吴茱萸次碱衍生物的合成及抑菌活性.DOC

1、 1 吴茱萸次碱衍生物的合成及抑菌活性 郭现翠 1，王奇志 2，徐曙 2，单宇 2，印敏 2， 冯煦 2， 罗金岳 1*， 刘飞 2* （ 1. 南京林业大学化学工程学院，江苏 南京 210037； 2. 江苏省 中国科学院植物研究所（南京中山植物园），江苏南京 210014） 摘要： 以吴茱萸次碱 为原料，通过硫代反应等 以 54.5%-87.6%的收率 合成了硫代吴茱萸次碱及其 5 种 N-取代衍生物 （、 ae） ，采用 HRMS、 FTIR、 1HNMR 和 13CNMR 对产物进行了结构 表征 ；分析了 10 g/mL的样品 对 9 种植物病原菌的抑菌活性 。结果表明： 合成的六种化

2、合物 （ 、 ae） 对植物病原真菌几乎没有抑制作用， 化合物 a、 b 及 d 对细菌（水稻白叶枯病菌， Xanthomonas oryzae pv.oryzae (Ishiyama)）具有较明显的抑菌活性，其中 N-苄基硫代吴茱萸次碱（ b） 和 N-(4-甲基 苄基 )-硫代吴茱萸次碱 （ d） 的抑制率分别为 81.84%和 59.95%。通过细胞毒活性实验发现 合成的 化合物 （ 、 ae） 对人体正常细胞（ 人肺成纤维细胞 ， HFL1）几乎没有毒性（ IC50 80 mol/L）。 关键词： 吴茱萸次碱；硫代吴茱萸次碱； 抑菌活性；农药 中图分类号： TQ455. 47， O62

3、9.3文献标识码： A Synthesis and Antifungal Activity of Rutaecarpine Derivatives GUOXian-cui1, WANG Qi-zhi2, XU Shu2, SHAN Yu2, YIN Min2, FENG Xu2, LUO Jin-yue1*, LIU Fei2* (1. College of Chemical Engineering, Nanjing Forestry University, Nanjing 210037, China; 2.Institute of Botany, Jiangsu Province and C

4、hinese Academy of Sciences, Nanjing Botanical Garden Mem.SunYat-Sen, Nanjing 210014, China) Abstract: In order to study and develop the indole quinazoline alkaloid of the traditional Chinese medicine evodia, the thiorutaecarpine and five N-substituted derivatives were synthesized from rutaecarpine b

5、y thionation. The structures of the products were confirmed by HPLC-HRMS, IR, 1HNMR and 13CNMR. The antifungal activity on nine plant pathogens of the compounds ( and ae, 10g/mL) was analyzed, and it was found that there was almost no inhibitory effect on the 2 plant pathogenic fungi, and N-substitu

6、ted thiorutaecarpine ( a, b and d) had obvious antifungal activity against bacteria Xanthomonas oryzae pv.oryzae (Ishiyama). The inhibitory rates of N-benzyl sulfo-rutaecarpine ( b) and N-(4-methyl benzyl) sulfo-rutaecarpine ( d) were 81.84% and 59.95%, respectively. The rutaecarpine derivatives wer

7、e found to be almost non-toxic (IC50 80 mol/L) to human normal cells (HFL1) by cytotoxicity assay. Key words: rutaecarpine; sulfo-rutaecarpine; antifungal activity; pesticides Foundation items: National Natural Science Foundation of China (No: 31570359 and 31470425); Development Projects from the Sc

8、ience and Technology Foundation of Jiangsu Province (Grant number: BE2016753); Jiangsu Key Laboratory for the Research and Uti1ization of Plant Resources (SQ201402) 在现代 农业生产中 ，农药 占据着不可替代的位置 。农药 不仅用于防治病虫害、杂草 以及各种病原菌等 引起的农业生物灾害，而且在促进农业增产方面发挥着重要的作用。 但是 过量、不合理使用化学农药 ， 不仅易 使 有害生物产生抗性，而且 易 造成农产品质量安全危害，同时大

