LCMSMS农药一齐分析法(Ⅱ).doc

1、181. 适用范围适用于 LC/MS/MS 农药的一齐分析法（）中农药的检测。2. 编制依据依据日本厚生劳动省LCMS 农药一齐分析法编制。3. 方法原理水果、蔬菜、加工产品中的农药残留经乙腈提取，提取溶液经净化、浓缩用 50%的甲醇定容后，LC/MS/MS 测定，用外标法定量。 4. 试剂4.1 乙腈：色谱级 4.2 丙酮：色谱级4.3 正己烷：色谱级4.4 乙酸乙酯：色谱级4.5 无水硫酸钠：分析纯4.6 甲苯：色谱级4.7 甲醇：色谱级4.8 氯化钠：分析纯4.9 0.01M 盐酸：8.29ml 浓盐酸定容至 1000ml5. 仪器设备5.1 Waters UPLC TQD5.2 食品加

2、工器 5.3 菜刀，案板5.4 电子天平5.5 均质机5.6 布氏漏斗，分液漏斗，普通漏斗，滤纸5.7 梨形瓶（250ml，100ml）5.8 锥形瓶（200ml，100ml）5.9 C18 固相萃取柱 （1G 6ml）5.10 氨基复合柱 （Carbon/NH 2 500mg 6ml）5.11 硅胶柱 Silica （500mg 6ml）5.12 旋转蒸发仪5.13 氮吹仪5.14 玻璃离心管（10mL）5.15 分液漏斗振荡器5.16 真空泵5.17 移液枪（1mL，200L）6. 分析步骤6.1 试料的制备：（除不加样品外，试剂空白与样品同步处理）19将送交实验室的不少于 500 克的样

3、品于食品加工器搅细（对于大块状的样品可先用水果刀切成小块，再放于食品加工器中搅细） 。粉碎后的样品装于一次性的塑料袋中备用。6.2 提取6.2.1 准确称取 10.0g（精确到 0.1g）搅细的样品（原料称取 20.0g）于均质杯中，加入 70ml 乙腈，在高速组织捣碎机中均质 5min。6.2.2 将样品减压抽滤，用 30ml 乙腈冲洗均质杯，也过滤，合并滤液。6.2.3 将滤液倒入装有 7gNaCl 的 300ml 分液漏斗中，用 20mL0.01M 盐酸冲洗三角瓶，也倒入分液漏斗中，在分液漏斗震荡器上剧烈震荡 10min，静置 10min，使乙腈相和水相分层。6.3 浓缩准确移取全部上层

4、清液于茄形瓶中。在 40水浴锅中旋蒸至大约 20ml。6.4 净化6.4.1 用乙腈 10mL 活化固相萃取柱（BE-C18 ） ；将约 20ml 样品液过萃取柱后，用 3mL 乙腈冲洗容器，并作为溶出液过柱子，溶出液约 23ml 用三角瓶接收；6.4.2 加无水硫酸钠 3-4 勺干燥，静置（约 15min） ；过滤，用 40mL 乙酸乙酯（1020ml23 回）洗涤三角瓶，过滤，合并滤液 ；6.4.3 将滤液在 40C 下减压条件下浓缩，至近干；用 3mL 丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解。6.4.4 将 ENVI-Carb LC-NH2 和 Sep-pak Vac Silic

5、a 固相萃取小柱串联依次用 5ml 甲醇、5ml 丙酮、10ml正己烷润洗，倒入样品的丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解液，再用 10mL 丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）冲洗茄形瓶，亦倒入。用 2mL 丙酮：甲醇（1：1）冲洗样品瓶，倒入萃取柱，收集，再将 18 mL 丙酮：甲醇（1：1）倒入萃取柱，收集。6.4.5 将滤液在 40C 下减压条件下浓缩，至近干；用 5mL50%的甲醇水溶液溶解，超声溶解，取 1.5ml于 1.5mL EP 管中 10000rpm，10min，离心，取上清液过 0.22m 尼龙滤膜，过滤，移入样品瓶中待测。7.分析条件7.1 UPLC 条

