梅州地区3309例女性人乳头瘤病毒检测结果及其基因类型分析.doc

1、1梅州地区 3309 例女性人乳头瘤病毒检测结果及其基因类型分析【摘要】目的了解 24种人乳头瘤病毒（Human papillomaviruses，HPV）型别在梅州地区女性人群中的最新感染情况及分布特点。方法采用赛乐其基因芯片检测方法对 2011年 12月到 2014年12月在妇科体检和就诊的 3309例不同年龄的女性患者进行了 HPV基因检测，分析最新 HPV亚型感染情况。结果 3309例受检者 HPV总感染率为17.47%，其中单一基因型别感染率 14.17%，双重感染率 2.60%，三重及以上感染率 0.7%。HPV 基因型分布阳性率居前 5位的是 HPV52（2.87%） 、HPV4

2、3（2.51%） 、HPV58（2.45%） 、HPV16（2.39%）和 HPV11（1.45%） 。感染率居前 3位的年龄段是60 岁（33.33%） ，2029 岁（19.14%） ，3039 岁（17.32%） ；2024 岁及60 岁年龄段与各组间（除 5559 岁）总感染率比较，差异均有统计学意义（P0.05） 。结论梅州地区女性 HPV感染率接近于国内平均感染率，感染率年龄分布呈 U型分布，HPV52、58、16 为地区主要的感染亚型，需要针对不同年龄段、易感人群定期进行 HPV核酸检测及基因分型筛查。 【关键词】人乳头瘤病毒；基因型别；宫颈癌 中图分类号：R737.33 文献标

3、识码：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2016.03.015 【Abstract】ObjectiveTo understand the latest infection 2status and distribution features of 24 kinds of Human papillomaviruses （HPV） among women in Meizhou area. MethodsSeiler vakuumtechnik gene chip detection method was adopted to perform HPV genetic tests

4、 of 3309 female of varoius ages， who came to gynaecology to examin and receive treatment from December， 2011 to December，2014.And the newest infection status of subtype HPV was analyzed.ResultsThe total infection rate of the 3309 patients was 17.47%， among which 14.17% were infected by single HPV ge

5、notype， 2.60% by two genotypes and 0.7% by three or more genotypes. The top five HPV genotype distribution positive rate were HPV52（2.87%） ， HPV43（251%） ， HPV58（2.45%） ， HPV16（2.39%） and HPV11（1.45%）. The highest infection rate ages were 60（3333%） ， 2029（19.14%） ， 3039（17.32%） ， differences of total

6、 infection rate of patients aged 2024， 60 and other age groups （except for 5559） were all statistically significant（P0.05）. ConclusionThe HPV infection rate of female in Meizhou area is close to the domestic average infection rate， and the age distribution of the infection rate is U type. The domina

7、nt genotypes of this area are HPV52，58 and 16. It is necessary to regularly carry out HPV nucleic acid detection and genotyping detection for women in different age groups and for the 3susceptible population. 【Key words】HPV；genotype；cervical cancer 人乳头瘤病毒（HPV）是一类具有高度种属及组织特异性感染人类皮肤及黏膜鳞状上皮，引起良性病变或恶性肿瘤

8、的小双股环状 DNA病毒，目前通过 DNA测序识别的 HPV基因型别已有 130余种1。大量流行病学研究证实，高危型人乳头状瘤病毒持续感染是宫颈癌发生发展的主要因素之一24。近几年来，在一些国家和地区发现宫颈癌的发病和死亡均有增长的趋势，尤其是宫颈癌的年轻患者开始增加5。为掌握20112014 年来梅州地区女性最新 HPV感染率及其型别的分布情况，以及 HPV感染与年龄的关系，采用赛乐其基因芯片检测方法对 3309名女性宫颈分泌物等进行了 HPV型别检测，现将结果报告如下。1 对象与方法 1.1研究对象收集 2011年 12月2014 年 12月来我院妇科或体检行 HPV DNA检查的 330