9、量有毒有害物质残留于土壤、水体和空气中，造成严重的环境污染问题 1-2。植物源农药是从植物中提取有杀虫或抗菌等作用的活性物质，直接或间接加工 获得的 农药 3。从植物中寻找结构新颖、作用机理独特的农用活性先导化合物，对其化学结构进行优化，从中发现更高活性的化合物，是创制新 农药的一条重要途径 4。植物源农药具有在环境中生物降解快，多靶点且靶标特殊，对人畜及对非靶标生物毒性低，活性成分作用机制独特，不易产生抗药性等特点 5-7, 符合现代农业环保、健康、持续发展的时代要求，越来越受到重视 8-9。 天然产物是药物的一个重要组成部分，发现有生物活性的先导化合物，是创新药物研究的重要前提。 吴茱萸

10、（ Evodia rutaecarpa） 是芸香科落叶灌木或小乔木植物吴茱萸 Evodia rutaecarpa. (Juss.) Benth、石虎 Evodia rutaecarpa. (Jess.) Benth. var. officinalis (Dode) Huang 或梳毛吴茱萸 Evodia rutaecarpa. (Jess.) Benth. var. bodinieri (Dode) Huang 的干燥近成熟果实 ， 是一种传统中药，其生物碱成分具有多种 生物 活 性 10-11。国内左国营 12等研究发现吴茱萸中提取的吲哚喹唑啉生物碱（ 如 吴茱萸次碱 ，化合物 ）是一类有抗

11、真菌活性的植保素，具有显著的抗稻瘟病菌作用，并初步分析了构效关系。国外 Lee13等发现 吴茱萸次碱是一种可以从多种医药植物中提取到的生物碱，具有广泛的生理活性，如抗癌、抗痢疾、杀虫、杀菌、消炎以及体温调节等作用 14-18。本课题组的王奇志 10, 19等从吴茱萸中分离得到 了十余种吲哚喹唑啉生物碱 ， 研究了其抗肿瘤、抗菌等活性； 本 课题 组前期针对吴茱萸碱、吴茱3 萸次碱等 吲哚喹唑啉 生物碱 的结构修饰发现，吲哚 N 原子位置的修饰可以提高其 抗肿瘤、抑菌活性。 近年来 ， 有机硫类化 合 物因其具有特殊的化学结构 ， 且 具有 相对于有机磷类的低毒性 ， 而受到关注 20-21。

12、本文以吴茱萸次碱为原料， 通过硫代反应合成 硫代吴茱萸次碱及其5 种 N-取代衍生物， 研究其对植物病原菌的 抑菌活性， 为吴茱萸吲哚喹唑啉生物碱在农业中的应用提供借鉴 。 1实验部分 1.1 实验试剂与仪器 溴代异丁烷、对甲基苄溴、溴化苄、石油醚（ PE）、乙酸乙酯（ EtOAc）、 N,N-二甲基甲酰胺（ DMF）、 二氯甲烷（ CH2Cl2），国药集团化学试剂有限公司；吴茱萸次碱，南京春秋生物工程有限公司；劳森试剂 （ Lawessons reagent， 2,4-双 (4-甲氧苯基 )-1,3-二硫代 -2,4-二磷-2,4-硫醚 ） ，北京百灵威科技有限公司； 1,5-二溴戊烷、碘代

13、正丁烷，上海晶纯生化科技股份有限公司； NaH，天津市化学试剂研究所； NaCl，南京化学试剂有限公司； Na2SO4，西陇化工股份有限公司； CaCl2，上海久亿化学试剂有限公司；二甲亚砜（ DMSO），成都市科龙化工试剂厂； MTT3-(4,5-二甲基 -2-噻唑基 )-2,5-二苯基溴化四唑 ， Biosharp 公司。以上试剂均为 AR。 85-型 恒温加热磁力搅拌器 ， 上海司乐仪器有限公司 ； DZF-6020 真空干燥箱 ， 上海一恒科学仪器有限公司 ； ZNHW- 恒温控制仪 ， 郑州长城科工贸易有限公司 ； METTLER AE240分析天平 ， 梅特勒 -托利多仪器公司 ；

