固相萃取-反相高效液相色谱法检测水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物.doc

1、北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0532-8372 5230成都：028-8661 2625 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790 其他地区：400-633-6606固相萃取-反相高效液相色谱法检测水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物孔雀石绿（MG）和结晶紫（CV）具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等特点，当其进入生物体内，就会产生具有更强危害的

2、隐性孔雀石绿（LMG ）和隐性结晶紫（LCV ）。鉴于孔雀石绿和结晶紫的危害性，包括我国在内的许多国家都将它们列为水产养殖中的禁用药物。GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定和SN/T 1479-2004 进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法中均采用有机溶剂提取后经固相萃取柱净化，然后采用高效液相色谱法或液相色谱-串联质谱法测定。迪马科技在参考上述两个标准的基础上开发出中性氧化铝和阳离子交换固相萃取柱串联净化后，反相高效液相色谱柱检测。该方法准确可靠，重复性好，回收率高，可作为水产品中孔雀石绿和结晶紫及代谢物的检测方法。水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测(参

3、考 SN/T 1479-2004 进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法和 GB/T 19857-2005 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定)1 适用范围本方法适用于水产品中孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测。2 样品准备/提取1、称取已粉碎（已均质）的样品 1 g 于 15 mL 离心管中，加入 1 mL 0.05 mol/L 苯磺酸溶液、1 mL0.25 g/mL 盐酸羟铵溶液、 0.4 mL0.1 mol/L 乙酸铵溶北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0

4、532-8372 5230成都：028-8661 2625 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790 其他地区：400-633-6606液(pH4.5)和 8 mL 乙腈，涡旋混合 2 min，4000 rpm 离心 1 min；2、将上清液转移至 50 mL 离心管中，残渣按照步骤 1 重复提取一次；3、合并两次提取液，并加入 6 mL 三氯甲烷和 7 mL 水，涡旋混合 1 min，4000 rpm 离心 1 min；4、取下层清液于旋蒸瓶中，向上层清液加入 6 mL 三氯甲烷，重复

5、提取一次；5、合并两次下层三氯甲烷溶液，40减压蒸至近干，加入 5 mL 乙腈待净化。3 SPE 柱净化 ProElut Al-N（1 g/6 mL） （Cat.#：65306）上层ProElut SCX（500 mg/3 mL） （Cat.#：63604）下层(1)活 化： 加入 10 mL 乙腈，流出液弃去； (2)上 样： 将待净化液加入小柱，流出液弃去；(3)淋 洗： 加入 5 mL 乙腈淋洗小柱， 流出液弃去，并去掉上层 Al-N 小柱；(4)洗 脱： 加入 5 mL5%氨水乙腈，收集洗脱液；(5)重新溶解： 将洗脱液在 40 下减压蒸干，1 mL 定容液*溶解残渣，过微孔滤膜供 H

6、PLC 分析。*定容液：乙酸铵缓冲液：盐酸羟铵溶液=2 ：1乙酸铵缓冲液：乙腈：0.05 mol/L 乙酸铵溶液(pH4.5)=75:25；盐酸羟铵溶液：取 1 mL0.25 g/mL 盐酸羟铵溶液用水定容至 100mL。4 分析条件色谱柱： Platisil ODS，250 x 4.6 mm，5 m（Cat.# 99503）流 速： 1.0 mL/min 检测器： UV 591 nm 和 UV 266 nm柱 温： 30 进样量： 20 L 流动相： A：乙腈 B：0.05 mol/L 乙酸铵溶液(pH4.5)北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8

7、559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0532-8372 5230成都：028-8661 2625 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790 其他地区：400-633-6606梯度：时间 / min 0 5.5 11.0 11.01 20B 28 8 8 28 285 添加回收结果分析物 添加水平(mg/kg) 回收率(%) RSD(n=4)%孔雀石绿 1.00 82.81 7.85 结晶紫 1.00 98.60 1.39 隐色孔雀石绿

8、1.00 95.46 2.73 隐色结晶紫 1.00 90.03 1.31 5.1 孔雀石绿和结晶紫检测图谱(UV 591nm)0246810214Time (in).0.46Volts125.2 鳕鱼中孔雀石绿和结晶紫( 添加水平 1.0 mg/kg)检测图谱(UV 591nm)1.孔雀石绿2.结晶紫北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0532-8372 5230成都：028-8661 2625 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6