9、9例女性，年龄 2085 岁，中位年龄 38岁。将研究对象分为2029 岁、3039 岁、4049 岁，5059 岁，60 岁，共 5个不同年龄段。 1.2 样本采集所有待测标本均由临床医生采集，在无菌条件下，用宫颈刷伸入宫颈管内 2 cm，旋转数周并停留片刻后取出，将其放入生理盐水保存管中。通过抽提 DNA，经 PCR扩增后，采用赛乐其基因芯片方法进行 HPV DNA 24种分型的检测。24 种 HPV型别包括高危型16、18、26、31、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、MM4，以及低危型 6、11、42、43、44、83、84。 1.3 检测方法 D

10、NA提取：震荡混匀临床标本，取 1 ml 转移至 1.5 ml 4离心管中，12 000 rpm，离心 10 min，弃上清后，采用赛乐其基因组抽提试剂盒提取 DNA，具体操作步骤见试剂盒说明书，冷冻保存。将 PCR反应液及 DNA模板依次添加混匀成 25 L/反应的扩增反应体系，其中 DNA模板 5 L；另外，阴阳性对照各一管。扩增程序：50，2 min，9415 min，94 30 s，451 min，72 30 s，进行 40 个循环；72延伸 10 min 后，4密封保存备用；基因芯片检测：将 10 L 上述 PCR产物加入直用型杂交液中，混匀后加入基因芯片孔中，经 45水浴 35 m

11、in后，让其冷却至室温。经洗涤液洗涤后，加入直用型 BW反应液（100 L）室温下反应 15 min，洗涤后加入显色液 100 L 避光常温下反应 5 min，充分洗涤后，应用芯片自动分析系统进行判断。结果判断：使用自动分析报告系统检测，信号位置灰度值与背景灰度值大于 4为阳性，或肉眼观察检测结果，出现蓝色信号，信号斑点颜色有深浅，均代表阳性；多个圆点阳性即为多重感染。每张芯片上有 PCR 反应质控点和杂交显色质控点各一个。 1.4 统计学方法所有数据均采用 Excel软件进行整理，应用 SPSS 19.0软件进行统计学分析，计数资料的组间比较采用 2 检验，检验水准：=0.05。 2 结果

12、2.1HPV检测结果 3309例检测标本中，共检出 23种 HPV亚型，HPV感染 578例，总感染率为 1747%。其中，高危型总感染率为13.72%（454/3309） ，以 HPV52为主，检出率 2.87%；低危型总感染率为3.75%（124/3309） ，以 HPV43为主，检出率 2.51%。HPV 型别检测结果见表 1、表 2。 52.2HPV 感染基因型分布及多重感染情况分布单一基因型别者 469例，检出率 14.17%；双重感染者 86例，检出率 2.60%；三重及以上感染者 23例，检出率 0.7%。HPV 基因型分布阳性率居前 5位的是 HPV52（2.87%） 、HPV

13、43（2.51%） 、HPV58（245%） 、HPV16（2.39%）和 HPV11（1.45%） 。 2.3HPV 感染各年龄段分布如图 1所示，总 HPV 阳性率居前 3位的是60 岁（33.33%） ，2029 岁（19.14%） ，3039 岁（17.32%） ，各年龄段总 HPV感染率比较（P=0.0070.01）有统计学意义。如表 3所见，2024 岁及60 岁年龄段与各组间（除 5559 岁）总感染率比较，差异均有统计学意义（P005） 。 3 讨论 宫颈癌是发病率仅次于乳腺癌之后的女性恶性肿瘤，据世界范围内统计，每年约有 50万的新发病例，占所有癌症新发病例的 5%，其中 8

14、0%的病例发生在发展中国家7。我国每年约有 13.15万的新发病例，占世界宫颈癌新发病例总数的 28.8%7。有研究证明持续性高危型 HPV感染和多重感染是宫颈癌发生的必要条件24，因此通过对 HPV感染的筛查，对于宫颈癌前病变的提前发现，以及减少宫颈癌的发病率和病死率有其重要的意义。 HPV 感染是常见的性传播疾病，在女性的一生中，感染 HPV的概率大于 75%，但大多可自然消除8。在国内，广州地区 HPV感染率为35.33%，山东地区为 29.38%9，10，本研究对 3309名本地区女性进行HPV型别检测，发现人群总感染率为 1747%，与深圳地区女性 17.6%HPV 感染率接近11，