14、 RE-3000 旋转蒸发器 ， 上海亚荣生化仪器厂 ；Aglient1260-6500 Q-TOF 液质联用仪 ， 美国 Aglient 公司 ； Nicolet 380 FTIR 红外光谱仪 ， 美国赛默飞世尔科技公司 ； Bruker 300 MHz 及 Bruker 500 MHz 核磁共振仪 ， 瑞 士 Bruker 公司 ； Thermo-6500 CO2培养箱 ， 美国 Thermo 公司； ThermoNapflow 超净工作台 ，美国 Thermo 公司； Infinite M200 酶标仪 ， 瑞士 TECAN 公司 ； MS3 digital 定时微量振荡器 ， 德国 I

15、KA公司 。 1.2 实验方法 1.2.1 硫代吴茱萸次碱及其衍生物的合成 4 1.2.1.1 硫代吴茱萸次碱 （化合物 ） 的合成 在配有温度计和冷凝管的三口烧瓶中， 分别 加入吴茱萸次碱（ 0.50 g， 3.50 mmol） ， 劳森试剂 （以 100 mL 甲苯 溶解） ，于 110 下搅拌反应 6 h，薄层色谱（ 展开剂 V（ PE） :V（ EtOAc） = 5:1）监测反应。反应结束后旋转蒸发除去溶剂，硅胶柱层析（ 洗脱条件 V（ PE） :V（ EtOAc）= 2:1） 分离纯化得到产物 ， 结构如下 所示： 计算收率。产物收率 按下 式 计算 ： 产物收率 /% = 10m

16、100m 式中， m1为产物的理论产量 ， g； m0为分离纯化后产物 得到的产物 质量 ， g。 1.2.1.2 N-取代硫代吴茱萸次碱 （化合物 ae） 的合成 化合物 a 和 b 的合成 ：按照 1.2.1.1 合成硫代吴茱萸次碱，在配有温度计和冷凝管的三口烧瓶中，加入硫代吴茱萸次碱（ 0.20 g， 0.66 mmol） 、 NaH及 DMF（ 10 mL， 4 分子筛除水），室温下搅拌 20 min，缓慢加入卤代烃（ 0.99 mmol）。 50 下搅拌反应， 薄层色谱 监测反应。反应结束后进行后处理：加水（ 10 mL）淬灭 NaH，以乙酸乙酯萃取（ 20 mL）三次，合并有机相，

17、饱和食盐水洗涤两次，无水 Na2SO4干燥 2 h，抽滤，旋转蒸发除去溶剂，硅胶柱层析分离纯化得到产物。 其反应方程式 见 Scheme A所示。 化合物 c、 d 和 e 的合成 ：在配有温度计和冷凝管的三口烧瓶中，加入吴茱萸次碱（ 0.50 g， 3.50 mmol） 、 NaH 及 DMF（ 20 mL， 4 分子筛除水），室温下搅拌 20 min，缓慢加入卤代烷烃， 80 下搅拌反应， 薄层色谱 监测反应。反应结束后按 上述化合物 a 和 b的合成 进行后处理。在甲苯（ 10 mL）中，加入卤代烃取代的吴茱萸次碱（ 0.50 mmol）， 加入劳森试剂， 于 110 反应 6 h 后，

18、 薄层色谱 监测反应，硅胶柱层析分离得到纯净产物。 其反应方程式 见 Scheme B及 Scheme C 所示。 5 a-Lawessons reagent, methylbenzene, 110 ; b- a: DMF, NaH, 1-butyl iodide ; b: DMF, NaH, benzyl bromide; c- a: DMF, NaH, 1-bromo-2-methylpropane; b: DMF, NaH, p-Methylbenzyl bromide a-DMF, NaH, Br(CH2)5Br; b-Lawessons reagent, methylbenzene,

