1、多管发酵法测定大肠杆菌 一、 实验器材及药品 ： 序号 实验用品 （按取 2 个水样） 数量 1) 试管 （带 试管塞 ） 40 支 2) 小倒管 35 个 3) 试管架 2 个 4) 10ml 量筒 1 个 5) 10ml 移液管 2 个 6) 吸耳球 2 个 7) 1ml 移液管 8 个 8) 接种环 1 个 9) 酒精灯 1 个 10) 恒温箱 1 个 11) 蛋白胨培养液 1 瓶 12) EC 培养液 1 瓶 13) 电炉 1 个 14) 500ml 烧杯 4 个 15) 玻璃棒（搅拌用） 2 个 16) 取样瓶 2 个 17) 标签纸 和记号笔 1 个 18) 电子天平，取样勺 1
2、个 19) 高压灭菌锅 1 个 20) 蒸 馏水 1 桶 21) 洗瓶 1 个 22) 冰箱（如果水样和培养基不用长时间放置，可以不用） 1 个 23) 恒温水浴锅 1 个 24) 其它实验辅材 若干 二、 实验步骤 2.1 水样接种量 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。 相对未受污染的水样接种量为 10mL、 1mL、 0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种 1mL、 0.1mL、 0.01mL 或 0.1mL、 0.01mL、 0.001mL 等。使用的水样量可参考下表 1。 表 1 接种用水量参考表 如接
3、种体积为 10ml 则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液 5ml;如接种量为 1ml 或少于 1ml，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液 10mL 中。 2.2 初发酵试验 将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在 37 0.5下培养 24h 2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。 2.3 复发酵试验 轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管，用 3mm 接种环或灭菌棒将培养物转接到 EC 培养液中。在 44.5 0.5温度下培养 24h 2h（水浴箱的水面应高于试管中培养基液面）。接种后所有发酵管必须在 30min 内放进水浴中
4、。培养后立即观察，发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。 三、 结果的计算 根据不同接种量的发酵管所出现阳 性结果的数目，从表 2 或表 3 中查得每升水样中的粪大肠菌群。 接种水样为 100mL2 份、 10mL10 份、总量 300mL 时，查表 2 可得每升水样中的粪大肠菌群； 接种 5 份 10mL 水样、 5 份 1mL 水样、 5 份 0.1mL 水样时，查表 3 求得 MPN 指数，MPN 值再乘 10，即为 1L水样中的粪大肠菌群。 如果接种的水样不是 10mL、 1mL 和 0.1mL，而是较低的或较高的三个浓度的水样量，也可查表 3 求得 MPN 值，再经下式计算成每 100mL 的 MPN 值。 附： （两种培养基也可以直接购买） 单倍乳 糖蛋白胨培养液成分； 10g 蛋白胨， 3g牛肉浸膏， 5g乳糖， 5g氯化钠， 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 1ml， 1000ml 蒸馏水。 配置时调节 pH： 7.2 7.4 EC 培养液成分： 20g 胰胨， 5g乳糖， 1.5g 胆盐三号， 4g磷酸氢二钾， 1.5g 磷酸二氢钾， 5g氯化钠， 1000ml 蒸馏水。灭菌后 pH为 6.9.