15、高于李霓等人12报道 16.1%的中国妇女人乳头瘤病毒6感染率。结果显示与国内其他地区有一定差异，可能与研究的目标人群或采用的检测方法不同造成；另外，检测结果低于杨海坤等13报道的客家女性 20.67%HPV总感染率，分析可能与梅州近年大力宣传健康医疗，以及开放旅游、外来人口数增加有关。 目前在世界范围内流行最为广泛的为高危型 HPV16 和 HPV18，在世界各地区间没有明显差异，而其他高危型别的分布则有着明显的差异14。Clifford GM等15对 11个国家 15 613名无宫颈病变妇女的 HPV型别研究中发现，人群中主要的感染型别为HPV16、HPV42、HPV58、HPV31、HP

16、V18、HPV56、HPV81、HPV35、HPV33和 HPV 45。而在国内对山西阳城县、深圳市和沈阳市三个地区的感染调查中，则发现 HPV16、HPV52、HPV58 是妇女感染的主要高危型别12。通过研究发现，梅州地区 HPV高危型感染前 5名分别为HPV52、HPV58、HPV16、HPV33、HPV31，这与 Lin等17的研究结果相似，与李利平等18报道的客家地区主要感染型别HPV16、HPV58、HPV52、HPV31、HPV33 略有差异，本研究对象为妇科就诊患者及体检者，不能完全代表各型别在自然人群中的感染率，但检测结果可以分析各型别的大致分布情况。结果分析表明梅州地区女性

17、 HPV感染的优势型别主要为 HPV52、HPV58、HPV16 型，其中 HPV52检出率高于HPV16，可能是 HPV变异体与宿主免疫系统间的相互作用有关18；另外，在感染 HPV的过程中，70%90%的 HPV感染可被免疫系统自然清除8，可能导致同一地区不同时间段 HPV感染率及感染型别发生变化。因此，在开展地区性的 HPV疫苗接种前有必要研究该地区最新型别分布及主要7感染型别。 HPV 感染的影响因素中，包括地区、年龄、性生活开始时间、生活习惯等相关因素，其中年龄是其重要的一项因素。de Sanjos S等19对相关报道的统计分析发现，HPV 感染高峰主要在 34岁之前，在 3544

18、岁年龄段 HPV感染率逐渐降低，在 4554 岁除亚洲地区外其他地区的 HPV感染率又有所升高。张劲松等20的研究结果则显示，女性 HPV感染高峰在 29岁以下和 50岁左右，感染率年龄分布呈“S”形分布。本研究结果发现 2029 岁和60 岁年龄段感染率较高，其中又以2024 岁及60 岁年龄段感染更严重，与各组间（除 5559 岁）总感染率比较均有显著性差异，随着年龄的增加 HPV的感染率开始逐渐下降，在 5559 岁年龄段又开始升高，并在60 年龄段中达到一较高的感染率。感染率年龄分布与 Franceschi S等21的研究结果基本一致，感染高峰呈明显的 U型分布，说明女性越年轻，开始性

19、生活时间越早越活跃，感染 HPV的概率越高，而中老年女性由于正处于围绝经期，激素的波动可能导致机体生理及免疫力开始下降，使得对病毒的抑制及清除能力明显减弱。所以有必要针对本地区 2024 岁及55 岁年龄段女性人群开展HPV宣传教育，并建议其每年体检，从而降低 HPV的感染率。 综上所述，通过分析 20112014 年 3309例的 HPV检测结果，发现梅州地区女性最新 HPV感染率接近国内平均感染率，感染率年龄分布呈U型分布，HPV52、HPV58、HPV16 为地区主要的感染亚型，需要针对不同年龄段、易感人群加大卫生健康宣传教育，定期进行 HPV核酸检测及基因分型筛查。 参考文献 81Mu

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