19、 110 1.2.2 抑菌活性实验 采用菌丝生长速率法（真菌）以及浊度法（细菌）对 9 种植物病原菌进行室内毒力初步测定。将各菌株在 PDA（真菌）平板上或 NB（细菌）培养液中活化培养，对于真菌，使用5mm 口径的打孔器在菌落边缘打取菌碟，将供试杀菌剂用 DMSO 溶解 制成母液 （ 质量 浓度为 10000 g/mL） ，然后加入培养基中制成的 硫代吴茱萸次碱及其衍生物 终 质量 浓度为 10 g/mL 的 PDA含药平板，将各病原菌菌碟接种至平板上，以 等体积 DMSO 为对照，每个 样品进行 3 次 重复 实验 ；对于细菌，将菌液稀释到一定浊度后加入 硫代吴茱萸次碱及其衍生物终 质量

20、浓度为 10 g/mL 的 NB液体培养基中，以无菌水为对照，每个处理 3 个重复； 25培养箱培养至对照接近 长满板（真菌）或 28 摇床摇培至对照对数生长期（细菌），十字交叉法测定菌落直径（真菌）或浊度仪测定浊度（细菌），并计算抑制率。 以无菌水作为空白6 实验 （溶剂抑制率） 。 其中抑制率 按下式计算 ： 菌落直径 /cm =菌落直径平均值 0.5（菌碟直径） 菌丝生长抑制率（ %） =（对照菌落生长直径处理菌落生长直径） /对照菌落生长直径100。 1.3 产品结构鉴定方法 对 得到的 吴茱萸次碱衍生物以 液质联用、红外光谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱 进行分析及结构鉴定。 液质联用

21、仪 条件 22： 二极管阵列检测器 DAD190400 nm，色谱柱： Zorbax SB-C18柱， 4.6100mm， 1.8m， 含 0.1 %甲酸 的 H2O 为流动相 A， CH3OH 为流动相 B，洗脱条件： 015 min，流动相 B70%100 %， 1530 min，流动相 B100 %，流速： 0.3mL/min，柱温 35 ；色谱柱流出组分进入电喷雾质谱仪的流速为 10L/min，正离子质谱 (ESI+/MS)条件：毛细管电压： 4.0kV，干燥气温度： 350 ，雾化器压力： 3.4 105 Pa，化合物纯度测定：紫外检测波长取 254 nm，面积归一法定量 ； IR：

22、 溴化钾压片 ； 1HNMR（ 300 MHz 或500 MHz）及 13CNMR 谱（ 75 MHz 或 125 MHz， CDCl3为溶剂，四甲基硅烷 （ TMS） 做内标。 1.4 细胞毒活性测试 对合成的吴茱萸次碱衍生物采用 MTT 法对人体正常细胞（ HFL1）进行细胞毒性测试的体外实验。将人体正常细胞（ HFL1）接种于 96 孔培养板上，密度为每孔 100 L 含有细胞5000 个，培养过夜，次日用 质量 浓度为 100 g/mL 的待测样品进行处理，在温度为 37 、V（ CO2） = 5 %的培养箱中孵育。 72 h 后， 向各孔中加入 10 L MTT（ 5 mg/mL，

23、PBS），继续在培养箱中孵育， 4 h 后，每孔加入 100 L DMSO，振摇 5 min，用酶标仪在波长 570 nm 的条件下测定每孔的 吸光度 并 按下式 计算细胞生长抑制率 ： 抑制率 /%=（ A对照组 -A用药组） /（ A对照组 -A调零孔） 100。 式中， A为 吸光度 。 阳性对照为紫杉醇，浓度为 0.1 mmol/L。设置 5 个浓度梯度： 20、 10、 5、 2.5、 1.25 g/mL，同上法检测吸光度。 采用改良寇氏法计算 IC50值，计算公式为： IC50 = lg-1Xm-i(P-0.5)。 式中， Xm为 设计的最大的浓度的对数值； i 为 相邻两组浓度对