6、件 Waters ACQUITY UPLC 移动相A 5mM 醋酸铵（AcNH4）水溶液B 5mM 醋酸铵（AcNH4）甲醇溶液20 色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18 1.7m （2.1mm*100mm） 温度色谱柱温度 40 样品柜温度 温度 5 泵（LC 梯度程序）流速 0.3mL minTime(min) A(%) B(%)0.0 90 1011.5 35 6513.0 5 9514.5 5 9514.6 90 10Run Time 17.5 进样量 注入量 5L（部分环针溢出进样）7. 2 MS 条件 LC/MS/MS 仪器条件TQ Detector Capillary

7、0.50kV Cone - Extractor 3V RF Lens 0.1V Source Temp 150 Desolvation Temp 400 Desolvation Gas Flow 900L/hr Cone Gas Flow 50L/hr LM Resolution 1 11.0 HM Resolution 1 11.0 Collision Gas Flow 0.15mL/min218. 操作流程图： 称取样品 10.0g乙腈 70ml5000-10000 转/min，5min过滤至 200ml 锥形瓶中残渣中加入 30ml 乙腈过滤合并滤液到含有 7gNaCl 的分液漏斗中震荡

8、 10 分钟，静置分层，取乙腈层（上层）乙腈层 40C 下减压浓缩至约 20mL固相萃取柱（BE-C18）净化20mL0.01M 盐酸冲洗锥形瓶后倒入分液漏斗乙腈 10mL 活化3mL 乙腈冲洗容器作为溶出液过柱约 20ml 样品液过萃取柱溶出液约 23ml 用三角瓶接收三角瓶中加无水硫酸钠 3-4 勺干燥约 15min 后过滤 40mL 乙酸乙酯（1020ml 23 回）洗涤三角瓶，过滤，合并滤液滤液在 40C 下减压条件下浓缩至近干固相萃取柱 ENVI-Carb LC-NH2 和 Silica 小柱净化依次用 5ml 甲醇、5ml 丙酮、10ml 正己烷润洗3mL 丙酮：正己烷：三乙胺（2

9、0：80：0.5）溶解过柱，再用 10mL 冲洗容器过柱，过柱液不收集超声溶解，过萃取柱20mL 丙酮：甲醇（1：1）溶出（分两次） ，收集溶出液。溶出液在减压条件下浓缩至近干5mL 50%的甲醇水超声溶解，取 1.5ml 于 1.5mLEP 管中22附表 LC/MS/MS 农药的一齐分析法（ ）检测明细序号 項目名（中国語） 項目名（英語） ESI 母离 子 cone（V） 子离 子 collision（ V)方法检出限（mg/kg ）141 121 1-萘基乙酸 1-Naphthylacetic acid 184.9 16184.9 50.01160.8 142 (2,4-二氯苯氧基)乙酸

10、丁酯 2,4-D（2,4-PA) 218.8 22 124.9 18 0.01126.9 163 4-氯苯氧基乙酸 4-Chlorophenoxyacetic acid 184.9 24 184.9 5 0.01140.9 144 2-甲基-4-氯苯氧乙酸 MCPA 198.9 26 198.9 5 0.01140.9 125 2-甲-4-氯丁酸 MCPB 226.9 16226.9 50.01126.8 366 碘苯腈 Ioxynil 369.7 48214.8 320.01315.9 10O 7 三氟羧草醚 Acifluorfen 359.8 18194.9 300.01182 208 四

11、唑嘧磺隆 Azimsulfuron + 425 35139.1 400.01167.1 259 甲基碘磺隆 Iodosulfuron methyl + 508.1 40141.1 250.0186.1 2510 灭草喹 Imazaquin + 312.2 40267.2 200.01155.9 18O 11 咪唑磺隆 Imazosulfuron + 413 26152.8 120.01168.1 3012 胺苯磺隆 Ethametsulfuron-methyl + 411.2 40 196.1 15 0.01261.1 1513 乙氧嘧磺隆 Ethoxysulfuron + 399.2 402

12、18 250.01265.8 16O 14 炔草酸 Clodinafop acid + 312 36238.2 240.01126.8 1415 调果酸 Cloprop 198.9 2470.9 120.01153 40O 16 氯酯磺草胺 Cloransulam-methyl + 430.1 40398.1 150.01186 1517 氯嘧磺隆 Chlorimuron ethyl + 415.1 4083 400.01140.9 2018 氯磺隆 Chlorsulfuron + 358.2 30167 200.01160 2519 环丙酰胺酸 Cyclanilide 272.1 30228

