HPLC 色谱柱安装与使用说明.doc

1、1液相色谱柱安装与使用说明液 相 色 谱 仪 由 高 压 液 体 泵 、 检 测 器 及 液 相 色 谱 柱 等 三 部 分 组 成 ， 其 中 液 相 色 谱柱 的 正 确 安 装 和 使 用 ， 是 液 相 色 谱 工 作 的 关 键 ； 也 是 液 相 色 谱 工 作 者 获 得 正 确 可靠 的 实 验 数 据 的 必 经 之 路 。一 、 液 相 色 谱 柱 的 安 装 ：1、 液 相 色 谱 柱 的 结 构 ：a、 空 柱 由 柱 接 头 、 柱 管 及 滤 片 组 装 而 成 。柱 接 头 采 用 低 死 体 积 结 构 ， 柱 接 头 是 两 端 螺 纹 组 件 ， 一 端 是

2、 为 7/16 英 寸外 螺 纹 ， 另 一 端 是 3 16 英 寸 的 内 螺 纹 (国 内 外 已 规 范 化 )。 7 16 英 寸 外 螺 纹与 1 4 英 寸 柱 管 (6.35mm)连 接 ， 中 间 放 置 压 坏 用 于 密 封 。 3 16 英 寸 的 内螺 纹 与 1 16 英 寸 (1.57mm)的 连 接 管 连 接 ， 中 间 也 放 置 压 环 用 于 柱 接 头 的 密 封 。为 了 尽 量 减 少 柱 外 死 体 积 ， 在 安 装 色 谱 柱 时 ， 用 1.57mm 连 接 管 通 过 空 心 螺钉 压 环 后 要 尽 量 插 到 底 ， 然 后 再 拧

3、紧 空 心 螺 钉 。 压 环 被 空 心 螺 钉 挤 压 变 形 后 紧 箍在 连 接 管 上 (连 接 管 通 过 压 环 后 露 出 的 管 长 度 应 严 格 控 制 在 2 5mm 长 或 其 他固 定 尺 寸 )。在 两 端 柱 接 头 内 ， 柱 管 两 端 各 放 置 一 片 不 锈 钢 滤 片 (或 滤 网 )， 用 于 封 堵 柱填 料 不 被 流 动 相 冲 出 柱 外 而 流 失 。 空 柱 各 组 件 均 为 316#不 锈 钢 材 质 ， 能 耐 受一 般 的 溶 剂 作 用 。 但 由 于 含 氯 化 物 的 溶 剂 对 其 有 一 定 的 腐 蚀 性 ， 故 使

4、 用 时 要 注 意 ，柱 及 连 接 管 内 不 能 长 时 间 存 留 此 类 溶 剂 ， 以 避 免 腐 蚀 。b、 柱 填 料 ： 液 相 色 谱 柱 的 分 离 作 用 是 在 填 料 与 流 动 相 之 间 进 行 的 ， 柱 子 的 分 类 是 依 据 填料 类 型 而 定 。正 相 柱 ： 多 以 硅 胶 为 柱 填 料 。 根 据 外 型 可 分 为 无 定 型 和 球 型 两 种 ， 其 颗 粒 直径 在 310 m 的 范 围 内 。 另 一 类 正 相 填 料 是 硅 胶 表 面 键 合 CN， -NH2 等 官能 团 即 所 谓 的 键 合 相 硅 胶 。反 相 柱

5、： 主 要 是 以 硅 胶 为 基 质 ， 在 其 表 面 键 合 十 八 烷 基 官 能 团 (ODS)的 非极 性 填 料 。 也 有 无 定 型 和 球 型 之 分 。常 用 的 其 他 的 反 相 填 料 还 有 键 合 C8、 C4、 C2、 苯 基 等 ， 其 颗 粒 粒 径 在310 m 之 间 。2， 色 谱 柱 的 安 装 ：a、 拆 开 柱 包 装 盒 ， 确 认 色 谱 柱 的 类 型 、 尺 寸 、 出 厂 日 期 以 及 柱 内 贮 存 的 溶 剂 。b、 拧 下 柱 两 端 接 头 的 密 封 堵 头 放 回 包 装 盒 供 备 用 。c、 按 柱 管 上 标 示

6、的 流 动 相 流 向 ， 将 色 谱 柱 的 入 口 端 通 过 连 接 管 与 进 样 阀 出口 相 连 接 (如 条 件 允 许 ， 建 议 在 柱 前 使 用 保 护 柱 )； 柱 的 出 口 与 检 测 器 连 接 。 连接 管 是 外 径 为 1.57mm、 内 径 为 0.1-0.3mm 的 不 锈 钢 管 。 连 接 管 的 两 端 均 有 空 心螺 钉 及 密 封 用 压 环 。 在 接 管 时 一 定 要 设 法 降 低 柱 外 死 体 积 。 连 接 管 通 过 空 心 螺 钉 、压 环 后 尽 量 用 力 插 到 底 ， 然 后 顺 时 针 拧 紧 空 心 螺 钉 ，