24、数值； P 为 各组生长抑制率之和 ， %； 0.5 为 经验常数。 2 结果与讨论 7 2.1 吴茱萸次碱衍生物的合成 以 吴茱萸次碱 为原料合成 硫代吴茱萸次碱衍生物 过程中， 涉及 以 劳森试剂 为底物 的硫代反应 及吴茱萸次碱衍生物的 N-取代反应 。 首先对这两个反应进行了初步的工艺优化。 以硫代吴茱萸次碱 （化合物 ） 的合成为例，考察了 劳森试剂 物质的量 对硫代吴茱萸次碱及其衍生物收率的影响 ， 结果见表 1。 表 1 劳森试剂 的物质的量 对产物收率的影响 Fig. 1 Effect of mole ratio of Lawessons reagent and rutaeca

25、rpine on the yield n(劳森试剂 )/ n(吴茱萸次碱 ) 0.9 1.1 1.3 1.5 1.7 1.9 2.1 产物 (2)收率 / 32.4 39.7 45.2 54.5 53.5 54.0 54.3 如 表 1 所示 ， 当劳森试剂 的物质的量 不足时（ n(劳森试剂 )/ n(吴茱萸次碱 ) = 0.9），产物 的 分离收率较低，仅为 32.4%； 将劳森试剂的 物质的量 提高，产物的收率随之提高，当 劳森试剂 物质的量 为吴茱萸次碱 的 1.5 倍时，产物收率达到 54.5%， 薄层色谱 分析发现此时仍有一定量的吴茱萸次碱未反应完全； 进一步提高 劳森试剂 的 物

26、质的量 ， 经 薄层色谱 分析 发现，硅胶板经碘显色后，原料点与之前相比颜色变浅，产物点颜色深度几乎不变，且产物点附近又发现一新点，可以推断 ，未反应的吴茱萸次碱的量减少，但产物收率几乎不变，此时反应的副产物增加 。 因此选定适宜的 劳森试剂 物质的量 为吴茱萸次碱 的 1.5 倍。 表 2 为 NaH的物质的量 对产 物收率的影响 。如表 2 所示， 以吴茱萸次碱与 溴代 异丁烷为反应底物 （合成化合物 a） ，考察了 NaH的物质的量 对 合成 N-取代吴茱萸次碱衍生物 反应的影响 ， 当 n(NaH)/ n(吴茱萸次碱 ) = 0.9，产物 a 的 分离收率 仅为 65.1%； 提高 N

27、aH的物质的量 ，产物的收率 明显 提高，当 NaH 的物质的量 为吴茱萸次碱 的 1.3 倍时，产物收率达到最高，为 82.0%；进一步提高 NaH 的物质的量 ， 会造成产物的过度还原 ， 产物会 进一步脱氢 ，而产物收率不再增 加 。通过 液质联用分析发现， 产物准分子离子峰为 344（ M+H+），脱氢产物 准分子离子峰为 342，增加 NaH 的物质的量时， 在总离子流图中可见 脱氢产物 峰面积 增加 ， 即副产物 脱氢产物增加， 产物收率不再增加 。因此 选定适宜的 NaH 用量为吴茱萸次碱的物质的量的 1.3 倍。 表 2 NaH 的 物质的量 对产物收率的影响 Fig. 2 E

28、ffect of mole ratio of NaH and rutaecarpine on the yield n(NaH)/ n(吴茱萸次碱 ) 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 8 产物 (3a)收率 / 65.1 70.3 73.2 75.6 82.0 80.9 81.1 尝试两种方法 合成 了 硫代吴茱萸次碱衍生物 ：方法一 （ Scheme A， 合成化合物 a 和b） 中首先 以劳森试剂进行 硫代反应， 再与卤代烃进行取代反应； 方法二 （图 1， Scheme B及 Scheme C， 合成化合物 c、 d 和 e）则与方法一 相反 ，首先以吴茱萸次碱为原