13、.1 100.0110000rpm，10min 离心，取上清液过 0.22m 尼龙滤膜过滤至样品瓶中待测23序号 項目名（中国語） 項目名（英語） ESI 母离 子cone（V）子离子collision（ V)方法检出限（mg/kg ）161 3020 双氯磺草胺 Diclosulam+ 406.1 50 378 15 0.01261.1 1521 环丙嘧磺隆 Cyclosulfamuron+ 422.2 40 218.1 30 0.01160.8 1422 2, 4-滴丙酸 Dchlorprop racemate 232.8 22 124.8 28 0.01183 15O 23 醚磺隆 Ci

14、nosulfuron+ 414.2 40 83 35 0.01239 1424 赤霉酸 Gibberellic acid 345 44 143 30 0.01307 2025 甲磺草胺 Sulfentrazone+ 387 46 145.8 46 0.01210.9 1426 磺酰磺隆 Sulfosulfuron+ 471.1 26 260.8 18 0.01167 1527 噻吩磺隆 Thifensulfuron methyl+ 388 40 56 40 0.01167.1 15O 28 醚苯磺隆 Triasulfuron+ 402.1 40 141.1 20 0.01264.1 2029

15、氟胺磺隆 Triflusulfuron methyl+ 493.2 40 96 40 0.01182.1 24O 30 三氟啶黄隆钠盐 Trifloxysulfuron-Na+ 438.2 40 257 20 0.01154.9 1431 苯磺隆 Tribenuron methyl+ 396.1 26 180.9 22 0.01144.1 1032 萘草胺 Naptalam+ 292.1 30 149.1 20 0.01315.8 18O 33 氟吡甲禾灵 Haloxyfop+ 362 40 91 30 0.01182.1 20O 34 氯吡嘧磺隆 Halosulfuron methyl+ 4

16、35.1 40 83 41 0.01182.1 15O 35 吡嘧黄隆 Pyrazosulfuron-ethyl+ 415.2 40 139.1 40 0.0197.1 2036 环酰菌胺 Fenhexamid+ 302.1 60 55.1 35 0.01181.9 20O 37 啶嘧磺隆 Flazasulfuron+ 408.1 30 138.9 44 0.01226.1 15O 38 氟嘧磺隆 Primisulfuron methyl 467 20 126.1 40 0.01282.1 20O 39 吡氟禾草灵 Fluazifop+ 328.1 50255.1 250.0124序号 項目名

17、（中国語） 項目名（英語） ESI 母离 子cone（V）子离子collision（ V)方法检出限（mg/kg ）129 25O 40 唑嘧磺草胺 Flumetsulam+ 326.1 50 109 50 0.01208.8 1641 氟草烟 Fluroxypyr+ 254.9 28 180.8 22 0.01141.1 20O 42 氟磺隆 Prosulfuron+ 420.2 40 167.1 20 0.01115.9 3243 丙苯磺隆钠 Propoxycarbazone Na+ 399.1 28 198.9 16 0.0180.8 26O 44 溴苯腈 Bromoxynil 275.

18、7 44 275.7 5 0.01129 2545 嘧螨酯 Florasuram+ 360.1 50 108.9 60 0.01195.1 30O 46 五氟磺草胺 Penoxsulam+ 484.2 60 164.1 40 0.01148.9 2247 苄嘧磺隆 Bensulfuron methyl+ 411.1 32 181.9 20 0.01194.9 42O 48 氟磺胺草醚 Fomesafen 436.9 48 221.9 32 0.01182.1 2549 甲酰胺磺隆 Foramsulfuron+ 413.2 30 83 40 0.01140.9 1650 高 2 甲 4 氯丙酸

19、Mecoprop 212.9 26 70.9 10 0.01182.1 2051 甲基二磺隆 Mesosulfuron-methyl+ 504.2 50 83 40 0.01174.8 28O 52 磺草唑胺 Metosulam+ 418 44 140 40 0.01167 1553 甲磺隆 Metsulfuron methyl+ 382 40 56 40 0.01以下五种暂不在检测项目内101.8 1654 噻苯隆 Thidazuron + 221 30128 15 0.20195.8 1255 绿草定 Triclopyr 253.8 16 217.8 6 0.20264.1 2056 Trisulfuron methyl + 493.2 4096 40 0.20129 1557 氯吡脲 Forchlorfenuron + 248.1 4093 35 0.2079.8 3058 哒菌清 Diclomezine + 254.9 52140.8 30 0.20O CNAS 认可的项目