7、直 到 拧 不 动 为 止 ， 再 用 扳 手继 续 顺 时 针 拧 1 4-1 2 圈 ， 切 记 不 要 用 力 过 大 。 如 色 谱 柱 通 过 流 动 相 加 压 后 有漏 液 现 象 ， 请 用 扳 手 继 续 顺 时 针 拧 1 4 圈 ， 直 至 不 漏 液 为 止 。二 、 液 相 色 谱 柱 的 使 用 ：色 谱 柱 在 使 用 前 ， 最 好 进 行 柱 的 性 能 测 试 ， 并 将 结 果 保 存 起 来 ， 作 为 今 后 评价 柱 性 能 变 化 的 参 考 。 但 要 注 意 ： 柱 性 能 可 能 由 于 所 使 用 的 样 品 、 流 动 相 、 柱 温2等

8、 条 件 的 差 异 而 有 所 不 同 ； 另 外 ， 在 做 柱 性 能 测 试 时 是 按 照 色 谱 柱 出 厂 报 告 中的 条 件 进 行 (出 厂 测 试 所 使 用 的 条 件 是 最 佳 条 件 )， 只 有 这 样 ， 测 得 的 结 果 才 有可 比 性 。1、 样 品 的 前 处 理 ：a、 最 好 使 用 流 动 相 溶 解 样 品 。b、 使 用 予 处 理 柱 除 去 样 品 中 的 强 极 性 或 与 柱 填 料 产 生 不 可 逆 吸 附 的 杂 质 。、 使 用 0.45m 的 过 滤 膜 过 滤 除 去 微 粒 杂 质 。2、 流 动 相 的 配 制 ：液

9、 相 色 谱 是 样 品 组 分 在 柱 填 料 与 流 动 相 之 间 质 量 交 换 而 达 到 分 离 的 目 的 ， 因此 要 求 流 动 相 具 备 以 下 的 特 点 ：a、 流 动 相 对 样 品 具 有 一 定 的 溶 解 能 力 ， 保 证 样 品 组 分 不 会 沉 淀 在 柱 中 (或长 时 间 保 留 在 柱 中 )。b、 流 动 相 具 有 一 定 惰 性 ， 与 样 品 不 产 生 化 学 反 应 (特 殊 情 况 除 外 )。c、 流 动 相 的 黏 度 要 尽 量 小 ， 以 便 在 使 用 较 长 的 分 析 柱 时 能 得 到 好 的 分 离 效 果 ；同

10、时 降 低 柱 压 降 ， 延 长 液 体 泵 的 使 用 寿 命 (可 运 用 提 高 温 度 的 方 法 降 低 流 动 相 的黏 度 )。d、 流 动 相 的 物 化 性 质 要 与 使 用 的 检 测 器 相 适 应 。 如 使 用 UV 检 测 器 ， 最 好使 用 对 紫 外 吸 收 较 低 的 溶 剂 配 制 。e、 流 动 相 沸 点 不 要 太 低 ， 否 则 容 易 产 生 气 泡 ， 导 致 实 验 无 法 进 行 。f、 在 流 动 相 配 制 好 后 ， 一 定 要 进 行 脱 气 。 除 去 溶 解 在 流 动 相 中 的 微 量 气 体 既有 利 于 检 测 ，

11、还 可 以 防 止 流 动 相 中 的 微 量 氧 与 样 品 发 生 作 用 。3、 流 动 相 流 速 的 选 择 ：因 柱 效 是 柱 中 流 动 相 线 性 流 速 的 函 数 ， 使 用 不 同 的 流 速 可 得 到 不 同 的 柱 效 。对 于 一 根 特 定 的 色 谱 柱 ， 要 追 求 最 佳 柱 效 ， 最 好 使 用 最 佳 流 速 。 对 内 径 为4.6mm 的 色 谱 柱 ， 流 速 一 般 选 择 1ml min， 对 于 内 径 为 4.0mm 柱 ， 流 速0.8ml min 为 佳 。当 选 用 最 佳 流 速 时 ， 分 析 时 间 可 能 延 长 。 可 采 用 改 变 流 动 相 的 洗 涤 强 度 的 方法 以 缩 短 分 析 时 间 (如 使 用 反 相 柱 时 ， 可 适 当 增 加 甲 醇 或 乙 腈 的 含 量 )。