29、料，获得 N-取代吴茱萸次碱，再与劳森试剂反应获得产物。 实验中发现： 方法一 ， 硫代吴茱萸次碱 （化合物 ）的分离提纯较困难（与吴茱萸次碱难以分离） ，但 硫代吴茱萸次碱与卤代烃反应后较容易进行分离提纯； 方法二 的 问题 同样 在于第二步 反应（ N-取代吴茱萸次碱与劳森试剂反应）后产物分离困难。 两种方法的困难之处都在于硫代产物难以分离，分析原因 推测是由于碳和氧同属于第七主族，化学性质十分相似，碳硫键与碳氧键相比极性改变不大，且薄层色谱 分析发现两者的 Rf值相差小于 0.1。 两种方法相比， 不同 产物 的 收率接近 ，均为可行的合成方法。 2.2 产 品的结构确证 硫代吴茱萸次碱

30、 ( ): 黄色结晶 , 0.29 g, 收率 : 54.5%, 产物 色谱 纯度 : 99.9%; m.p.：216218 , 产物 Rf 值为 0.52（ 薄层色谱 展开剂 V（ PE） :V（ EtOAc） = 5:1） , 硅胶柱层析分离纯化 , 洗脱条件 V（ PE） :V（ EtOAc） = 2:1; FTIR（ KBr）， /cm-1: 3445(C-H, Ar H), 3051 (C-H, CH3), 2920(C-H, CH2), 2898 (C-H, CH), 1617 (C=O, N C=O), 1595(C=C), 1471(C-H, CH2), 1317 (C-H,

31、CH3), 765 (C-H, Ar H)。 1HNMR (CDCl3, 500 MHz)， : 3.273.32 (2H, t, J = 6.90 Hz, NCH2CH2), 5.185.22 (2H, t, J = 6.87 Hz, NCH2CH2), 7.167.19 (1H, m, Ar H), 7.317.34 (1H, t, J = 7.45 Hz, Ar H), 7.407.44 (3H, m, Ar H), 7.687.71 (1H, t, J = 6.95 Hz, Ar H), 9.24 (1H, s, NH); 13CNMR (CDCl3, 75 MHz)， : 19.90

32、, 49.14, 112.14, 120.26, 120.80, 125.42, 125.92, 127.18, 127.52, 128.9, 129.08, 131.98, 134.58, 138.62, 188.82。 HRMS: C18H15N3S M+H+理论值 : 304.0830, 实际值 : 304.0864。 N-正丁基硫代吴茱萸次碱 ( a): 黄色结晶 , 0.20 g, 收率 : 87.6%, 产物 色谱 纯度 : 99.9%; m.p.: 163165 ; 产物 Rf 值为 0.24（ 薄层色谱 展开剂为 V（ PE） :V（ EtOAc） = 1:1） ，硅胶柱层析分

33、离纯化，洗脱条件 V（ PE） :V（ EtOAc） = 2:1; FTIR（ KBr）， /cm-1: 3063 (C-H, Ar H), 1742 (C=O, N C=O), 1659 (C=C), 1500(C-H, CH2), 1404 (C-H, CH3), 743 (C-H, Ar H)。 1HNMR(CDCl3, 300 MHz), : 0.971.02 (3H, t, J = 7.38 Hz, CH2CH3), 1.291.26 (2H, m, CH2CH3), 1.851.95 (2H, m, CH2CH2CH3), 3.213.26(2H, t, J = 6.66 Hz,

34、NCH2CH2), 4.814.86 (2H, t, J = 7.65 Hz, NCH2CH2), 5.185.22 (2H, t, J = 6.72 Hz, NCH2CH2),7.167.25 (1H, t, J = 9 6.93 Hz, Ar H), 7.357.48 (3H, m, Ar H), 7.637.67 (2H, d, J = 8.34 Hz, Ar H) , 7.707.76 (1H, m, Ar H), 8.228.85 (1H, q, Ar H); 13CNMR (CDCl3, 75 MHz), ： 13.97, 19.87, 20.31, 32.54, 45. 09,

35、49.11, 110.59, 119.56, 120.16, 123.86, 124.73, 125.39, 126.60, 127.51, 127.71, 128.43, 131.93, 134.36, 140.30, 142.32, 144.60, 188.91。 HRMS: C22H22N3S M+H+理论值 : 360.1456, 实际值 : 360.1490。 N-苄基 -硫代吴茱萸次碱 ( b): 黄色粘稠固体 , 0.17 g, 收率 : 64.1%, 产物色谱 纯度 : 99.9%; 产物 Rf 值为 0.52（ 薄层色谱 展开剂为 V（ PE） :V（ EtOAc） = 5:

