条件下，身体基本都处于亚健康的状态，所以对于保健食品这一新兴的东西具有极大的吸引力。 1.3 提取方法 目前常用的提取方法有水提取法、酸或碱提取法、热提取法、微波提取技术、超声波提取法等等。实验室中经常使用的即为水提取法，此法 不但耗时，耗力，且效率不高，而酸碱毕业论文 文客久久网 提取法则对目标提取物有要求，否则无法达到提取效果。相比于以上几种提取方法，超声波提取技术不但节约能源，操作简单，且提取效果好。 超声波提取法作为目前新起的提取技术，被应用

11、于多个方面，而在多糖提取上，其也只是多用于植物性多糖的提取，特别是中草药有效成分如多糖、黄酮等各种类型成分的提取，是中药制药彻底改变传统提取工艺的新方法、新工艺 4。有研究表明 5-7，组织在超声波的强烈震动与搅拌作用下，可以加速组织的破碎以及内部物质如：蛋白质，脂质等微小物的析出进入溶剂，从而 有效的缩短提取时间，且省去了大量的人力物力。另一方面，在整个超声波过程中，它仅仅是个物理变化，不掺杂有任何的化学过程，这相当于在短时间内变相的保护了目标提取物的生物活性，而同时提高细胞的破碎速度，缩短提取时间，大大的提高了提取效率。 1.4 多糖测定方法 目前用于多糖含量检测的方法有多种，例如：硫酸

12、-苯酚法、蒽酮 -苯酚法、有 3， 5-二硝基水杨酸盐比色法和 Somogyi-Nelson法等 8。其中硫酸 -苯酚法与蒽酮 -苯酚法较为常用，实验室中也多用此两种方法。 硫酸 -苯酚法实验原理 9：糖在浓硫酸作用 下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在 10100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在 490nm 波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定 160min 以上。 针对目前超声波提取的优势 ，应用前景 以及对动物性多糖的研究较

13、少，故可以利用该技术， 以扁玉螺为材料， 进行 超声波提取动物性多糖的 可行性实验，以备未来在工厂的大规模提取分离做准备，研究各个提取因素对提取效 果的影响，和最终综合条件下的优化。 2. 实验试剂与仪器 2.1 实验材料 扁玉螺：采购于 南珍菜场。 扁玉螺干粉的制备：本实验研究扁玉螺全脏器的 多糖 提取率，活体扁玉螺（购置于舟山南珍菜场），洗净去壳，烘干水分后放入高速组织捣碎机捣碎，分别用等体积的丙酮和 95%的乙醇浸泡 10 小时和 2 小时，出去滤液后放置于 40 的烘箱中干燥，粉碎后过 60 目筛，装于密封袋中，放置冰箱备用。 2.2 主要仪器 仪器名称 型号 厂家 超声波清洗 器 S

14、K3210LHC 上海科导超声仪器有限公司 高速组织捣碎机 DS-1 上海标本磨具厂 紫外分光光度计 UV-1100 上海美谱达仪器有限公司 干燥箱 DGG-9240A 电热恒温干燥箱 毕业论文 文客久久网 手提式高速万能粉碎机 DTF-250 温岭市林大机械厂 飞鸽牌离心机 TDL-40B 上海安亭科学仪器厂 电子天平 BAS124S 赛多利斯科学仪器有限公司 2.3 主要试剂 试剂（规格） 厂家 浓硫酸 (分析纯 AR) 国药集团化学试剂有限公司 苯酚 (分析纯 AR) 国药集团化学试剂有限公司 丙酮 (分析纯 AR) 国药集团化学试剂有限公司 乙醇 (分析纯 AR) 国药集团化学试剂有限

15、公司 碳酸钠 (分析纯 AR) 国药集团化学试剂有限公司 3.实验方法 3.1 扁玉螺干粉 的制作 将刚买来的新鲜扁玉螺去壳，洗净。用高速组织捣碎机绞碎，将其磨成粉状物。而后加入丙酮，浸泡 12 小时，再放入乙醇中浸泡 2 小时进行醇溶，去脂，去单糖。于 40 下过滤，烘干 10 小时左右。再用手提式高速万能粉碎机再次捣碎均匀。粉末过 60 目筛，放入冰箱 4下保存，备用。 3.2 苯酚溶液的制备 3.2.1 苯酚的活化 苯酚为重馏酚，称取 100g 苯酚， 0.05g 碳酸氢钠和 0.1g 铝片，置圆底烧瓶中加热蒸馏，收集 180 182 的馏分 10。 3.2.2 90%苯酚溶液 准确称取