9、220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790 其他地区：400-633-66060246810214Time (in).0.46Volts125.3 鳕鱼中孔雀石绿和结晶紫( 空白)检测图谱(UV 591nm)0246810214Time (in).0.46Volts5.4 隐色孔雀石绿和隐色结晶紫检测图谱(UV 266nm)0246810214Time (in).0.46Volts5.5 鳕鱼中隐色孔雀石绿和隐色结晶紫( 添加水平 1.0 mg/kg)检测图谱1.孔雀石绿2.结晶紫1.隐色孔雀石绿2.隐色结晶紫北京：400-608-7719 上海：02

10、1-6126 3966 广州：020-8559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0532-8372 5230成都：028-8661 2625 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790 其他地区：400-633-6606(UV 266nm)0246810214Time (in).0.46Volts5.6 鳕鱼中隐色孔雀石绿和隐色结晶紫( 空白)检测图谱(UV 266nm)0246810214Time (in).0.46Volts6 Diamo

11、nsil C18(2) 测定孔雀石绿和结晶紫及其代谢物结果6.1 样品制备制备方法：1.0 mg/L 孔雀石绿标准溶液(流动相配制)6.2 分析条件色谱柱： Diamonsil C18（2 ） ，250 mm 4.6 mm，5 m（Cat#：99603 ）流 速： 1.0 mL/min 检测器： UV 591 nm 和 UV 266 nm1.隐色孔雀石绿2.隐色结晶紫北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0532-8372 5230成都：028-8661 2625

12、 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790 其他地区：400-633-6606柱 温： 30 进样量： 20 L 流动相： A：乙腈 B：0.05 mol/L 乙酸铵溶液(pH4.5)梯度：时间 / min 0 5.5 11.0 11.01 20B 28 8 8 28 286.3 孔雀石绿和结晶紫检测图谱(UV 591nm)01020Time (in).0.2Volts126.4 隐色孔雀石绿和隐色结晶紫检测图谱(UV 266nm)01020Time (in).0.2Volts 12水产

13、品种孔雀石绿和结晶紫及其代谢物的检测（大部分有现货）参考SN/T 1479-2004 进出口水产品中孔雀石绿残留量检验方法和 GB/T 19857-2005 水产品中孔1.孔雀石绿2.结晶紫1.隐色孔雀石绿2.隐色结晶紫北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0532-8372 5230成都：028-8661 2625 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790

14、 其他地区：400-633-6606雀石绿和结晶紫残留量的测定货号 名称 规格样品前处理65306 中性氧化铝固相萃取柱 ProElut Al-N 1 g/6 mL, 30/pk63604 强阳离子交换固相萃取柱 ProElut SCX 500 mg/3 mL, 50/pk244358 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 12位4803 1,3,6 mL 柱管通用连接器 15/pk4806 考克(控制流量) 15/pk99011 真空/正压两用泵，无油 1/pk99013 抽滤瓶套装(包括硅橡胶管 2 米,2L 抽滤瓶及橡胶塞) 1/pk37177 ProMax 针头式过滤器 Nylon 13

15、 mm,0.22 m 100/pk37180 ProMax 针头式过滤器 Nylon 13 mm,0.45 m 100/pk色谱柱及保护柱99503 反相高效液相色谱柱 Platisil ODS 250 4.6 mm ID, 5 m99603 反相高效液相色谱柱 Diamonsil C18(2) 250 4.6 mm ID, 5 m6201 EasyGuard C18 保护柱 10 4.0 mm2 个柱芯+1 个柱套99611 反相高效液相色谱柱(LC/MS用)Diamonsil C18(2) 50 2.1 mm ID, 3 m标准品55-46396-250MG 孔雀石绿草酸盐2437-29-

16、8 250 mg56-46364-250MG 结晶紫548-62-9 250 mg50P-C14629500 隐色孔雀石绿129-73-7 100 mg50P-C14629400 隐色结晶紫1173023-92-1 100 mgHPLC溶剂缓冲盐离子对试剂50101 乙腈 HPLC 级 4 L50102 甲醇 HPLC 级 4 L50117 二氯甲烷 HPLC 级 4 L50132 冰乙酸 HPLC 级 50 mL50144 甲酸 HPLC 级 50 mL北京：400-608-7719 上海：021-6126 3966 广州：020-8559 3520沈阳：024-2294 3513 天津：400-633-6606 青岛：0532-8372 5230成都：028-8661 2625 南京：025-8347 9007 石家庄：0311-6668 6220订购电话：重庆：023-6541 4656 郑州：0371-6367 2790 其他地区：400-633-660650138 醋酸铵 HPLC 级 100 g通用色谱产品52401B 瓶架/蓝色 50 孔52401A 瓶架/白色 50 孔5323 样品瓶（棕色/螺纹） 2 mL, 100/pk5325 样品瓶盖/含垫（已经组装） 100/pkH80465 HPLC 进样针 25 L