36、1） , 硅胶柱层析 , 洗脱条件 V（ PE） :V（ EtOAc） = 30:1; FTIR（ KBr）， /cm-1: 2963 (C-H, Ar-H), 2920 (C-H, CH3), 2853 (C-H, CH2), 1590 (C=O, N C=O), 1468 (C-H, CH2), 797 (C-H, Ar H)。 1HNMR(CDCl3, 300 MHz), : 3.26-3.30 (2H, t , J = 6.69 Hz, NCH2CH2), 5.195.23 (2H, t, J = 6.81 Hz, NCH2CH2), 6.16 (2, s, PhCH2N), 7.15

37、7.25 (6H, m, Ar H), 7.357.45 (4H, m, Ar H), 7.527.55 (2H, d, Ar H) ,8.798.81 (1H, d, Ar H); 13CNMR (CDCl3,125 MHz), : 25.90, 48.55, 48.99, 110.59, 119.56, 120.16, 120.33, 123.86, 124.73, 125.39, 126.60, 127.51, 127.71, 128.43, 131.93, 134.36, 140.30, 142.32, 144.60,188.89。 HRMS: C25H20N3S M+H+理论值 :

38、394.1300, 实际值 : 394.1333。 N-异丁基硫代吴茱萸次碱 ( c):黄色结晶 , 0.51g,收率 : 82.0%, 产物 色谱 纯度 : 98.5%; m.p. 176178 ; 产物 Rf 值为 0.45（ 薄层色谱 展开剂为 V（ PE） :V（ EtOAc） = 5:1） , 硅胶柱层析 , 洗脱条件 : V（ PE） :V（ EtOAc） = 20:1; FTIR（ KBr）， /cm-1: 3138 (C-H, Ar-H), 2959 (C-H, CH3), 2925 (C-H, CH2), 2867 (C-H, CH), 1735 (C=O, N C=O),

39、1588 (C=C), 1538(C-H, CH2), 1397 (C-H, CH3), 736 (C-H, Ar H)。 1HNMR(CDCl3, 300 MHz), : 0.940.96 (6H, d, J = 6.72 Hz, CH3CH2), 2.332.42 (1H, m, CH2CHCH2), 3.233.28 (2H, t, J = 6.63 Hz, NCH2CH2), 4.684.70 (2H, d, J =6.62 Hz, NCH2CH2), 5.195.23 (2H, t, J = 6.60 Hz, NCH2CH2), 7.157.20 (1H, t, J = 7.71 H

40、z, Ar H), 7.337.38 (1H, t, J = 6.78 Hz, Ar H), 7.437.49 (2H, t, J = 8.19 Hz, Ar H), 7.637.66 (2H, d, J = 10.14 Hz, Ar H), 8.828.85 (1H, m, Ar H); 13CNMR (CDCl3, 75 MHz), : 19.84, 20.24, 30.13, 49.18, 52.23, 111.13, 119.77, 120.06, 120.27, 123.73, 125.32, 126.77, 127.52, 127.68, 128.43, 131.95, 134.3

41、7, 140.86, 142.20, 144.75, 188.92。 HRMS: C22H22N3S M+H+理论值 : 360.1456, 实际值 : 360.1490。 N-(4-甲基 苄基 )-硫代吴茱萸次碱 ( d): 黄色晶体 , 0.56g, 收率 : 79.6%, 产物色谱 纯度 : 99.9%; m.p.: 208210 ; 产物 Rf 值为 0.21（ 薄层色谱 展开剂为 V（ PE） :V（ EtOAc） = 5:1） , 硅胶柱层析纯化 , 洗脱条件 V（ PE） :V（ EtOAc） = 25:1; FTIR（ KBr）， /cm-1: 2963 (C-H, Ar10