16、 90g 苯酚（ AR）于棕 色瓶中，加入蒸馏水 10mL 进行溶解，避光，在室温下可保存数月。 3.2.3 9苯酚溶液 准确移取取上述 90苯酚溶液 3mL，加蒸馏水至 30mL，现配现用。 3.3 扁玉螺多糖含量的测定 3.3.1 测定波长的选择 11 取一定量的葡萄糖标准品和扁玉螺粗多糖溶液经苯酚 -浓硫酸显色后，在 400-800nm 范围内进行光谱扫描，选择最大的吸收峰波长。 毕业论文 文客久久网 3.4 葡萄糖标准曲线的制作 3.4.1 1%葡萄糖标准溶液的制备 先将分析纯葡萄糖置于 80 下干至恒重，而后用分析天平精确称取 1.000g。加少 量蒸馏水溶解。将溶液移入 100mL

17、 容量瓶中，加入 0.5mL 浓硫酸，加水定容至刻度线。 3.4.2 100g/L葡萄糖标准溶液的制备 精确吸取 1mL 上述标准液至 100mL 容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度。 3.4.3 葡萄糖标准曲线的制作 取 20mL 刻度试管 11 支，从 0 10 分别编号，依照表 1 中要求的剂量加入溶液和水，摇匀。加入硫酸时须缓慢从管液正面加入，以 5 20s 为好。摇匀。比色液总体积为 8mL，在恒温下放置 30min。显色。然后以空白为参比，在 490nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标 ，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 表 1 苯酚 -硫酸法 葡萄糖标准溶液 试剂组成

18、 3.5 结果计算及公式 单位为： mg/g。 其中： A为测得的吸光度。 m1为扁玉螺多糖称取量。 试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 100g/L葡萄糖（ mL） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 蒸馏水（ mL） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 9%苯酚（ mL） 1 浓硫酸（ mL） 5 11 0 0 01 0 0)5.08(0 5 7 1.0)0 2 3 5.0-( mA 萃取率毕业论文 文客久久网 3.6 扁玉螺多糖显色稳定性实验 取一定量试样按多糖的测定方法

19、操作，每隔 15 分钟测定 1 次吸光度，测定 2h，观察吸光度的稳定性。 3.7 单因素试验 3.7.1 溶剂对扁玉螺多糖萃取率 的影响 称取扁玉螺干粉 0.5000g 左右，按料液比（ W/V）分别为 1:50、 1:62.5、 1:75、 1:100 分别使用水与乙醇作溶剂进行超声提取。其他因素设定为在温度为 60 下提取，超声萃取120min，超声功率为 59KHz，并且离心 20min，转速为 4000r/min 获得，取上清液，而后定容至 100mL 容量瓶中，静置保存。按照苯酚 -硫酸法测定扁玉螺多糖的浓度，分析萃取溶剂对扁玉螺多糖得率的影响。 3.7.2 温度对扁玉螺多糖萃取率

20、的影响 称取扁玉螺干粉 0.5000g 左右，按料液比（ W/V） 分别为 1:50、 1:62.5、 1:75、 1:100，溶剂为水。提取条件设定在温度分别为 50、 60、 70 下，经过超声萃取 120min，超声功率为 59KHz，并其离心 20min，转速为 4000r/min，取上清液，而后定容至 100mL 容量瓶中，静置保存。按照苯酚 -硫酸法测定扁玉螺多糖的浓度，分析萃取溶剂对扁玉螺多糖得率的影响。 3.7.3 料液比对扁玉螺多糖萃取率的影响 称取扁玉螺干粉 0.5000g 左右。按料液比（ W/V）分别为 1:50、 1:62.5、 1:75、 1:100，溶剂为水。其他

21、条件设定为提取 温度为 60 下，经过超声萃取 120min，超声功率为 59KHz，并且离心 20min，转速为 4000r/min，取上清液，而后定容至 100mL 容量瓶中，静置保存。按照苯酚 -硫酸法测定扁玉螺多糖的浓度，分析萃取溶剂对扁玉螺多糖得率的影响。 3.7.4 提取时间对扁玉螺多糖萃取率的影响 称取扁玉螺干粉 0.5000g 左右。料液比（ W/V）为 1:50，溶剂为水。其他因素设定为在温度分别为 60、 70 下，经过不同时长（ 60min， 75min， 90min， 105min， 120min， 135min，150min， 165min， 180min）的超声，在超声功率为 59KHz，并且离心 20min，转速为 4000r/min，取上清液，而后定容至 100mL 容量瓶中，静置保存。按照苯酚 -硫酸法测定扁玉螺多糖的浓度，分析萃取溶剂对扁玉螺多糖得率的影响。 3.8 正交实验 通过分析单因素试验所得数据，确定其主要的影响因素及在其因素附近上选取 2-3 个水平，参考正交实验表格，做正交实验，确定扁玉螺多糖提取的最优条件组合。 4 实验结果与讨论 4.1 葡萄糖标准曲线的绘制 利用苯酚一硫酸法显色，测定葡萄糖各浓度的吸光度，以吸光度为纵坐 标，葡萄糖浓度