42、H), 1589 (C=O, N-C=O), 1560 (C=C), 1458(C-H, CH2), 1458 (C-H, CH3)。 1HNMR (CDCl3, 500 MHz), : 2.25 (3H, s, ArCH3), 3.253.28 (2H, s, J = 6.70 Hz, NCH2CH2), 5.20 (2H, s, NCH2CH2), 6.12 (2H, s, NCH2Ar), 7.027.07 (4H, q, J = 8.15Hz, Ar H), 7.177.20 (1H, t, Ar H), 7.257.35 (1H, m, Ar H), 7.407.55 (2H, m,

43、 Ar H), 7.577.65 (1H, m, Ar H), 7.667.69 (2H, m, Ar H), 8.79 (1H, s, Ar H); 13CNMR (CDCl3, 75 MHz), : 19.94, 21.01, 48.30, 49.03, 111.07, 120.20, 120.26,120.71, 124.13, 125.79, 126.64, 126,74, 127.56, 128.50, 129.23, 131.89, 134.34, 135.63, 136.75, 140.93, 142.17, 144.54, 188.93。 HRMS: C26H22N3S M+H

44、+理论值 : 408.1456, 实际值 : 408.1490。 N,N-(1,5-戊基 )-双硫代吴茱萸次碱 ( e): 白色结晶 , 0.58 g, 收率 : 71.9%; 纯度 : 99.9%; m.p.: 242244 ; FTIR（ KBr）， /cm-1: 3119 (C-H, Ar H), 3051 (C-H, CH3), 2920 (C-H, CH2), 2850 (C-H, CH), 1586 (C=O, N-C=O), 1560 (C=C), 1467(C-H, CH2), 1399 (C-H, CH3), 739 (C-H, Ar H)。 1HNMR(CDCl3, 500

45、 MHz), : 1.26(2H, s, (CH2CH2CH2CH2CH2), 1.561.60 (4H, m, CH2CH2(CH2)2), 3.173.20 (4H, t, J = 6.35Hz, NCH2CH2), 4.814.84 (4H, t, J = 7.05 Hz, CH2(CH2)3CH2), 5.105.12 (4H, t, J = 6.45 Hz, NCH2CH2), 7.157.18 (2H, t, J = 7.30 Hz, ArH), 7.257.34 (4H, m, Ar H), 7.397.42 (2H, t, J = 7.70 Hz, Ar H), 7.457.4

46、7 (2H, d, J = 8.00 Hz, Ar H), 7.527.55 (2H, t, J = 7.75 Hz, ArH), 7.607.62 (2H, d, J = 7.95 Hz, Ar H), 8.788.80 (2H,d, J = 8.20 Hz, Ar H); 13CNMR (CDCl3, 125 MHz), : 19.79, 24.50, 29.66, 30.42, 45.06, 48.98, 110.46, 119.65, 120.20, 120.41, 123.85, 125.45, 126.50, 127.48, 128.40, 131.96, 134.21, 140.

47、25, 142.12, 144.52, 188.81。 HRMS: C41H35N6S2 M+H+ 理论值 : 675.2286, 实际值 : 657.2320。 2.3 抑菌活性测试 采用菌丝生长速率法（真菌）以及浊度法（细菌）对所合成六种化合物以及吴茱萸次碱对七种植物 病原 真菌（水稻纹枯病菌、 油菜菌核病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜灰霉病菌、葡萄炭疽病菌、番茄早疫病菌、稻瘟病菌 ）、两种植物 病原 细菌（ 水稻白叶枯病菌、水稻细菌性条斑病菌 ） 进行抑菌活性探究（见 表 3）。 实验发现，经过衍生化的吴茱萸次碱对真菌有一定的抑制性，但效果不明 显， 如 化合物 （ 硫代吴茱萸次碱 ） 对水稻纹枯病菌的抑制率为 10.65%，化合物 b 对于黄瓜 灰霉 病菌、稻瘟病菌的抑制率分别为 11.44%、 16.14%，相对于吴茱萸次碱 （化合物 ） 抑菌活性均有一定 的 提高。